干细胞移植延缓椎间盘退变及磁共振示踪研究

目的:评价超顺磁性氧化铁纳米粒子标记的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)在椎间盘退变早期植入椎间盘后细胞外基质的表达情况,并用磁共振进行干细胞示踪。方法:采取体外细胞培养技术,体外纯化扩增兔BMMSCs,并用氧化铁纳米粒子进行标记,于退变手术当时植入手术节段椎间盘内。分别于2、4、6、8周用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量的变化,免疫组化法测定Ⅱ型胶原的含量变化,用磁共振扫描对标记干细胞在椎间盘内分布进行示踪。所得数据进行统计学处理。结果:8周内实验组髓核蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量明显较模型组高,差异有统计学意义,但与正常组比较差异无统计学意义。结论:兔BMMSCs移植可以延缓甚至阻止髓核退变。

兔纤维环细胞和骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的:初步探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)与纤维环(AF)细胞的共培养对细胞增殖及主要细胞外基质的影响,进一步确定BMMSCs移植对椎间盘退变的预防和治疗作用。方法:分别培养兔的BMMSCs与AF细胞,将两种细胞按1∶1的比例混匀,利用离心管培养技术培养3周后取材,大体观察并行HE染色;使用荧光染料Hoechst33258检测细胞增殖;通过实时荧光PCR对Ⅱ型胶原、蛋白多糖含量进行测定。结果:在体外培养3周后,细胞团体积达到最大,涂片染色显示共培养组细胞致密,细胞增殖较对照组明显,实时荧光PCR检测结果显示Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达增强。结论:在离心管内三维培养条件下,BMMSCs与AF细胞共培养能够促进增殖,增加Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量。

大鼠椎间盘巢源性干细胞的体外分离、培养和特性鉴定

目的:对大鼠椎间盘干细胞巢来源的干细胞(ISN-SCs)进行体外分离、培养和特性鉴定。方法:以10周龄雄性SD大鼠作为研究对象,按照解剖区域分离椎间盘干细胞巢组织(骺板外周软骨膜部分),用Ⅱ型胶原酶消化获取细胞后进行体外培养,选用第四代细胞进行干细胞相关特性的鉴定:采用流式细胞技术测定细胞周期;MTT法测定增殖曲线;流式细胞技术检测干细胞相关表型;q PCR检测干细胞相关基因的表达水平;细胞三系诱导分化培养后采用茜素红染色及钙钴染色检测成骨分化能力,阿利新蓝染色检测成软骨分化能力,油红O染色检测成脂肪分化能力,q PCR检测多向分化相关基因的表达水平。结果:大鼠ISN-SCs呈成纤维样细胞,多触角,具有贴壁能力,是一种慢周期细胞,高表达干细胞相关阳性表面抗原分子CD29、CD90、CD44,低表达干细胞相关阴性表面抗原分子CD34、CD45、CD19、CD11b;成骨诱导分化后茜素红染色和钙钴染色均为阳性,成软骨分化后阿利新蓝染色阳性,成脂肪分化后油红O染色阳性,且各分化相关基因(成骨:Runx2、OPN、OCN;成软骨:SOX-9、COL2a1、ACAN;成脂肪:PPARγ、C/EBPα)表达水平较对照组显著增高,其与骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有相似的干细胞相关基因(NANOG、SOX-2、OCT-4)表达水平。结论:ISN-SCs具备干细胞的生物学特性,在体外经诱导后可以向软骨细胞及脂肪细胞转化,可为椎间盘的自体生物学修复研究提供良好的细胞来源。

