外泌体在膀胱癌中的研究前景周万明综述,鲁雄兵校审

外泌体(exosomes)是由细胞主动分泌、直径约为40~100nm的脂质双分子层结构囊泡。外泌体通过直接膜融合、受体-配体间作用和内吞/吞噬作用3种方式将携带的信号从外泌体转移到受体细胞并发挥其广泛的生物学作用。膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤之一,外泌体在膀胱癌的发生、生长和转移等过程具有调控作用,外泌体携带的许多分子都有成为膀胱癌诊断标志物的潜力。本综述旨在介绍外泌体的生物学特征以及外泌体在膀胱癌的诊断、治疗方面的研究前景。

药物结晶导致的急性双侧输尿管梗阻性无尿的诊断和微创治疗

目的总结药物结晶导致的双侧输尿管梗阻性无尿的诊断和微创治疗经验。方法回顾性分析2例药物结晶导致的急性双侧输尿管梗阻性无尿患者的临床资料。结果 2例患者均于点滴抗生素后出现无尿、腰部疼痛、血肌酐水平升高,B超和KUB平片均不能明确诊断;64排CT平扫双侧输尿管下段可见稍高密度阴影,最大密度投影(MIP)显示输尿管下段高密度阴影,CT值为30～128Hu;1例行输尿管镜检查;1例行膀胱镜检查,2例术中放置双J管后即解除梗阻。B超随访2个月无肾积水,肾功能良好。结论药物结晶导致的双侧输尿管梗阻,传统的B超和KUB检查不能明确诊断,64排CT平扫双侧输尿管以及扫描后的MIP成像可以帮助明确诊断;行输尿管镜下或膀胱镜下放置双J管,可以达到积极治疗目的。

肾结核病灶中淋巴细胞趋化因子的表达

目的:探讨淋巴细胞趋化因子在正常肾脏和肾结核中的表达以及淋巴细胞趋化因子和浸润CD4+、D8+T细胞在肾脏结核病灶中的分布特点。方法:6例正常肾脏和10例肾结核病变组织,经匀浆后,采用RT-PCR法扩增人淋巴细胞趋化因子(hLptn)的含编码区序列的cDNA;扩增cDNA的克隆至pGM-TEasy T载体,测序;应用免疫组织化学方法检测正常肾脏和肾结核中的hLptn的表达和结核病灶中的CD4、CD8分子的表达。结果:正常肾脏和肾结核组织均表达hLptnmRNA,应用RT-PCR法克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列一致;hLptn在正常的肾小球、肾小管中和结核病变中残存的肾小球、肾小管中均有表达;结核病变中有散在的CD4和CD8分子阳性细胞,与hLptn的分布无重叠。结论:淋巴细胞趋化因子在肾脏的肾小球和肾小管中呈结构性表达,肾结核肉芽肿中淋巴细胞的募集可能非依赖于hLptn的作用。

人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及其在细胞中的表达(英文)

目的构建人淋巴细胞趋化因子(humanlymphotactin,hLptn)真核表达质粒,并在膀胱肿瘤细胞株BIU-87中的表达重组质粒。方法用RT-PCR法自活化的人外周血淋巴细胞扩增hLptn的含编码区序列的cDNA,克隆至pGM-TEasyT载体,测序正确后,将目的片段插入pcDNA3.1(+)载体,获得阳性克隆pcD-NA3.1(+)-hLptn,用脂质体将其转染BIU-87细胞,经G418筛选稳定表达克隆,用免疫荧光染色技术鉴定经筛选的克隆。结果克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列编码区内第225位碱基不同,系同义突变;构建了真核重组表达载体pcDNA3.1(+)-hLptn;筛选获得了稳定表达转染hLptn的BIU-87细胞株。结论成功构建的hLptn真核表达系统可在人膀胱肿瘤细胞株BIU-87中稳定表达,为研究hLptn基因介导的人膀胱肿瘤特异性主动免疫治疗奠定了基础。

