达格列净对腺嘌呤诱导高尿酸血症肾病小鼠的保护作用机制

目的 评估达格列净在高尿酸血症肾病(HN)小鼠中的保护作用和潜在的机制。方法 选用8周龄雄性ICR背景小鼠,利用高腺嘌呤饲料诱导HN模型,予以达格列净干预。小鼠分为以下4组:正常组(n=8)、腺嘌呤组(n=8)、正常+达格列净组(n=8)和腺嘌呤+达格列净组(n=6)。检测血清肌酐、尿素氮、尿酸和乳酸脱氢酶的水平;过碘酸-希夫(PAS)染色和MASSON染色观察肾病理改变;免疫组化染色和蛋白质免疫印迹检测肾纤维化和NLRP3炎症小体通路的表达水平。结果 与正常组相比,腺嘌呤诱导的HN小鼠组的血肌酐、尿素氮、尿酸和乳酸脱氢酶的水平均显著升高(P<0.05);而给予达格列净治疗的腺嘌呤肾病小鼠的血肌酐、尿素氮、尿酸和乳酸脱氢酶均显著下降(P<0.05)。通过蛋白免疫印迹和免疫组化染色均发现,腺嘌呤诱导的HN小鼠肾中α-SMA表达显著上调,经过达格列净的治疗,肾中α-SMA得到明显抑制(P<0.05)。MASSON染色显示,腺嘌呤肾病小鼠肾间质纤维化(13.25±0.21)较正常组(1.49±0.12)严重(P<0.05),经过达格列净的治疗,肾间质纤维化程度(8.66±0.78)较腺嘌呤组明显缓解(P<0.05)。腺嘌呤诱导的HN小鼠肾中NLRP3和Caspase-1表达显著上调和活化(P<0.05),经过达格列净的治疗,肾中NLRP3和Caspase-1的活化得到明显抑制(P<0.05)。结论 达格列净可有效减轻HN小鼠肾功能的恶化、肾间质纤维化和炎症浸润,这种保护效应可能是通过抑制NLRP3炎症小体的活化而发挥作用。

心脏代谢指数与2型糖尿病肾脏病的相关性研究

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者心脏代谢指数(CMI)与糖尿病肾脏病(DKD)的相关性。方法 选择2018年2月至2022年7月在南京鼓楼医院就诊且被诊断为T2DM的173例患者,根据是否合并DKD,分为单纯T2DM组(n=89)和DKD组(n=84)。比较两组患者临床资料的差异,采用二元logistic回归分析DKD的风险因素,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估CMI对发生DKD的预测价值。结果 两组患者糖尿病病程、身体质量指数、腰围、腰高比、收缩压(SBP)、舒张压、空腹血浆血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、CMI、血尿酸(SUA)差异均有统计学意义(P<0.05)。二元logistic回归分析显示,SBP(OR=1.042,95%CI:1.020~1.066)、糖尿病病程(OR=1.110,95%CI:1.047~1.176)、HbA1c(OR=1.434,95%CI:1.183~1.738)、CMI(OR=5.069,95%CI:2.254~11.401)、SUA(OR=1.005,95%CI:1.000~1.010)是DKD发生的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,CMI的曲线下面积为0.794,最佳截断点为0.529时,灵敏度为0.910,特异度为0.619。结论 CMI是T2DM患者DKD发生的危险因素,对DKD的发生具有较高的预测价值。

血管紧张素Ⅱ灌注在脂质肝损伤中的作用研究

目的:通过制备血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注模型,观察AngⅡ在脂质肝损伤中的作用及其可能的机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、AngⅡ灌注组及AngⅡ灌注加AngⅡ1型受体(AT1R)基因敲除组。采用HE、菲律宾、油红0染色以及胞内胆固醇定量测定法观察肝细胞内脂质沉积情况;免疫组化、蛋白质印迹法检测低密度脂蛋白受体(LDLR)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)及其裂解激活蛋白(SCAP)表达水平。结果:AngⅡ刺激增加C57BL/6小鼠肝细胞内脂质沉积,且上调LDLR、SREBP-2和SCAP的表达。而AT1R基因敲除组C57BL/6小鼠肝细胞内脂质沉积明显减少,LDLR通路的相关蛋白表达也显著下调。结论:AngⅡ通过AT1R诱导LDLR负反馈调节失调,进而增加胆固醇内流、肝细胞内脂质过度沉积,介导脂质肝损伤的发生。