大鼠椎间盘巢源性干细胞对退化髓核细胞作用的研究

目的 :研究大鼠椎间盘巢源性干细胞(stem cells derived from ISN,ISN-SCs)对衰老髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的作用。方法:取10只SD大鼠(雄性,10周龄),处死后分离获取脊柱功能单位,显露髓核及椎间盘干细胞巢(stem cell niches of the intervertebral disc,ISN)区域,解剖显微镜下仔细分离获取髓核和ISN组织,采用Ⅱ型胶原酶消化、细胞滤网过滤后,将原代ISN-SCs和NPCs分别重悬于培养液,接种于普通培养箱培养,细胞达约90%融合后进行传代,第三代(P3)NPCs及第四代(P4)ISN-SCs用于进一步实验。采用三系诱导分化(成骨、成软骨、成脂肪)培养液对P4 ISN-SCs分别进行定向诱导分化培养,采用茜素红、钙钴染色检测其成骨分化能力,阿利新蓝染色检测其成软骨分化能力,油红O染色检测其成脂肪分化能力;采用连续传代法,将P3 NPCs连续传代,制备NPCs衰老模型,衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence associated-β-galactosidase,SA-β-Gal)染色法检测衰老模型的有效性。研究将细胞培养体系进一步分为正常对照组、衰老组、共培养组,正常对照组采用P3NPCs接种,衰老组采用衰老NPCs接种,共培养组采用P4 ISN-SCs与衰老NPCs以1∶1混匀后接种,各组样本细胞总数及培养环境相同。培养1周后,采用甲苯胺蓝染色检测各组蛋白聚糖表达水平,采用免疫组化检测各组Ⅱ型胶原蛋白表达水平,采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测各组ACAN和COL2a1的m RNA表达水平。结果 :在特定诱导环境下,ISN-SCs可以定向成骨、成软骨、成脂肪分化。SA-β-Gal染色显示连续传代后NPCs衰老率随着传代次数而逐渐增加,P3 NPCs未出现明显的衰老[衰老率(3.0±0.5)%],P5 NPCs衰老率为(18.3±0.7)%,P10 NPCs达到严重衰老标准[衰老率为(86.0±4.6)%]。胞外基质蛋白检测结果显示:与正常对照组相比,衰老组的蛋白聚糖甲苯胺蓝染色明显减弱,Ⅱ型胶原免疫组化染色强度定量也显著减弱(P<0.05);而接触共培养后,与衰老组相比,共培养组中的蛋白聚糖甲苯胺蓝染色明显增强,Ⅱ型胶原免疫组化染色强度定量显著增强(P<0.05)并恢复至正常水平。qPCR结果显示:与正常对照组相比,衰老组的ACAN和COL2a1的m RNA表达水平均显著性降低(分别为1.00±0.05 vs 0.43±0.03,P<0.05;1.00±0.03 vs 0.40±0.02,P<0.05);接触共培养后,与衰老组相比,共培养组中ACAN和COL2a1的m RNA表达水平均显著性增加(分别为0.43±0.03 vs 0.99±0.05,P<0.05;0.40±0.02 vs1.07±0.04,P<0.05),且与正常组相比无显著性差异。结论:ISN-SCs具有较好的三系分化能力,通过接触共培养能够提高胞外基质蛋白和基因的表达水平,对衰老NPCs产生良好的修复作用,为后续ISN-SCs修复椎间盘的体内研究打下理论基础。

平面和三维培养对兔髓核细胞增殖和基质合成影响的实验研究

目的:探讨兔髓核细胞平面和三维培养对其增殖及基质合成的影响,为椎间盘组织工程寻找一种新的种子细胞获取方法。方法:体外培养兔髓核细胞,分为平面培养组和PLGA支架三维培养组两组,利用倒置显微镜、扫描电镜进行髓核细胞形态学观察,MTT法测定各组髓核细胞增殖情况,HE染色、免疫组化分析髓核细胞Ⅱ型胶原的表达,阿利新兰染色法测定培养液中髓核细胞合成的糖胺聚糖(GAG)含量。结果:经过两周的培养,两组髓核细胞均能够增殖;与平面培养组相比,三维培养组细胞增殖率、Ⅱ型胶原表达量、GAG合成量均增高(均P<0.01)。结论:髓核细胞能够与PLGA支架很好地黏附并增殖;PLGA支架三维培养较平面培养能促进髓核细胞增殖,提高Ⅱ型胶原和GAG的合成量,可作为椎间盘组织工程种子细胞获取的一种新方法。

