雷公藤红素对HMC-1细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 :探讨雷公藤红素诱导人肥大细胞系 HMC- 1细胞凋亡的基因调节机制。 方法 :雷公藤红素 (0 .5μmol/ L )与HMC- 1细胞共育不同时间 (4、8或 12 h)后 ,用 RT- PCR、免疫组化方法检测 bcl- 2家族、c- m yc、白细胞介素 1β转换酶 (ICE)基因在 m RNA和蛋白质水平表达的变化 ,并分析它们在细胞凋亡中的作用。 结果 :HMC- 1细胞本已存在 Bcl- 2、Bax、C- myc蛋白表达 ;雷公藤红素作用后 ,Bcl- 2蛋白表达受到抑制 ,Bax、C- m yc蛋白表达增加。 HMC- 1细胞能自发表达 bcl- 2、bax、 bcl- XL 和ICE的 m RNA,在雷公藤红素作用下 ,bcl- 2、bax、bcl- XL 的 m RNA表达水平均下降 (以 bcl- 2下降最为明显 ) ,而 ICE m RNA 3次检测 2次上升 ,1次下降。 结论 :雷公藤红素诱导 HMC-

Fas可能是雷公藤红素诱导HMC-1细胞凋亡的途径之一

目的：探讨雷公藤红素对ＨＭＣ１细胞表达Ｆａｓ、ＦａｓＬ的影响及与凋亡的关系。方法：用流式细胞仪检测细胞凋亡和Ｆａｓ、ＦａｓＬ的表达。结果：ＨＭＣ１细胞能自发表达Ｆａｓ，不表达ＦａｓＬ。经雷公藤红素作用，Ｆａｓ呈先升后降的变化，ＦａｓＬ低水平表达。Ｆａｓ阳性率下降与凋亡率增加相关。

雷公藤红素诱导人鼻息肉肥大细胞凋亡及机制

目的 :探讨雷公藤红素对鼻息肉肥大细胞凋亡的诱导作用及机制。方法 :雷公藤红素 (2μm ol/ L )与鼻息肉组织块在体外共育 ,应用 TUNEL 标记检测凋亡细胞情况 ,免疫组化检测凋亡相关蛋白的表达。结果 :未加药对照组 6和 12 h(n=10 ) 10个相邻高倍视野 TU NEL 阳性细胞数培养分别为 (7.8± 7.7)和 (10 .6± 4.5 )个 ,雷公藤红素组 (n=10 )分别为 (6 2 .3±42 .7)和 (76 .3± 39.3)个 ,二者相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。甲胺蓝染色明确显示肥大细胞呈凋亡形态改变 ,包括核浓缩、凋亡小体形成等 ,少见上皮细胞和成纤维细胞呈凋亡形态改变。雷公藤红素组促凋亡相关蛋白 Fas、C- myc、Bax表达增加 ,抑凋亡相关蛋白 bcl- 2表达下降。 结论 :雷公藤红素能诱导鼻息肉肥大细胞凋亡 ,凋亡的发生与其上调促凋亡基因的表达和下调抑凋亡基因的表达有关。

葵样细胞:凋亡的特征性形态改变

目的：观察雷公藤红素诱导人肥大细胞系（ＨＭＣ－１）细胞凋亡过程中细胞形态的变化，并探讨其意义。方法：在ＨＭＣ－１细胞培养体系中加入雷公藤红素，用光镜、电镜观察细胞的形态变化，用ＴＵＮＥＬ和流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡。结果：细胞在雷公藤红素作用下呈葵样改变：细胞母体居中，周边围以形成或正在形成的凋亡小体。葵样细胞（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ－ｌｉｋｅｃｅｌ，ＳＬＣ）对锥虫蓝拒染，可伴有核染色质浓缩和着边，药物作用２０ｍｉｎ即可形成，持续数小时后完全裂解为凋亡小体，或凋亡小体游离，残留细胞母体，最后崩溃；ＳＬＣ的形成具有时间和药物浓度依赖性；在８ｈ内与ＴＵＮＥＬ标记和碘化丙啶染色／ＦＣＭ检测的凋亡结果有显著相关性；ＳＬＣ清晰易辨，个体内和个体间计数重复性良好。结论：ＳＬＣ是凋亡细胞的特征性形态改变，可作为检测ＨＭＣ－１细胞凋亡的定性和定量指标。