血小板微粒活化促进糖尿病肾病肾小球内皮细胞损伤

目的本研究拟探讨血小板微粒活化在糖尿病肾病早期肾小球内皮细胞损伤中的作用.方法8龄♂ SD大鼠随即分为3组：对照组（Control）、糖尿病组（DM）、糖尿病＋阿司匹林组（DM＋Aspirin）.糖尿病模型通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）60mg·kg^-1体重诱导,于8周处死老鼠,收集尿液、血浆、肾脏组织标本,提取血PMP.流式细胞仪检测血清血小板微粒（PMP）水平、电镜观察PMP形态.酶联免疫吸附（ELISA）测定各组大鼠尿微量白蛋白肌酐比（ACR）.蛋白芯片筛查各组PMP炎症因子的表达,并通过免疫组化及Westernblot观察炎症因子在肾脏中的表达.电镜观察肾小球内皮细胞表层（ESL）及窗孔的变化,麦胚凝集素染色观察ESL厚度,免疫荧光及Westernblot检测内皮细胞标志物、表面核心蛋白、细胞连接蛋白及细胞外基质的变化,以反映各组内皮细胞的损伤程度的差异.各组PMP水平及炎症因子表达与肾小球内皮损伤进行相关性分析,观察PMP对肾小球内皮细胞损伤的作用.结果与对照组比较,DM大鼠血清PMP水平明显增加,Aspirin减少糖尿病大鼠PMP的水平.同时,Aspirin明显降低了DM大鼠PMP、血清及肾脏中的炎症因子的表达.DM大鼠ACR明显高于对照组,Aspirin明显减少DM大鼠ACR的水平.DM组与对照组比较,肾小球内皮细胞ESL厚度减少、窗孔部分消失,内皮细胞特异性标志物、细胞连接蛋白及表面核心蛋白表达均明显减少,细胞外基质表达增加,而Aspirin可改善糖尿病大鼠的肾小球内皮细胞损伤.PMP水平及炎症因子的表达与肾小球内皮细胞损伤呈明显相关性.结论糖尿病肾病早期,血清PMP通过活化、释放炎症因子,诱导肾脏炎症反应,促进肾小球内皮细胞损伤,加速糖尿病肾病的进展.

注射催产素对小鼠骨密度和成骨细胞分化影响的实验研究

目的通过建立雌性小鼠骨质疏松模型并给予催产素( oxytocin,OT)腹腔注射来验证催产素对骨代谢的调控作用。方法选取同批次2 月龄雌性C57 /B6 小鼠15 只,随机分成3 组,每组5 只:①对照组( C),②造模组( OVX),③造模+催产素注射组( OVX+OT)。注射催产素前和注射8 周后分别测定各组小鼠左股骨和腰椎L4~ 6的骨密度,并提取小鼠骨髓细胞定向诱导分化,进行碱性磷酸酶( alkaline phosphatase,ALP)和Von Kossa 染色以鉴定成骨细胞分化水平,通过qPCR检测分化相关因子表达水平。结果OVX 组小鼠骨密度较C 组显著降低( P<0. 001),OVX+OT 组小鼠骨密度较OVX 组显著升高( P<0. 001)。ALP 染色显示,OVX 组成骨细胞分化较C 组差,细胞集落最少;OVX+OT 组成骨细胞分化情况较OVX 组好,染色面积增加了322. 5%。Von Kossa 染色发现OVX 组细胞集落和钙结节较C 组少且小,OVX+OT 组细胞集落和钙结节较OVX 组多,染色面积增加了62. 3%。而进一步添加催产素体外培养的成骨细胞其分化水平均比未加入催产素组有所提高。qPCR结果显示催产素能够促进成骨相关基因OPN、Runx2 和Osterix 的表达( P<0. 001)。结论催产素促进小鼠体内的骨合成代谢作用,提示其对骨质疏松症治疗具有潜在用途。

血细胞微粒与慢性肾脏病

微粒（MPs）是细胞活化或凋亡时细胞膜出芽释放的直径为0.1~1μm的无核微小囊泡状物质。MPs膜外侧表达含阴离子的磷脂酰丝氨酸及特异性母细胞源性蛋白质,同时MPs携带母细胞质的某些成分（DNA和RNA等）。通过检测MPs膜蛋白质抗体可判断其母细胞来源,从而判断疾病起源。研究表明,慢性肾脏病（CKD）患者血循环中MPs产生显著增加,MPs在CKD发生、发展中起重要作用。开展MPs检测等相关研究可能为临床上阐明MPs在CKD发生中的作用、监测病情进展、判断药物疗效及疾病预后提供借鉴和帮助。因此,本文旨在对MPs在CKD中的作用作一综述。