GFP标记干细胞修复椎间盘退变中的示踪研究

目的探讨绿色荧光蛋白(GFP)示踪时效及GFP标记的骨髓间充质干细胞(MSCs)在移植后参与退变修复过程中的细胞增殖情况。方法使用针吸髓核法建立兔的椎间盘退变模型,体外培养MSCs,并用含有绿色荧光蛋白标记的腺病毒载体(Adeno-XTM-GFP)转染,成为GFP标记的MSCs(GFP-MSCs),于造模2周后植入造模的椎间盘内。在移植后第2、4、6、8周用激光共聚焦显微成像技术,观察MSCs的增殖情况,对比GFP本身荧光和免疫荧光的示踪时间。结果非免疫荧光组GFP本身荧光强度能够持续到4周,后较微弱甚至难以辨别;免疫荧光组用FITC荧光二抗标记的GFP-MSCs在8周内都能够持续稳定的显现荧光,4个时间点GFP-MSCs的阳性率的可信区间分别是:2周(14.64±2.05)%;4周(21.85±2.45)%;6周(31.03±4.03)%;8周(36.37±4.42)%。结论GFP-MSCs在椎间盘微环境中能够稳定增殖。若示踪研究需要持续超过4周,则应对GFP行免疫荧光染色,可以使有效示踪时间持续至少8周。

电视剧场演播厅舞台机械设备的工艺配置

演播厅是为制作电视节目而设计的专业演出场所,能适应歌舞、时装表演、小型音乐会等文艺形式演出。传统的演播厅面积较小,一般用于制作小型的电视节目。随着文化广播事业的发展,大型的。

450吨可调超高支腿提梁机在大型铁路箱梁预制场的应用

文章阐述和总结了新建北京至霸州铁路JBSG-Ⅰ标北京大兴制梁场根据线路特点和梁场实地情况,在市场现有提梁机资源不能满足现场施工需求的情况下,有效的利用了现有提梁机,成功改制并安装了2台450吨可调超高支腿提梁机,使用该提梁机架设了梁场范围内的10片箱梁之后又成功在桥上拼装了架桥机,后续共提梁500余榀上桥,并提升运架一体机喂梁200余次,安全质量状况良好,取得了良好的经济和社会效益。

持续释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架促进骨髓间充质干细胞向神经元分化

背景:越来越多的证据显示,神经生长因子对神经元的存活、分化等有着重要的促进作用,但是神经生长因子半衰期短,稳定性较差,限制了它在临床上的广泛应用。目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞在可持续释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架上向神经元细胞分化的可行性。方法:构建可持续释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架和不含有神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架,将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种在两种支架表面,采用低糖DMEM完全培养基中加入碱性成纤维生长因子、脑源性神经营养因子以及N2和B27神经细胞生长添加剂的诱导方案进行成神经诱导分化。诱导18 d后,免疫荧光染色检测神经元标志物(微管相关蛋白2和巢蛋白)的表达,Western blot检测p-TrkA和p-ERK蛋白表达。结果与结论:①经过连续18 d的诱导,免疫荧光检测显示微管相关蛋白2阳性细胞在空白支架组约为30%,可持续释放神经生长因子组约为70%,而巢蛋白阳性细胞在空白支架组为40%,可持续释放神经生长因子组约为60%,两组比较差异有显著性意义;②Western blot检测结果显示可持续释放神经生长因子组的p-TrkA和p-ERK蛋白表达量明显高于空白支架组,差异有显著性意义;③结果表明,在持续性释放神经生长因子的壳聚糖/聚乳酸羟基乙酸/聚乳酸支架表面,骨髓间充质干细胞可以更好地向神经元细胞分化,其机制可能是通过TrkA/ERK通路来实现的。

