新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达

本研究旨在克隆表达新疆野生盘羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。首先,利用RT-PCR和RACE技术克隆盘羊ISG15基因的cDNA全长序列,再将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni 2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,最后通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的新疆野生盘羊ISG15基因cDNA全长为642bp,开放阅读框为474bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33ku,表达的蛋白可用Ni 2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。

盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对绵羊外周血淋巴细胞转化的影响

为比较不同品种羊的重组干扰素刺激基因15（IFN—stimulated gene，ISG15）蛋白对淋巴细胞转化效果影响的差异，试验比较了5种浓度的盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对培养的绵羊外周血淋巴细胞转化的影响。结果表明，添加盘羊重组ISG15蛋白浓度为10-80ug／mL时，D570nm值均显著高于PBS对照组（P〈0．05）；添加巴什拜羊重组ISG15蛋白浓度为40～80ug／mL时，D570nm值均显著高于PBS对照组（P〈0．05）；而各种浓度的杂交羊ISG15组与PBS对照组相比差异均不显著（P〉0．05）。提示，盘羊和巴什拜羊的重组ISG15蛋白在一定浓度下能有效地刺激淋巴细胞转化，且随蛋白浓度的增加对淋巴细胞转化作用增强，而杂交羊重组ISG15蛋白对外周血淋巴细胞转化无显著影响。

新疆巴什拜羊ISG15基因的克隆表达及活性检测

克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。

浅析实验教学的改革与创新

高校是培养高素质人才的基地,不仅要让学生掌握过硬的基础理论知识和专业知识,同时还要让学生有较强的实验动手操作、综合分析和创新能力。相比之下,后者更为重要,而这些能力是通过实验教学获得的,因此,必须重视实验教学,加强实验教学管理及实验教学模式的改革与创新。

昌吉州布病防控工作思考及建议

布鲁氏菌病(简称“布病”)是一种人畜共患病,近年来在全国均有复发抬头态势,对公共卫生安全和养殖业健康发展危害较大。新疆为全国布病高发区,防控压力不断增加。昌吉州作为新疆畜牧业大州,高度重视布病防控工作,通过落实免疫、监测、检疫、宣传等多种防控措施,在布病防控方面进行了积极探索。同时,也面临着诸多防控难点和问题,提出了一些建议和思考。

昌吉州牛羊布病综合防控技术集成(规范)

近年来,新疆布病呈现抬头趋势,严重危害公共卫生安全和畜牧业健康发展。采取免疫、监测、净化、消毒等综合防控措施,做好畜间布病防控工作,具有重要意义。本文对昌吉州布病防控技术进行了归纳和分析,制定本技术集成(规范),全力推进布病防控工作迈上新台阶。

盘羊体内绵羊肺炎支原体的分离和鉴定

为查明某动物园的盘羊发生呼吸道疾病的原因,本研究在发病的盘羊群中无菌采集28份鼻腔棉拭子和1份肺组织病料样品。采用支原体专用培养基从4份鼻腔棉拭子和1份肺组织病料样品中分离出5株支原体,连续3次克隆纯化后,通过形态观察、理化试验、PCR及基因特征鉴定,证明分离到的支原体均为绵羊肺炎支原体(MO)。将支原体分离株气管接种4只60日龄健康绵羊,10 d后2只绵羊陆续出现呼吸症状,其中1只伴有明显的体温变化,峰值达41.2℃,其余3只人工感染羊和对照组的羊体温变化不明显。35 d迫杀剖检,1只人工感染羊的肺脏前叶粉色实变明显,显微病理变化主要呈现间质增生性肺炎,其它羊肺脏病变不明显;经培养鉴定和PCR检测,从4只人工感染羊的肺脏样品中再次分离出MO。结果表明引起盘羊发病的病原为MO,本研究为野生盘羊支原体肺炎的快速诊断和防治提供参考依据。