人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及体外转染的生物学活性测定

目的: 构建人淋巴细胞趋化因子(HLptn)真核表达质粒,在膀胱肿瘤细胞株BIU -87中表达重组质粒,并检测趋化活性。 方法: 用RT- PCR法自活化的人外周血淋巴细胞扩增HLptn含编码区序列的cDNA,克隆至pGM TEasyT载体,测序正确后,将目的片段插入pcDNA3. 1( +)载体,获得阳性克隆pcDNA3. 1( +) HLptn;用脂质体介导其转染BIU- 87细胞,用Western -blot检测转染后细胞中HLptn的表达;取转染后的上清液,采用Boyden小室法检测表达的HLptn趋化CD4+、CD8+T淋巴细胞的生物学活性。 结果: 克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列编码区内第 225位碱基不同,系同义突变,构建了真核重组表达载体pcDNA3. 1 ( +) -HLptn;转染的BIU-87细胞表达HLptn,其培养上清对CD4+、CD8+T淋巴细胞具有趋化活性。 结论: 成功构建的HLptn真核表达系统可在人膀胱肿瘤细胞株BIU- 87中表达。

耻骨上穿刺引流对大体积前列腺汽化电切手术安全性的影响

目的研究经尿道前列腺汽化电切术中患者血糖、血钠、中心静脉压(CVP)的变化,探讨耻骨上套管引流法对大体积前列腺手术安全性的影响。方法 205例经尿道前列腺汽化电切手术患者,术中以5%葡萄糖为灌洗液,如果前列腺重量>70g,则术中加用耻骨上套管引流;手术根据引流灌洗液方法的不同分两组:A组(35例,术中加用耻骨上套管引流)与B组(170例,经电切镜鞘连续引流);分别于术前,手术60、90min以及手术结束时测患者血糖、血钠和CVP。结果 A组前列腺重量大于B组[A组:(80.9±8.9)gvs.B组:(49.3±7.6)g,P<0.05];B组血糖平均值高于A组[B组:(6.9±1.2)mmol/Lvs.A组:(5.3±0.7)mmol/L,P<0.05];A组无血糖升高,血钠值均在正常范围以内,无并发前列腺电切综合征(TURs),3例术中中心静脉压下降;B组患者20例出现血糖升高,15例出现血钠低于正常,3例出现前列腺电切综合征;两组无1例中心静脉压大于12cmH2O。结论耻骨上穿刺引流比经电切镜鞘连续引流能有效减少灌洗液吸收,应用耻骨上套管穿刺引流可以提高经尿道汽化电切术治疗大体积前列腺增生的术中安全性。

肾上腺囊肿的免疫组织化学分析

目的 探讨肾上腺囊肿的病因,提高对肾上腺囊肿的认识。方法 复习13例肾上腺囊肿的临床病理资料;应用免疫组织化学方法(Envision法)检测囊壁FⅧ-RA、CD3 4 和PAN -Cytokeratin的表达情况。结果 2例免疫组织化学检测PAN -Cytokeratin呈强阳性表达;1例FⅧ-RA、CD3 4 呈强阳性表达;5例假性囊肿FⅧ-RA或CD3 4 呈灶性表达,其中1例囊壁周围肾上腺组织HE染色确诊为肾上腺血管瘤,1例为血管畸形。结论 部分肾上腺囊肿来源于肾上腺脉管畸形或血管瘤。

糖尿病大鼠膀胱细胞凋亡的改变

目的:研究糖尿病大鼠膀胱细胞凋亡情况及其意义。方法:实验分为正常对照组和糖尿病组。用10周龄SD大鼠腹腔内注射1%链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠的动物模型。12周后取两组大鼠膀胱组织标本,原位细胞检测法检测细胞凋亡;免疫荧光方法检测CD146、PDG1-Rβ、NG-2表达;WesternBlotting检测CD146、PDGF-Rβ表达。结果:与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血糖升高,体质量减轻,膀胱湿重增加;细胞凋亡主要发生在糖尿病大鼠膀胱的尿路上皮细胞,而正常对照组未见明显尿路上皮细胞凋亡;两组大鼠膀胱组织中未见明显NG-2表达,CD146阳性表达细胞位于膀胱黏膜下层的血管壁及膀胱逼尿肌肌膜,PDGF-Rβ阳性表达细胞位于膀胱逼尿肌之间血管壁细胞及黏膜下血管壁;Western Blotting检测结果显示,两组大鼠膀胱壁组织CD146、PDGF-Rβ的蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:糖尿病大鼠膀胱上皮细胞早期发即生凋亡改变,而周细胞早期凋亡不明显;上皮细胞的凋亡可能是糖尿病膀胱的治疗靶标之一。