抑制环氧化酶2表达对糖尿病肾病足细胞损伤的影响

目的 观察环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)介导的低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLr)表达失调在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期足细胞损伤中的作用.方法 选取8周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,采用链尿菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病大鼠模型,造模成功后按照简单随机抽样原则分为对照(Control)组、糖尿病(diabetic mellitus,DM)组、DM+阿司匹林(Aspirin)组,每组10只.于第12周收集24 h尿液、检测尿微量白蛋白/肌酐比值(microalbumin to creatinine ratio,ACR),并于第12周处死,收集血标本,检测血脂谱,留取肾组织.免疫组化及Western印迹法观察COX-2、LDLr、胆固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element-binding protein-2,SREBP-2)及其裂解激活蛋白(SREBP cleavage-activating protein,SCAP)在肾脏的表达情况,免疫荧光法观察COX-2与WT-1在肾脏的共表达情况.透射电镜观察足细胞超微结构的改变,免疫组化及Western印迹法观察足细胞特异性标志蛋白WT-1及nephrin在肾脏的表达情况.分析COX-2与LDLr表达的相关性.油红0染色及胞内游离胆固醇定量测定法观察肾小球脂质沉积情况.结果 与对照组相比,DM组大鼠尿ACR显著升高(P＜0.01),肾脏COX-2及LDLr、SCAP、SREBP-2蛋白的表达显著增加(P＜0.01),足细胞损伤加重(P＜0.01),肾小球内有显著的脂质沉积(P＜ 0.01),而DM+Aspirin组上述改变明显减轻(P＜0.05).并且COX-2的表达与LDLr的表达呈正相关(r=0.85,P＜0.01).激光共聚焦荧光显微镜观察证实,大鼠肾脏COX-2与足细胞特异性标志物WT-1存在共表达.结论 COX-2的过度表达加重了DN足细胞损伤,其机制可能与破坏LDLr负反馈调节、上调肾脏足细胞LDLr表达、增加细胞内胆固醇摄入,致使肾小球足细胞内脂质过度沉积有关.抑制COX-2表达能减轻糖尿病足细胞损伤.

炎性反应激活CXC型趋化因子配体16信号通路进而促进糖尿病肾病进展

目的探讨微炎症状态下CXC型趋化因子配体16（CXC chemokine ligand 16,CXCL16）及其受体CXC型趋化因子受体6（CXC chemokine receptor6，CXCR6）途径在糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）进展中的作用。方法8周龄雄性2型糖尿病小鼠（db／db小鼠）随机分为DN组（n=8）和DN微炎症组（n=8）。参照本课题组既往建立的方法，背部皮下注射10％酪蛋白制备微炎症模型。体外肾小管上皮细胞（HK-2细胞）分为高糖组和高糖＋IL-1β组，观察各组细胞中脂质沉积及细胞损伤的情况；并应用RNA于扰沉默CXCL16的表达，分为高糖＋IL-1β组、高糖＋IL-1β＋siCXCL16组、高糖＋IL-1β＋空载体组，以验证CXCL16信号通路的作用。24h尿蛋白量及尿N-乙酰-β—D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）评估8周内小鼠。肾功能变化，电镜观察第8周肾组织的超微结构。Filipin染色及细胞内游离胆固醇定量观察肾组织及HK一2细胞中胆固醇沉积情况；免疫组化、Western印迹检测肾组织CXCL16信号通路相关分子（CXCL16、CXCR6、解整合素样金属蛋白酶10）、纤维化相关分子（纤连蛋白和α平滑肌肌动蛋白）的蛋白表达；实时定量PCR和Western印迹分别检测HK-2细胞中CXCL16信号通路相关分子、纤维化相关分子的mRNA和蛋白表达，及细胞免疫荧光检测HK-2细胞中CXCL16信号通路相关分子表达。结果微炎症组小鼠24h尿蛋白量及尿NAG高于DN组，第8周两组差异均有统计学意义（均P〈0．05）。与DN组比较，微炎症组小鼠电镜下肾小管细胞中空泡增多，同时伴有线粒体水肿、变形以及数量减少；且微炎症组小鼠肾组织中的胆固醇沉积，纤维化相关分子的蛋白表达均高于DN组（均P〈0．05）；进一步研究表明，与DN组比较，微炎症组小鼠肾组织CXCL16信号通路相关分子的蛋白表达均增加（均P〈0．05）。体外高糖＋IL-1β组细胞CXCL16信号通路相关分子、纤维化相关分子的mRNA和蛋白表达及胆固醇沉积均高于高糖组（均P〈0．05）；转染siRNA后，与高糖＋IL-1β组比较，高糖＋IL-1β＋siCXCL16组HK-2细胞CXCL16信号通路相关分子、纤维化相关分子的mRNA及蛋白表达均降低（均P〈0．05），胞内胆固醇沉积和胆固醇酯的含量减少（P〈0．05）。结论微炎症可加剧DN肾小管间质损伤，而下调CXCL16的表达可改善HK-2细胞的脂质沉积及细胞损伤。其中机制可能与CXCL16／CXCR6途径和胞内脂质沉积有关。