雷公藤红素诱导人肥大细胞系HMC-1细胞凋亡及与细胞周期的关系

目的:研究雷公藤红素对人肥大细胞系 HMC-1细胞凋亡的诱导作用。方法:HMC-1细胞与雷公藤红素(0.125～1.0μmol/L)共育不同时间,经 DNA 琼脂糖电泳和流式细胞仪 DNA 含量分析。结果:(1)雷公藤红素能有效地诱导 HMC-1细胞凋亡,细胞呈凋亡形态学改变,DNA 琼脂糖电泳出现梯形条带,流式细胞仪分析,在 G_1期峰前出现凋亡峰。(2)凋亡程度随药物浓度增加和作用时间的延长而提高。(3)凋亡率随 S 期细胞比例的下降而升高,二者呈显著负相关(P<0.01)。结论:雷公藤红素可以诱导 HMC-1细胞凋亡,凋亡主要发生在 S期。

新型冠状病毒感染疫情隔离管控期间上海和苏州地区儿童呼吸道部分病原体流行特征分析

目的通过对儿童呼吸道5种常见病原体IgM检查结果进行分析,探索上海和苏州两地这5种病原体在新型冠状病毒感染(COVID-19)疫情期间严格隔离管控条件下真实世界流行特征的变迁。方法该研究是一项基于医院的回顾性横断面人群研究,在上海和苏州两地开展,共收集了187054例门急诊患儿,用多重免疫检测法测定人血液中5种呼吸道病原体的IgM抗体,包括肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)和柯萨奇病毒B(CVB),并用多变量logistic回归模型评估儿童各基线特征与呼吸道病原体之间的关联。结果5种儿童呼吸道病原体的IgM抗体阳性率为0.66%~17.44%,以MP为最高。儿童MP阳性率最高的年龄段是1~3岁(31.34%),而CP和CVB阳性率最高的均是1岁以下婴儿(CP为9.74%,CVB为1.13%)。RSV的阳性率总体水平低且随年龄而增加。此外,居住在上海地区的儿童感染ADV的概率(6.24%)较苏州地区的高。在上海研究人群中,发现年龄、就诊年份、居住的城市与检测的5种呼吸道病原体感染显著相关。在苏州的研究人群中,也发现了类似的结果。结论COVID-19疫情期间5种呼吸道病原体检测的阳性率发生了显著的变化,CP和ADV感染增加,而MP、RSV、CVB感染降低,提示呼吸道传染的严格管控措施可以改变部分病原体的流行特征。

呼吸道合胞病毒诱导气道上皮粘液分泌及调节机制研究

目的探讨Toll样受体-4(TLR_4)和粘附分子-1(ICAM_1)在呼吸道合胞病毒(RSV)诱导气道上皮细胞粘液素表达中的作用。方法以气道上皮细胞NCI_H292为研究对象,体外培养并感染RSV,检测粘液素分泌和粘液素MAC5AC启动子的活性,研究阻断TLR_4和ICAM_1后对MAC5AC启动子活性的影响。结果NCI_H292细胞在感染RSV后,粘液分泌增加,MAC5AC启动子活性增强,与RSV数量和感染的时间呈正相关;MAC5AC启动子的激活依赖病毒的复制过程;在培养体系中预先加入抗TLR_4和ICAM_1中和抗体阻断TLR_4和ICMA_1不能抑制RSV诱导MAC5AC的活性。结论RSV可以诱导气道上皮细胞粘液素的表达,但不依赖TLR_4和ICAM_1分子的作用。

婴幼儿喘息诊治进展

婴幼儿喘息是一种异质性疾病,可分为婴幼儿暂时性喘息、非过敏性持续性喘息和过敏性喘息(即哮喘)。婴幼儿暂时性喘息主要与先天性支气管肺发育不良等因素有关,非过敏性持续性喘息主要与病毒感染引起的炎症有关,这一炎症参与的细胞主要是嗜中性粒细胞和淋巴细胞,而哮喘参与的细胞主要是嗜酸性粒细胞。婴幼儿期喘息的发作次数不是诊断哮喘的理想指标,婴幼儿期哮喘的诊断应重视过敏性疾病的遗传背景、个人过敏性疾病史、实验室过敏指标的检查及对支气管扩张剂治疗的反应。在不能明确婴幼儿喘息类型的情况下,联合应用激素、2β肾上腺素能受体激动剂、白三烯受体调节剂和组织胺H1受体阻断剂治疗是一个有效的选择。

小儿哮喘稳定期血清中sIL-2R的水平及其与总IgE浓度的关系

淋巴细胞被抗原激活后表达白细胞介素Ⅱ受体(IL-2R),其中α链释放入血液成为可溶性IL2R(sIL-2R)。sIL-2R的水平可以反映机体的免疫激活状态。本文测定了10例小儿哮喘稳定期血清中sIL-2R水平(137.26±33.85 U/ml),结果显示显著高于正常对照(34.42±20.00 U/ml),P<0.001。血清中总IgE水平(1502.50±781.50 U/ml)显著高于正常对照(90.30±17.20 U/ml),P<0.001。对其中8例哮喘患者分析了sIL-2R与总IgE浓度的相关性,r=-0.11,P>0.05。提示小儿哮喘稳定期免疫功能仍处于激活状态,sIL-2R水平与总IgE的合成无直接关系。