单核细胞源性树突状细胞表达淋巴细胞趋化因子mRNA的初步研究

目的:体外诱导、培养单核细胞源性树突状细胞(DC),研究其淋巴细胞趋化因子(lymphotactin,Lptn)mRNA表达的动态变化。方法:采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞(PBMC),用重组人粒细胞-巨噬细胞集落群体刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素-4(rhIL-4)刺激贴壁的单核细胞,诱导培养DC,第6天用重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)诱导DC成熟。用流式细胞术检测成熟和未成熟的DC表面分子CD1a和CD83;在电镜下观察成熟DC的形态;以RT-PCR法扩增其LptncDNA并克隆至pGM-TEasyT载体中,测序;以RT-PCR结合凝胶成像分析系统,半定量分析培养3、5及7dDC的LptnmRNA表达的强度。结果:电镜观察培养7d的细胞具有典型的DC形态,流式细胞术检测DC表面分子CD83呈高水平表达。用RT-PCR法克隆的cDNA序列与GenBank中U23772(登陆号)提供的序列一致。培养3d的DC不表达LptnmRNA,培养7d的DC较培养5d的DCLptnmRNA表达增强。结论:单核细胞源性DC能表达LptnmRNA,随着DC的成熟,LptnmRNA的表达增强。

膀胱肿瘤环氧化酶-2的研究进展

0引言 环氧化酶(Cyclooxygenase COX)在前列腺素(PGs)的合成过程中起重要作用,与肿瘤的发生有关联,在膀胱肿瘤中的表达为上调,而非类固醇消炎止痛药(NSAIDs)在动物实验中有预防膀胱肿瘤的作用,因此COX-2有可能成为治疗膀胱肿瘤的一个目标.

PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响

目的研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响。方法将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定;pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT法分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素(MMC)、羟基喜树碱和吡柔比星的敏感性变化。结果RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达。PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物敏感性明显提高,对吡柔比星和羟基喜树碱的药物敏感性无明显变化。结论PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对抗癌药物MMC的敏感性。

超顺磁性葡聚糖氧化铁纳米颗粒的制备及其作为基因载体的可行性研究

背景与目的:磁性纳米颗粒作为基因载体在肿瘤基因治疗中的应用得到了迅速发展。为了能获得驱动目的基因高效稳定表达、安全无害、靶向性高、简便的新型非病毒型基因导入和治疗系统,本研究探讨超顺磁性葡聚糖氧化铁纳米颗粒(superparamagneticdextranironoxidenanoparticles,SDION)的制备及其作为体外基因载体的可行性。方法:采用化学共沉淀法制作SDION,通过丙烯葡聚糖凝胶S-300HR色谱和离心法分离SDION,用透射电镜、粒度分析仪和磁力计对SDION进行分析。以绿色荧光蛋白(GFP-C2)质粒为靶基因,通过氧化还原法构建SDION-GFP-C2复合物,用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测两者的结合率。以脂质体转染作为对照,荧光显微镜分别观察SDION和脂质体体外转染GFP-C2入膀胱癌细胞BIU-87的转染效率。结果:SDION直径在3～8nm之间,有效粒径为59.2nm,比饱和磁化强度为0.23emu/g。分别经10mmol/L的高碘酸钠氧化、0.5mol/L的硼氢化钠还原作用后的SDION和GFP的结合比例最大,SDION对GFPDNA的转染效率为45%左右,明显高于脂质体的转染效率(30%左右)。结论:SDION可通过氧化还原反应与GFP质粒相连,在体外可将GFP基因成功转染入人膀胱癌BIU-87细胞。