ISG15蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用

为研究重组绵羊ISG15蛋白(rISG15)对感染绵羊肺炎支原体后的盘羊杂交羊的免疫调节效果,本研究将18只盘羊杂交羊随机分为A、B、C 3个组,6只巴什拜羊为D组,全部人工感染绵羊肺炎支原体(CCU=106),感染5 d后A和D组肌肉每天注射生理盐水作为对照组;B和C组每天分别肌肉注射盘羊杂交羊和巴什拜羊的rISG15 200μg/只,并采用荧光定量PCR方法检测试验羊不同时间血液中ISG15、IL-12、IFN-γ的表达水平。结果显示,IFN-γ表达水平在感染第14 d,B组显著高于A、D组(p<0.05),第21 d,B、C组显著高于A、D组(p<0.05);ISG15的表达量在第14 d与21 d,B、C、D组的表达水平显著高于A组(p<0.05);而在此期间,A组的IL-12表达水平显著高于其它各组(p<0.05),但仅A组出现50%的死亡率。实验数据表明rISG15对易感的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节效果,为绵羊支原体肺炎防治提供了实验依据。

盘羊肺炎支原体感染PCR检测方法的建立与初步应用

羊支原体性肺炎,是由支原体引起的一类高度接触性传染病,又称羊传染性胸膜肺炎（Infections pleuropneumonia of sheep and goats）,临床症状主要表现为高热、咳嗽、消瘦、

阿勒泰羊BMP15基因的多态性

为寻找和筛选与羊繁殖力相关的遗传标记,采用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术检测BMP15基因在阿勒泰羊中的单核苷酸多态性。结果表明:在检测的92个阿勒泰羊个体中,BMP15基因在外显子1位点呈多态性,具有AA、AB和BB 3种基因型。阿勒泰羊AA基因型频率为0.695,AB基因型频率为0.120,BB基因型频率为0.185。该段DNA序列存在3个碱基缺失,这个突变导致野生型(AA)氨基酸序列上相应的10号氨基酸残基亮氨酸缺失,变为突变基因型BB,形成B1突变体;在阿勒泰羊的BMP15基因中未检测到B2和B4突变。

新疆细毛羊pEGFP-C2-KAP6.1真核表达质粒的构建与鉴定

试验采集新疆细毛羊皮肤组织,提取RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出KAP6.1基因,并通过DNA重组技术将该基因片段重组于pEGFP-C2真核表达载体上,构建pEGFP-C2-KAP6.1重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定。结果表明,本试验成功构建了新疆细毛羊的pEGFP-C2-KAP6.1真核表达重组质粒,为进一步研究该基因所编码的蛋白与毛品质的关系,以及培育超细羊毛等经济性生物学性状相互关系提供理论依据。

新疆细毛羊KAP6.1基因的克隆及序列分析

根据绵羊毛囊角蛋白关联蛋白(KAP)6.1(登录号为AY483218.1)基因序列设计合成2个特异性引物,以新疆细毛羊为研究对象,从采集的皮肤组织中提取RNA进行RT-PCR反应,扩增出长度为320 bp的特异性片段,回收目的片段并连接至pMD18-T载体后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,检测阳性克隆、测序并进行分析。结果表明:试验成功克隆了新疆细毛羊KAP6.1基因,得到的长度为320 bp序列中包含252 bp的编码区序列。新疆细毛羊与绵羊亲缘关系最近,同源性为99.2%,与山羊同源性为94.8%,有13处核苷酸差异与人和兔的同源性分别为80.8%、75.1%。

盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对体外绵羊肺炎支原体感染的影响

为研究盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对体外绵羊肺炎支原体感染的影响,首先分离试验羊的淋巴细胞,分别将盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白和绵羊肺炎支原体加入体外培养的淋巴细胞中共同孵育,利用real-time PCR技术检测肺炎支原体16SrRNA的表达水平。结果表明,体外淋巴细胞与绵羊肺炎支原体、重组ISG15蛋白共培养12h到96h,盘羊和巴什拜羊重组ISG15蛋白组的肺炎支原体的16SrRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),而杂交羊重组ISG15蛋白组的肺炎支原体的16SrRNA表达水平与对照组差异不显著(P>0.05)。说明盘羊和巴什拜羊重组ISG15蛋白在体外可对绵羊肺炎支原体起到抑制作用。