炎性反应激活CXCL16／CXCR6通路促进终末期肾病动脉粥样硬化

目的研究炎性反应时CXC趋化因子配体16（CXC chemokine ligand 16，CXCLl6）／CXC趋化因子受体6（CXC chemokine receptor 6，CXCR6）通路对终末期肾病（ESRD）动脉粥样硬化进展的影响，并进一步探讨其机制。方法根据血清C反应蛋白（CRP）的水平将40例ESRD患者分为对照组（CRP〈3．0mg／L，n=15）和炎症组（CRP≥3．0mg／L，n=25）。临床检测患者的生化指标和脂质谱。取ESRD患者动静脉内瘘手术时部分切除的桡动脉组织，HE染色、Filipin染色观察桡动脉组织泡沫细胞形成和胆固醇沉积情况；免疫组化和免疫荧光染色检测桡动脉组织中CXCL16／CXCR6通路相关蛋白、嘌呤受体P2X配体门控通道7（purinergicreceptor P2X ligand-gated ion channel7，P2X7R）蛋白表达，以及炎性因子单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、CD68的表达。结果与对照组比较，炎症组ESRD患者桡动脉组织中MCP-1、TNF-α的表达和巨噬细胞浸润均增加（均P〈0．05）。进一步分析发现，与对照组相比，炎症组患者桡动脉中的泡沫细胞和胆固醇沉积明显增加，CXCL16、CXCR6和解整合素样金属蛋白酶（a disintegrin and metalloproteinase，ADAM）10的表达均升高（均P〈0．05）。且ESRD患者桡动脉中CXCL16蛋白的表达与血浆中CRP水平呈正相关（r=0．79，P〈0．05），与桡动脉组织中P2X7R蛋白表达呈正相关（r=0．65，P〈0．05）。结论炎性反应通过激活CXCL16／CXCR6通路促进ESRD患者桡动脉中泡沫细胞的形成，进而促进动脉粥样硬化，且P2X7R活化可能参与该过程的调节。

脂蛋白a促进终末期肾病患者动脉粥样硬化进展

目的:研究脂蛋白a(lipoprotein a,Lpa)在终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)动脉粥样硬化中的作用,并进一步探讨CXC趋化因子配体16(CXC chemokine ligand 16,CXCL16)和低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLr)是否介导了Lpa的胞内摄入。方法:根据血浆Lpa质量浓度将46例ESRD患者分为对照组[ρ(Lpa)<300 mg·L^(-1),n=23]和高Lpa组[ρ(Lpa)≥300 mg·L^(-1),n=23]。检测两组患者的生化指标和脂质谱。取ESRD患者动静脉内瘘手术时桡动脉边缘切除的组织,HE染色观察其泡沫细胞形成、Filipin染色观察其胆固醇沉积;免疫组化和免疫荧光染色观察其Lpa的沉积;免疫组化观察LDLr和CXCL16的表达;免疫荧光共染分别观察Lpa和LDLr、Lpa和CXCL16的共表达。结果:与对照组比较,高Lpa组ESRD患者的桡动脉中泡沫细胞增多、胆固醇沉积增加、Lpa沉积增加、CXCL16和LDLr表达增加(均P<0.05);相关性分析显示,血浆Lpa质量浓度与Lpa沉积程度(r=0.72,P<0.01)、LDLr表达(r=0.54,P<0.01)、CXCL16表达(r=0.6,P<0.01)均呈正相关。进一步免疫荧光共染发现,高Lpa组的桡动脉组织中Lpa与LDLr、CXCL16共表达均增加(均P<0.05)。结论:Lpa在ESRD患者桡动脉中沉积,促进泡沫细胞形成,进而导致动脉粥样硬化的发生,LDLr和CXCL16可能是介导Lpa进入桡动脉组织细胞内的主要脂蛋白受体。