电针对化学性炎性胃痛时幽门括约肌几种神经递质的调节作用

目的探讨大鼠幽门括约肌在化学性炎性痛时一氧化氮（nitric oxide,NO）能、胆碱（acetylcholine,ACh）能神经元和血管活性肠肽（vasoactive intestinal polypeptide,VIP）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）的变化,以及电针抗化学性炎性胃痛的神经化学机制。方法①甲醛灌胃建立胃痛模型。②电针＂足三里＂穴镇痛。③采用还原型辅酶Ⅱ和亚铁氰化铜直接显色的组织化学方法及PAP免疫组织化学方法分别显示括约肌内一氧化氮合酶（NOS）和胆碱酯酶（AChE）阳性神经元及VIP、CGRP免疫反应性（IR）神经元成分。结果①正常括约肌黏膜下神经丛和肌间神经丛有散在NOS或AChE阳性神经元胞体和神经纤维;CGRP-IR、VIP-IR纤维较丰富,2~3个弱阳性神经元胞体形成丛。以上几种神经元胞体在括约肌增厚部位普遍较多,神经纤维形成浓密的丛状结构;邻近括约肌的胃、肠端侧也有丰富的阳性神经元成分。②甲醛致胃痛时括约肌黏膜下神经丛及肌间神经丛NOS、AChE和VIP阳性神经元活性均降低。图像分析显示,肌内NOS、AChE和VIP阳性神经元的平均吸光度值,甲醛组较正常对照组显著降低（P〈0.01）;但甲醛组CGRP较正常对照组升高（P〈0.05）。③电针使NOS、AChE、VIP、CGRP的组织化学特性恢复至接近正常状态。结论电针对正常胃肠功能起调控作用并参与胃肠动力障碍的调节,其机制是通过括约肌内的神经及其递质,特别是肠神经系统（胆碱能、NO能、VIP能、CGRP能神经）的自主调节途径而实现的。

糖尿病大鼠模型的制备

目的探讨理想糖尿病大鼠模型的制备方法。方法采用单次腹腔注射65 mg/kg链脲佐菌素(STZ)的方法建立SD大鼠1型糖尿病的动物模型。结果建模3 d后测血糖均高于16.7 mmol/L。持续观察8周,血糖值始终在建模初期高血糖水平上波动,未见转复,并出现典型的"三多一少"症状,胰腺HE染色符合糖尿病动物的病理学变化。结论采用腹腔单次注射65 mg/kg链脲佐菌素的方法建立1型糖尿病大鼠模型,具有建模方法简便、用药量小,药物毒性低,胰岛B细胞损害特异性高等优点,可应用于糖尿病及其并发症研究的各个领域。

膀胱移行细胞癌组织中NF-κB p65、uPA、Bcl-2的表达变化及其意义

目的观察膀胱移行细胞癌(下称膀胱癌)组织中NF-κB p65和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及Bcl-2的表达变化,并探讨其相关性。方法采用免疫组化SP法对40例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织中NF-κBp65、uPA、Bcl-2进行测定,分析三者与膀胱癌分级、分期、侵袭转移及复发的关系及NF-κB p65表达与uPA、Bcl-2的相关性。结果 NF-κB p65、uPA、Bcl-2在膀胱癌组织中的表达均明显高于正常膀胱组织(P<0.05);NF-κB p65和uPA与膀胱癌病理分级、分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),Bcl-2与膀胱癌病理分级、分期有关(P<0.05),与淋巴结转移无关(P>0.05);膀胱癌组织中,NF-κB p65表达与uPA、Bcl-2表达呈正相关(r分别为0.388、0.462,P均<0.05)。结论在膀胱癌组织中NF-κB p65、uPA、Bcl-2均呈高表达,并与膀胱癌的临床病理学特征有关;NF-κB p65可能通过调控uPA、Bcl-2的表达促进膀胱癌的进展;NF-κB p65、uPA、Bcl-2可以作为判断膀胱癌侵袭性、转移及预后的生物学标志物。

B超引导下微创经皮肾镜取石术在上尿路结石治疗中的应用(附106例报告)

目的探讨超声引导下微创经皮肾镜取石术(MPCNL)在上尿路结石治疗中的临床疗效及其应用价值。方法2006年6月-2007年10月106例上尿路结石患者在B超引导下行微创经皮肾镜取石术治疗,术后输尿管内均放置双J管,所有患者均随访1～3个月。结果行MPCNL治疗的106例患者均一期单通道取石,结石清除率89.62%(95/106);平均手术时间(80.0±10.5)min(40～230min);术后平均住院时间(5.8±1.2)d(4～15d);术中出血平均100mL(30～600mL),输血3例(2.84%);术后并发大出血2例(1.88%),经输血对症治疗后行开放手术治疗治愈;术后发热59例(55.66%),其中T>38.5℃9例(8.49%);尿液转清时间平均(2.8±1.1)d(2～5d)。结论超声引导下行MPCNL治疗上尿路结石具有微创、高效、安全和并发症少等优势,患者术后恢复快,具有临床推广应用价值。