剧场环形转台的设计与研究

对转台的一个分枝环形转台进行了改进设计,解决了环形转台摩擦轮驱动由于打滑而产生的丢速现象,从设计上保证了环形转台各转台同旋转中心运行。针对环形转台在运行过程中对定位精度、设备运行的平稳性、平整性和噪声等的较高要求,对承重轮和轨道进行了改进设计,并对系统的计算机控制进行了初步的分析,基本解决了现在使用过程中存在的问题,具有很大的工程实用价值。

记东坡大剧院舞台机械系统改造工程

this paper simply describes the dimension parameters, layout and list of stage machines in Dongpuo theater. It give emphasis on the characteristics of the stage machines such as hoist, side lighting ladder and turntable and so on.

浅谈云南大剧院舞台设备系统配置

云南大剧院坐落于昆明市春城路289号昆明国际会展中心内，是利用原7号、8号展馆进行改造而成的。大剧院能满足歌舞、戏剧、音乐会、杂技和电影放映等多项演出功能的要求，同时能满足大型的会议召开。大剧院建筑面积11000平方米，是目前云南省最大的剧院。剧院台口宽26米，高8．6米，舞台净深27米，侧台宽度11米，深18米，观众厅深度30米，可容纳观众1606人。

粉土路基的施工技术

公路病害随着交通量和汽车轴重的不断增加而频繁出现,特别是粉土地区,由于粉土难以压实、水稳定性差、易冲刷、强度低,导致路基路面病害更加严重,这些病害的出现严重影响了公路的使用性能和使用寿命。本文通过南乐至林州高速公路豫鲁省界至南乐段建设工程低液限粉土路基的施工实践,分析低液限粉土的特点,介绍了低液限粉土路基的施工工艺,并提出了相关施工质量控制要点。

梯度提升机模型对腰椎间盘突出症经皮内镜切除术近期疗效的预测作用

目的探讨梯度提升机(gradient boosting machine,GBM)模型对经皮内镜腰椎间盘切除术(percutaneous endoscopic lumbar discectomy,PELD)治疗腰椎间盘突出症近期疗效的预测效果。方法回顾性分析2016年10月至2018年3月因单节段腰椎间盘突出症行PELD手术的475例患者的临床资料,疗效评价采用腰椎JOA评分,评分改善率≥50%为疗效良好、<50%为疗效不佳。采用GBM模型及多因素Logistic回归分析模型筛选影响手术疗效的因素,比较二者的受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线,计算敏感度、特异度、约登指数,评价GBM模型的预测效果。结果395例患者获得随访,随访时间24个月。疗效优良者347例(87.8%)、疗效不佳者48例(12.2%)。不同年龄、椎间盘突出部位及突出类型、手术节段椎间盘及关节突关节退变水平、突出物矢状径及有无钙化、初次症状至手术时间、邻近节段椎间盘退变水平组疗效优良率的差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄≥60岁[OR=9.15,95%CI(4.04,20.73),P<0.001]、突出物矢状径大[OR=1.37,95%CI(1.18,1.58),P<0.001]是术后2年疗效不佳的危险因素;椎间盘突出单侧型相对于极外侧型疗效不佳的发生概率更小[OR=0.17,95%CI(0.06,0.55),P=0.003];手术节段椎间盘退变Ⅱ级者相对于Ⅲ级者疗效不佳的发生概率更小[OR=0.17,95%CI(0.04,0.70),P=0.014];邻近节段椎间盘退变2级者相对于3级者疗效不佳的发生概率更小[OR=0.29,95%CI(0.10,0.81),P=0.018]。GBM模型预测预后的ROC曲线下面积为0.92[95%CI(0.77,0.96)],灵敏度、特异度和约登指数分别为93.46%、83.33%和0.77,均高于Logistic回归模型的0.86[95%CI(0.73,0.90)]、88.79%、66.67%和0.55。GBM模型和Logistic回归分析模型的预测效应均有统计学意义(P<0.001),两者ROC曲线下面积值的差异有统计学意义(Z=0.11,P<0.001)。结论在预测PELD治疗腰椎间盘突出症的近期疗效方面,GBM模型的预测效能高于多因素Logistic回归分析模型。

