HIV感染者CD4/CD8细胞与病毒载量的关系

目的 探讨HIV感染者体内CD4细胞数与病毒载量的关系。方法 对 84人的 2 0 7次血样进行病毒载量的测定 ,对 194人的 491次血样进行CD4/CD8细胞数的检测。CD4/CD8细胞计数采用流式细胞仪的绝对计数法进行检测 ,使用核酸序列测试 (NASBA)方法检测病毒载量。对其中一部分人进行随访 ,采集血样并检测相应指标。结果 HIV感染者体内的CD4细胞数与病毒载量的Log值呈负相关 (r =-0 576,P <0 0 1) ,CD4/CD8比值与病毒载量的Log值呈负相关 (r =-0 544,P <0 0 1)。CD4细胞数较低的感染者 ,CD8细胞数也较低。在HIV感染者体内 ,随着病毒载量的升高 ,CD4细胞数呈下降趋势。结论 病毒载量与CD4有明显的相关关系 ,当病毒载量较低时 ,使用CD4细胞数可以粗略估计血浆中病毒载量的高低。CD4/CD8比值与病毒载量的Log值呈现负相关。当病毒载量较高时 ,HIV感染者体内病毒载量与CD4细胞数的变化趋势相反 。

SARS病毒对温度耐受性的实验研究

为观察SARS病毒在冷藏和自然温度下的稳定性以及灭活SARS病毒的有效温度,将SARS病毒培养的上清液(106TCID50)分装到10 ml离心管中,放置在4℃冰箱、室温(24.5℃)、37℃、56℃和70℃水浴中,间隔一定时间以后取样0.5 ml,接种Vero-E6细胞.结果,SARS病毒在冷藏和室温条件下十分稳定,冷藏(4℃)放置10 d,滴度只下降大约2个log,室温放置5 d,滴度下降大约4个log,仍然保持较高的感染性.加热时SARS病毒的滴度迅速下降,56℃加热30 min、70℃加热15 min检测不出有活病毒.结论,SARS病毒在冷藏和自然温度下十分稳定,加热是灭活SARS病毒简单有效的方法.

我国现行HIV检测策略和方法的应用评价

目的 评价我国现行HIV检测方法和程序的应用效果。方法 按照我国《全国艾滋病检测工作规范》规定的方法和程序,分3个步骤对7502份职业献血员的血清标本进行了HIV抗体检测,用一种国产试剂进行初筛,阳性标本用原有试剂和另外种不同原理的试剂进行复核,两种试剂均阳性和一阴一阳的标本用免疫印迹试剂进行确认。结果 初筛能够发现所有的HIV阳性,排除98.8％HIV阴性,但是有0.9％假阳性;复核实验能够在确认之前排除93.9％假阳性。确认实验最终确认19份标本HIV抗体阳性,4份标本HIV抗体可疑。90.9％假阳性和75.0％可疑标本的s/CO值在1.000-1.999之间,而94.7％阳性标本的s/CO值在5.000以上。结论 复核实验对于有效排除假阳性,提高确认的效率,减少开支很有必要。s/CO值≥5.000预示阳性的价值比较大,s/CO值在1.000-1.999范围内多为假阳性或可疑。

HIV抗体质控血清的稳定性研究

目的 研究配制的质控血清的稳定性和影响因素。方法 将配制的HIV抗体质控血清进行不同的处理,然后统一用 3种试剂进行检测:（1）在 37℃,室温和 4℃保存不同时间;（2）加入 0.1％的叠氮钠和 0.01％的硫柳汞保存不同时间;（3）室温和-20℃之间反复冻融。结果 人工配制的质控血清在4℃条件下6个月内可以保持稳定,在室温条件下1个月内保持稳定。反复冻融及加入0.1％的叠氮钠或0.01％的硫柳汞对检测结果没有影响。双抗原夹心法试剂检测的S/CO值显著高于间接法试剂。结论 在常规条件下血清中的HIV抗体能够在较长时间内保持稳定。