IL-12 P40(-/-)小鼠感染呼吸道合胞病毒后肺部的免疫炎症反应

目的探讨白细胞介素_12(IL_12)在呼吸道合胞病毒(RSV)感染中对机体免疫炎症反应的调节作用。方法对IL_12P40基因敲除小鼠[IL_12P40(_/_)]和BALB/c野生型小鼠(WT)气道灌注RSV(2×106PFUs/小鼠)致感染,在感染后第3天和第7天分别检测气道灌洗液中总炎症细胞的数量和分类、肺组织中的CD3+细胞计数、气道粘液分泌水平及Thl、Th2细胞因子的变化。结果IL_12P40(_/_)小鼠感染RSV后尤其在感染后第7天BALF中总炎性细胞数增加达(136.0±8.8)×107/L,显著高于WT小鼠[(88.8±15.2)×107/L],其中以淋巴细胞升高更为明显;肺组织免疫组化染色显示在小气道和小血管周围CD3+细胞浸润在IL_12P40(_/_)小鼠感染7d组为(113.1±12.3)/10个×400视野,显著高于WT感染7d组为(66.8±7.0)/10个×400视野;大气道粘膜粘液分泌在IL_12P40(_/_)小鼠感染7d组AB/PAS染色阳性物质密度为(0.76±0.12)nl/mm2,显著高于WT小鼠感染7d组的(0.45±0.07)nl/mm2。IL_12P40(_/_)小鼠感染RSV后第7天肺组织匀浆上清中Th2细胞因子IL_5为(3.11±1.05)pg/100μg总蛋白,显著高于WT小鼠的(0.87±0.46)pg/100μg总蛋白,P<0.05;IL_13为(0.32±0.08)pg/100μg总蛋白,显著高于WT小鼠的(0.23±0.03)pg/100μg总蛋白,P<0.05;而Thl细胞因子IFN_γ在这两种小鼠均升高,分别为(6.60±1.63)pg/100μg总蛋白和(5.56±0.85)pg/100μg总蛋白,但相互间差异无显著性,P>0.05。IL_18在IL_12P40(_/_)小鼠感染RSV后第3天显著升高。用单克隆抗体阻断IL_18可以进一步提高IL_12P40(_/_)小鼠感染RSV第7天时气道的炎症和粘液分泌水平,同时也进一步促进IL_13的分泌,但不影响IFN_γ的分泌。结论IL_12缺乏可以加重RSV感染肺部炎症、粘液分泌和Th2免疫反应,IL_18的缺乏对此有协同作用,但两者均不影响IFN_γ的分泌水平。

T淋巴细胞在支气管哮喘中的作用

目前对哮喘患者T 细胞的研究已进入分子水平。T 细胞可被过敏原激活,释放多种淋巴因子参与哮喘的发病。其中白介素(IL)-4、γ干扰素促进IgE 的合成,IL-5、IL-3、组织胺释放因子等与气道嗜酸细胞炎症的形成有密切关系。

肥大细胞分泌的细胞因子及生物学作用

肥大细胞不仅能释放多种炎性介质如组织胺、5-羟色胺、白细胞三烯等参与过敏性疾病的发病,近几年的研究发现肥大细胞还能分泌多种细胞因子,产生广泛的生物学作用,参与过敏性疾病及其它多种疾病的发病。一、肥大细胞分泌多种细胞因子在气道粘膜、肠道粘膜、皮肤分布着大量的肥大细胞,肥大细胞具有分泌细胞因子的功能。Bradding 等用抗 IL-4、IL-5。

慢性咳嗽常见疾病的临床特点

呼吸道感染与感染后咳嗽；咳嗽变异性哮喘（CVA）；上气道咳嗽综合征（UACS）；胃食管反流性咳嗽（GERC）；嗜酸粒细胞性支气管炎（EB）；先天性呼吸道疾病；

人类T辅助细胞亚型与过敏性疾病(综述)

1986年Mosman根据T辅助细胞(T_H)分泌细胞因子的不同将小鼠T_H细胞分为T_H1、T_H2亚型。此后基于一系列的研究成果,Romagnani等证实人类也存在类似小鼠的T_H细胞T_H1、T_H2亚型。其分泌细胞因子的成份和生物学功能不同,在某些疾病的发病过程中具有重要意义,本文就此问题作简要综述。