葡聚糖氧化铁磁性纳米颗粒的制备条件对其有效粒径和比饱和磁化强度的影响

目的探讨葡聚糖氧化铁磁性纳米颗粒(DMN)的制备对其有效粒径和比饱和磁化强度的影响。方法采用化学共沉淀法制作DMN,通过丙烯葡聚糖凝胶S300HR色谱和离心法分离DMN,用透射电镜、粒度分析仪和磁化强度分析仪检测DMN,研究制备过程中葡聚糖用量、铁盐含量、氨水浓度、搅拌速度、离心速度、Fe3+/Fe2+摩尔比、反应温度等条件对DMN的有效粒径、比饱和磁化强度的影响。结果不同制备条件影响着DMN有效粒径和比饱和磁化强度的大小。DMN直径最小为3nm,有效粒径介于42.7～189.1nm,比饱和磁化强度介于0.16～0.38emu/g。结论制备反应条件对DMN有效粒径和比饱和磁化强度的影响符合化学共沉淀反应的一般规律,可以用沉淀反应的理论指导DMN的制备,为DMN作为基因和药物纳米载体的研究提供了实验数据。

沉默EZH2基因表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的研究RNA干扰靶向沉默EZH2基因表达对ACHN肾癌细胞株增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法应用Western blot法检测EZH2蛋白在人正常近端肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株786-0和ACHN中的表达。脂质体法介导化学合成EZH2 si RNA转染ACHN细胞株,Western blot法检测转染后ACHN细胞EZH2蛋白的表达情况,CCK-8法检测转染后ACHN细胞增殖率,流式细胞术检测转染后ACHN细胞周期分布和凋亡情况。结果肾癌细胞株786-0和ACHN中EZH2蛋白的表达水平明显高于人正常近端肾小管上皮细胞HK-2。RNA干扰EZH2基因可成功地敲减ACHN细胞EZH2蛋白的表达。EZH2-si RNA干扰后,实验组ACHN细胞生长明显受抑制,在转染后48和72 h细胞增殖受抑制效应最显著(P<0.05)。细胞周期分析显示:si EZH2转染组G1期ACHN细胞比例呈增加趋势,而S期和G2期细胞比例呈减少趋势,其中在转染后48h G1期ACHN细胞比例显著增加,而S期和G2期细胞比例明显下降(P<0.05);凋亡分析显示:si EZH2转染组ACHN细胞凋亡率随转染后时间的延长而呈增加趋势,在转染后48和72 h细胞凋亡率增加最显著(P<0.05)。结论沉默EZH2基因表达可靶向肾癌ACHN细胞周期中G1/S限制点而阻滞细胞周期进展,同时可有效抑制肾癌细胞增殖和促进细胞凋亡。

糖尿病大鼠膀胱结构与功能的改变

目的研究糖尿病大鼠膀胱结构与功能的改变及其病理基础。方法 8周龄雄性SD大鼠腹腔内注射1%链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠的动物模型,实验分为正常对照组和糖尿病组,后者采用STZ诱导,制备糖尿病模型。STZ诱导8周后将两组大鼠放入代谢笼中收集24 h尿量,随后进行在体充盈性膀胱测压检查评估膀胱功能。实验完毕后取膀胱组织标本,病理切片常规HE染色,光镜下观察膀胱逼尿肌病理组织学变化。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血糖明显升高,体重明显减轻,24 h尿量和膀胱湿重显著增加;充盈性膀胱测压检查结果显示糖尿病大鼠膀胱容量、单次排尿量和剩余尿量明显增加,收缩力代偿性升高,排尿效率显著降低;常规HE染色光镜下观察可见糖尿病组大鼠组膀胱逼尿肌肌束排列紊乱,结构松散,肌束断裂。结论糖尿病组大鼠早期即可出现膀胱逼尿肌形态学和功能的改变,提示对糖尿病性膀胱病患者应尽早积极治疗以控制病情进展。