PCR在猴B病毒鉴定中的应用研究

目的 为鉴定新分离毒株是否为B病毒。方法 根据ScinicarielloF报道的引物 ,用PCR方法扩增BV147、HSV 1、HSV 2 ,对扩增产物进行SacⅡ内切酶消化。结果 这一对引物可同时对这 3种病毒进行扩增 ,但只有BV147的扩增产物可被SacⅡ内切酶切开。对BV147扩增片段克隆测序的结果证实 ,其与美国B病毒E2 490株部分基因 (UL2 7)相对应位置的核苷酸同源性为 10 0 %。结论 初步建立了检测B病毒DNA的PCR方法并测定了新分离病毒毒株的部分基因序列 。

HMA分析体外传代HIV亚型变异

目的:了解体外传代HIV-1亚型的变异性,以深入了解HIV-1在自然状态下的生物学性状,为艾滋病的预防和治疗提供基础资料。方法:经MT4细胞连续传代、反复冻融传代、反复更换宿主细胞传代、施加灭活因素(酸性条件及S/D)传代等多种不同方式体外传代培养HIV。套式PCR扩增其包膜基因,用异源双链泳动分析法(HMA)分析基因亚型的变异。结果:各种方式传代HIV-1包膜基因亚型不变。结论:体外传代HIV基因亚型不变;HMA适用于体外传代HIV型别鉴定。

我国部分地区HIV感染者HCV协同感染状况的调查研究

目的了解我国部分地区艾滋病病毒(HIV)感染者体内丙型肝炎病毒(HCV)的协同感染状况。方法以我国北京、河南、广西部分地区的HIV感染者为研究对象,通过访谈了解病人的基本状况,采集病人的EDTA抗凝静脉血,对感染者的HIV感染状况、CD4细胞数、HIV病毒载量及HCV感染状况进行检测,分析我国部分地区HIV感染者中HCV的协同感染状况。结果共收集到HIV感染者血液249份,其中有34.14%的感染者同时感染HCV。统计学分析显示,河南地区的HIV感染者同时感染HCV的比例显著高于北京和广西地区;经静脉吸毒和输血传播感染HIV的病人同时感染HCV的几率相近,但都明显高于性传播;感染了HCV的HIV感染者体内的病毒载量要显著高于未感染HCV的HIV感染者,但CD4细胞数没有显著差别。结论HCV协同感染率在不同的HIV感染者人群中存在差异,而且这种协同感染会影响感染者HIV病毒载量,因此在观察HIV感染者疾病进程及考虑治疗措施时,应充分考虑HCV协同感染的影响。

亚甲基蓝光化学法对全血中人免疫缺陷Ⅰ型病毒的灭活研究

目的 观察不同浓度的亚甲基蓝 (methyleneblue ,MB)与可见光联合作用对全血中人免疫缺陷Ⅰ型病毒(HIV 1)的灭活能力。方法 以HIV 1为试验病毒 ,通过MB与可见光 ( 64 0nm)单独及联合作用于含病毒的模拟全血 ,采用MT4细胞感染法评价病毒的灭活效果。结果 当全血中MB含量分别为 5、10、15 μmol/L时 ,以 40 0 0 0Lux强度的可见光分别照射 3 0、2 0、10min ,可完全杀灭试验滴度为 10 5 78TCID50 HIV 1病毒。结论 亚甲基蓝光化学法可高效灭活全血中HIV 1病毒。

SARS病毒在外界环境物品中生存和抵抗能力的研究

评估SARS病毒离开人体以后在外界环境物品中生存的能力.采用的方法是将滴度为106]TCID#-的SARS病毒BJ-01株涂布在灭菌的不锈钢片、玻璃片、塑料片、滤纸片、棉布片和木片的表面,或混合在灭菌自来水和土壤样品中,经一定时间后洗下病毒,接种Vero-E6细胞,观察细胞病变.结果,SARS病毒在模拟污染的不锈钢片、玻璃片、塑料片上可以存活至少2 d,在模拟污染的棉布片、土壤、滤纸片和木片上至少可存活4～6 h,在污染的自来水中2 d仍然保持较强的感染性.干燥是影响SARS病毒生存时间的重要因素.结论,SARS病毒离开人体以后在外界环境物品中具有较强的生存能力,做好对环境物品的消毒对于切断传播途径十分重要.