绵羊ISG15基因的克隆表达与纯化

为了克隆并表达绵羊ISG15,且对其表达产物进行纯化,首先从绵羊外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增出ISG15的基因;再通过基因克隆技术,构建ISG15在pET28a中的重组表达质粒pET28a-ISG15,在大肠杆菌BL21(DE3)用IPTG进行诱导表达,得到ISG15的原核表达蛋白;最后采用Ni 2+-NTA亲和层析方法纯化目的蛋白。结果显示:克隆的绵羊ISG15基因序列长度为541bp,编码157个氨基酸。重组表达产物通过SDS-PAGE可检测到相对分子质量为25ku的重组蛋白,且表达的目的蛋白能被Ni 2+-NTA亲和层析方法所纯化。该研究为后续深入研究绵羊ISG15奠定基础。

2种检测阿勒泰羊Fec^B基因酶切产物方法的比较

为了比较3%琼脂糖凝胶和12%非变性聚丙烯酰胺凝胶的溴化乙锭(EB)染色法检测阿勒泰羊FecB基因酶切产物的准确性,试验采用通用引物对阿勒泰羊的FecB基因序列进行PCR扩增,通过限制性内切酶AvaⅡ对扩增产物进行酶切消化,用EB染色的琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶检测相同条件下酶切的FecB基因产物,通过紫外凝胶成像仪(型号为Gel Doc 2000)进行比较,分析结果。结果表明:EB染色的12%非变性聚丙烯酰胺凝胶所得的酶切结果明显优于3%琼脂糖凝胶所得的酶切结果,因此可采用EB染色的12%非变性聚丙烯酰胺凝胶检测FecB基因。

巴什拜羊ISG15基因的克隆与序列分析

本研究旨在了解新疆巴氏拜羊类泛素蛋白ISG15基因的序列特征。采集巴什拜羊外周血液,从中分离得到淋巴细胞并提取RNA,设计特异性引物进行RT-PCR,克隆出巴什拜羊ISG15基因序列,回收PCR产物与pMD18-T载体连接后转化DH5α,检测阳性克隆、测序并进行序列分析。结果表明,克隆的巴什拜羊ISG15基因编码区全长为522bp,编码172个氨基酸。BLAST结果表明,巴什拜羊ISG15基因与绵羊、山羊、小尾寒羊、水牛、牛和野猪的ISG15基因序列同源性分别为99%、98%、95%、94%、94%和82%。构建基因进化树分析结果显示,巴什拜羊与绵羊先聚为一类,再与小尾寒羊聚为一类,然后和牛聚为一类。该聚类结果与生物学上的分类一致。

杂交盘羊绵羊传染性胸膜肺炎支原体的诊断及防控

绵羊肺炎支原体(MO)是引起绵羊传染性胸膜肺炎的病原体,本研究主要从常规细菌学方法及分子生物学方法等对石河子公园野生盘羊发生疑似传染性胸膜肺炎病例进行了病原学诊断,探究该病的病原特性,从而为该病防治措施提供参考依据。

现代化商品蛋鸡养殖场运营管理

近几年,我国应运而生的民营高度集约化、科学化、标准化、市场化的蛋鸡新型产业已经快速兴起,加之人工成本及管理成本的不断增加,标准化、适度规模化、自动化、智能化鸡舍在全国各地大范围普及,未来蛋鸡产业的发展必然是在精细化管理和防疫的基础上,“人管机器,机器养鸡”全面向追求高效能、高产出发展方向成为未来行业的必然选择,现代化商品蛋鸡养殖场运营管理模式的研究也已经成为当前产业发展重点课题之一。

关于推进新疆畜牧业高质量发展的思考

坚持以习近平新时代中国特色社会主义思想为指导,贯彻落实中央经济工作和中央农村工作会议精神,以畜牧业生产和环境保护协调发展为主题,立足维护畜牧产业生产安全、生物安全、生态安全和公共卫生安全大局,大力提升种质资源,推进现代畜牧兽医技术的推广和应用,补齐现代畜牧业发展短板,推动新疆畜牧业高质量发展。

新疆昌吉州动物防疫信息无纸化建设中存在问题与建议

该文通过在近期动物防疫信息的无纸化建设实践中积累的一些经验和体会,提出动物防疫信息无纸化建设的意义,对动物防疫信息无纸化建设现状进行分析,并对目前存在的问题提出建议。