儿童社区获得性细菌性肺炎的综合治疗

中华医学会儿科学分会呼吸学组和《中华儿科杂志》编辑委员会于2007年制定了《儿童社区获得性肺炎管理指南》(下称《指南》),其中对儿童社区获得性肺炎(CAP)定义如下:原本健康的儿童在医院外获得的感染性肺炎,包括感染了具有明确潜伏期的病原体而在入院后潜伏期内发病的肺炎,是相对于医院内肺炎(NP或称HAP)而言的。CAP常见病原包括细菌、病毒、支原体、衣原体等,此外还有真菌和原虫。与发达国家相比,细菌病原在发展中国家的CAP病原学中更为重要,常见细菌病原包括肺炎链球菌(SP)、流感嗜血杆菌(HI)(主要是b型,其他型和不定型流感嗜血杆菌较少见)、金黄色葡萄球菌(SA)和卡它莫拉菌(MC),此外还有肠杆菌科细菌以及百日咳杆菌等。本文主要对肺炎链球菌性肺炎、流感嗜血杆菌性肺炎及金黄色葡萄球菌性肺炎进行讨论。

树突状细胞对呼吸道合胞病毒感染T细胞免疫反应的调节作用

目的研究在呼吸道合胞病毒(RSV)感染过程中树突状细胞(dendritic cell,DC)的数量和功能变化,探讨其对T细胞免疫反应的调节作用。方法BALB/c小鼠感染RSV后,分离并用流式细胞仪检测肺DC的数量和成熟标志;分离肺淋巴细胞并在体外培养,ELISA测定培养上清中Th2和Th1细胞因子的水平;在体外RSV或流感病毒(IFZ)感染骨髓衍生树突状细胞(BMDC)48 h,检测培养体系上清中IL-12、IL-10水平。在BMDC和T淋巴细胞共培养体系中加入重组IL-10,观察对T细胞分泌细胞因子的影响。结果RSV感染小鼠肺淋巴细胞在体外培养情况下IL-13、IL-4和IL-5分泌显著增加,均高于IFZ感染小鼠(P均<0.01);IFN-γ分泌水平在RSV或IFZ感染小鼠均升高,但两者间差异无统计学意义(P>0.05)。RSV感染小鼠后3 d,肺DC数量增多,DC成熟标记分子MHCⅡ-Ia、CD86和CD80表达增加(P均<0.01);IFZ感染BMDC 48 h,培养上清中IL-10显著增高(P<0.01),而在RSV感染组不升高(P>0.05)。在BMDC和T淋巴细胞共培养体系中加入重组IL-10后,IFN-γ的分泌水平显著增加,IL-13和IL-5的分泌水平受到抑制(P均<0.01)。结论RSV感染过程中,DC数量增加,成熟度提高,但分泌IL-10不足,通过补充外源性IL-10实验证明这是RSV感染引起Th2反应为主的原因之一。[临床儿科杂志,2007,25(12):1020-1024]

高亲和力IgE受体

高亲和力IgE受体（FcεRI）是一种异口聚体结构，主要表达于肥大细胞、嗜碱性粒细胞表面。当多价抗原与IgE交联时，受体就发生微聚集而激活，经蛋白激酶活化、磷脂酰肌醇水解、Ca2+流动等信号传导过程，使肥大细胞、嗜碱粒细胞释放炎性介质、分泌细胞因子、表达粘附分子等生物学反应，参与过敏性炎症的形成。近年发现嗜酸粒细胞、郎罕氏细胞、单核细胞也可表达这种受体，与这些细胞的抗寄生虫感染，抗原提呈和炎症反应有关。

IL-4对人IgE合成的调节及与过敏性疾病的关系

IL—4是辅助T细胞(Th)分泌的淋巴因子,属小分子可溶性糖蛋白,分子量为15～19KD,它具有多种生物学功能,能促进B细胞的活化、增殖诱导B细胞合成IgE,γ-干扰素对此有抑制作用,白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)对此有协同作用。近年研究发现,过敏性疾病中IL-4分泌增多,这可能是过敏性疾病过多合成IgE的原因。抑制IL-4的分泌和作用,提高γ-干扰素的分泌水平,有可能为过敏性疾病的治疗开辟新的途径。

儿童慢性咳嗽的发生机制与病因

咳嗽是儿科最常见的临床表现之一,而引起咳嗽(特别是慢性咳嗽)的病因极其复杂,诊断亦有一定的难度。在儿科临床实践中,很多因咳嗽而就诊的患儿被误诊为"上呼吸道感染"、"支气管炎"甚至"肺炎",大量使用各种抗菌药物、糖皮质激素以及化痰止咳药物。咳嗽久治不愈会影响患儿身心健康和学习生活,并给家长和社会带来额外的经济负担。因此,如何明确诊断儿童慢性咳嗽并给予相应的治疗一直是广大儿科医务工作者共同关注的问题。本刊特邀上海交通大学医学院附属新华医院儿内科主任鲍一笑教授结合中华医学会儿科学分会呼吸学组和《中华儿科杂志》编辑委员会于2007年制定的《儿童慢性咳嗽诊断与治疗指南》,共同复习并讨论儿童慢性咳嗽诊治的相关问题。