一种复方消毒乳液对新型冠状病毒的杀灭效果

试验观察了一种含1700～1900mg/L醋酸氯己定、1000mg/L纳米氧化锌的复方消毒乳液,对引起重症急性呼吸综合症(SARS) 的新型冠状病毒的杀灭效果。按照我国《消毒技术规范》中的病毒灭活试验方法进行测试。结果证明,该产品80％浓度的原液直接作用1min,即可完全杀灭试验室培养的新型冠状病毒,平均病毒灭活对数值>5.00。该产品可用于非典型肺炎流行区人员的手、皮肤消毒。

用鼠艾滋病模型评价虎杖水提液的抗病毒作用

以脾指数、病毒抗原阳性细胞、血清ＩｇＧ和脾细胞对刀豆蛋白Ａ的刺激应答为指标，用ＬＰＢＭ５Ｃ５７ＢＬ／６鼠艾滋病模型评价了虎杖水提液的抗病毒作用。结果显示：虎杖水提液可以部分地抑制ＬＰＢＭ５病毒导致的Ｃ５７ＢＬ／６鼠的脾肿大，免疫抑制和病毒血症；病毒接种前和接种同时给药效果较好，接种一星期以后开始的治疗对感染鼠的各项异常指标没有明显的改善作用，提示早期用药效果较好；持续给药可以部分地控制感染鼠脾肿大和脾细胞对刀豆蛋白Ａ的刺激应答降低，但对高球蛋白血症的改善作用是非持续性的。

一起戊型肝炎暴发的流行病学调查

１９９４年４月２７日至５月１５日，驻天津某部队学院发生一起戊型肝炎暴发，罹患率６．８７％。病例均为男性，年龄２０～２４岁，症状普遍较轻。血清学检测发现，２４名病例全部抗－ＨＡＶＩｇＧ阳性，其中２３人抗－ＨＥＶ阳性，ＨＣＶ，ＣＭＶ，ＥＢＶ感染标志和ＨＢｓＡｇ，抗－ＨＢｃＩｇＭ均为阴性。用ＲＩ－ＰＣＲ方法检测了３例病人血清和９例病人粪便的ＨＦＶＲＮＡ，１份血清和３份粪便标本呈阳性反应，证实这起肝炎暴发是ＮＥＶ感染所致。炊事员可能是这起肝炎暴发的传染源。表明加强对食堂和炊事员的卫生监督是十分重要的。

河南省HIV-1流行毒株pol基因的分型与系统发生分析

目的了解河南省艾滋病病毒1型(HIV1)流行毒株pol基因的亚型及其系统发生情况。方法采集河南省20名艾滋病病人的抗凝全血,分离血浆,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)扩增pol基因部分序列(PR与RT的p55区)并直接进行序列测定,登陆Web站点http://hivweb.lanl.gov确定毒株亚型。用BioEdit和DNASTAR软件的MegAlign模块进行系统发生分析,SPSS软件包对数据进行统计学分析。结果20份标本的pol基因序列系统发生分析显示均为B亚型,且具有较高的系统发生同源性,与东北地区流行毒株的相似度≥97%,PR基因离散率<0.2%,RT基因平均离散率为3.15%(0.7%～5.1%)。PR和RT基因遗传变异的差异具有显著的统计学意义(P<0.001)。结论pol基因的系统发生分析可以作为河南省HIV1毒株亚型确定的方法。河南与东北两地pol基因相似性以及PR与RT基因进化差异的意义,有待进一步研究。

艾乃吉Ⅰ号抗艾滋病的实验研究

目的:观察艾乃吉Ⅰ号促进免疫功能及体外抑制HIV作用。方法:采用腹腔注射环孢酶素法建立免疫抑制模型小鼠,给药两周后取血,流式细胞仪上检测外周血淋巴细胞亚群;采用CPE法测定HIV对MT-4细胞的感染性滴度,MMT法测定药物对MT-4细胞的半数毒性浓度,CPE法测定药物的抗病毒活性,计算治疗指数。结果:艾乃吉Ⅰ号对提高免疫抑制小鼠CD3T细胞百分率和CD4T细胞百分率有一定作用,其中低剂量组与模型组比较CD4T细胞百分率的提高较为明显(P<0.05);在MT-4细胞/HIV-1ⅢB和实验系统,艾乃吉Ⅰ号抑制病毒复制的治疗指数是2.6。结论:艾乃吉Ⅰ号具有一定的促进免疫功能恢复及体外抑制HIV作用。

HIV抗体干血浆滤纸片质控品制备的研究

目的:研究制备一种新型的干血浆滤纸片质控品,用于艾滋病初筛实验室间质量评价活动。方法:取来自中国地区不同亚型的HIV抗体强阳性标本,分别制成5份标本。将这5份标本分别进行HIV抗体效价滴定。最后选取OD值高低不同的5份标本作为室间质量评价的标本。结果:用ELISA法检测HIV抗体,干血浆滤纸片样品与血浆样品检测结果无显著性差异(P>0.05)。结论:干血浆滤纸片质控品可以用于基于ELISA方法检测的HIV抗体的初筛实验室的质量评价活动中,其在稳定性、样品保存、运输方面均优于血浆质控品。

HIV-1p24蛋白在大肠肝菌中的高效可溶性表达、一步纯化及抗原性分析

合成引物扩增HIV 1p2 4基因 ,并将其克隆到 pQE 30质粒中 ,使其在大肠杆菌E .coliM 15中以IPTG诱导高效表达 ,经SDS PAGE分析 ,该表达产物约占菌体总蛋白 2 0 % ,并且以可溶蛋白的形式存在于细菌裂解液上清之中。经镍离子柱亲和层析一步纯化 ,洗脱产物中 p2 4蛋白纯度达95 %。ELISA分析表明 ,该蛋白可与HIV感染者血清发生特异性免疫反应。以此蛋白交联Sepharose 4B ,亲和层析纯化HIV感染者血清中的抗体 ,用所得抗体与HIV确认试剂反应 ,发现该纯化抗体仅与确认试剂中的 p2 4蛋白反应。上述结果表明在大肠杆菌中已经高效表达了可溶性HIV 1p2 4蛋白 。

PCR在猴B病毒与猴病毒8型鉴别中的应用

目的 为了使BV1 47与SA8相区别 ,并进一步分析BV1 47基因结构特点。方法 用PCR方法扩增BV1 47DNA ,并对扩增片段进行克隆测序。结果 该序列与美国BVE2 4 90株部分基因 (UL2 7)相对应位置的核苷酸同源性为 99 54% ,与SA8相对应位置的核苷酸同源性为 89 91 %。结论 进一步证明了新分离物为B病毒。

自然环境中人类免疫缺陷病毒感染活力的探索

目的 明确自然环境下人类免疫缺陷病毒（HIV）的灭活规律，防止日常生活和医疗卫生工作中接触HIV阳性体液引起的HIV感染。方法通过测TCID50，检测了HIV在水和含10％血清RPM11640培养液稀释后，持续存在于4℃、室温（20℃～26℃）、37℃不同时间的感染活力，并对不病变样品盲目传三代以明确其感染性。结果〈4℃无论在水或细胞培养液中，HIV感染活力〉35d；室温及37℃下，水中HIV感染活力可维持7～14d，培养液中可维持14-21d。结论HIV在自然环境中抵抗力较强，对HIV阳性体液及其污染物应谨慎处理，防止HIV意外传播。

用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位

目的:探讨M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达融合蛋白的可行性。方法:以纯化的HIV-1感染者血清多克隆抗体为配体,在噬菌体展示随机十二肽库中进行生物淘洗,经ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序,确定优势表位。将优势表位及两个优势表位的串联体分别与M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域连接,克隆入PQE30载体进行蛋白表达,再以表达蛋白为抗原检测HIV-1感染者血清中的抗体。结果:成功筛选到位于HIV-1 gp41蛋白上的3组优势抗原表位(HGPKDAETTAIW;AAFKDNQLLRIW;AAFKDNQLTRIW),3组优势表位及表位串联体(YGPKDAETTAIW-GGGS-SCSAKFTCTTQI)在PQE30载体中实现可溶性融合表达。重组蛋白具有良好的抗原性,能与不同的HIV-1抗体阳性血清呈特异反应。结论:用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位是可行的。