掌侧锁定钢板治疗桡骨远端Die-punch骨折

目的评价桡骨远端Die-punch骨折行切开复位掌侧锁定钢板内固定治疗的近期疗效。方法桡骨远端Die-punch骨折13例,年龄47-58岁,均为闭合性损伤。关节面塌陷均超过2mm。采用掌侧入路,关节面复位植骨后用桡骨远端锁定钢板内固定。用DASH调查表进行随访,计算DASH值,测量并分析患侧及自身健侧腕关节活动度。结果 13例的DASH值3.33-11.67(6.54±3.09)分。患侧腕关节活动度在随访时恢复至健侧腕关节的90%以上,但是患侧腕关节活动度较健侧腕关节有明显受损(P<0.05)。结论切开复位掌侧锁定钢板内固定治疗桡骨远端Die-punch骨折的近期疗效显著。

干细胞移植修复椎间盘退变的研究现状

目的总结干细胞对椎间盘退变的修复机制,综述干细胞移植修复椎间盘退变的研究现状。方法查阅近年干细胞移植修复椎间盘退变的相关文献,分析总结干细胞移植修复椎间盘退变的临床疗效、修复机制、影响修复效果的相关因素,以及面临的主要问题。结果临床自体干细胞移植可修复椎间盘退变并有效缓解腰腿痛症状。干细胞在退变椎间盘内可向椎间盘软骨细胞分化,促进细胞外基质以及营养因子合成,延缓椎间盘细胞凋亡,维持椎间盘免疫豁免状态。干细胞的种类与数量、细胞移植的载体支架、干细胞移植前的预处理方法,以及移植椎间盘的退变程度等因素皆可影响干细胞移植的修复效果。减少移植干细胞的回漏、调控干细胞在椎间盘中的迁移分布、探明干细胞在退变椎间盘微环境下维持其干细胞特性的能力和规律是面临的全新挑战。结论基于干细胞移植的生物学修复策略是早期扭转椎间盘退变的可行方案。

骨髓间充质干细胞修复退变椎间盘中营养和分化效应的变化

目的观察骨髓间充质干细胞（MSCs）移植在椎间盘退变修复过程中营养效应与类髓核分化效应的变化。方法用针吸髓核法建立兔的椎间盘退变模型，采取体外细胞培养技术，培养MSCs，并用含有绿色荧光蛋白（GFP）标记的腺病毒转染使之携带有GFP，在造成退变模型2周后以5×10^6个细胞／ml的浓度植入手术节段的椎间盘内。1、2、4、8周末用间接免疫荧光双标结合激光共聚焦显微镜观测MSCs表达的转化生长因子（TGF）-β1、胰岛素样生长因子（IGF）-1和低氧诱导因子（HIF）-1α、Ⅱ型胶原等在不同时间点上的表达及定量分析。结果MSCs表达的TGF—β1、IGF-1在2周左右达到高峰，分别为（22．68±6．83）％、（35．67±6．56）％，之后开始降低；HIF-1α、Ⅱ型胶原在8周中均呈上升趋势，8周最高，分别为（55．35±14．06）％、（37．23±9．53）％，2—4周过程中上升最明显。结论早期（2周时）MSCs以发挥营养效应为主，后期（4周后）以发挥类髓核分化效应为主。

MED治疗腰椎间盘突出症术后三维有限元分析研究

[目的]采用三维有限元的方法,通过Mimics及ANSYS相关软件对MED治疗腰椎间盘突出症术后的脊柱稳定性及生物力学进行研究。[方法]选择正常健康成人志愿者,对其腰椎进行薄层CT平扫,得出相关数据,将其导入Mimics中进行建模,划分网格,建立体模型,材料赋值,得出正常下腰椎模型。通过布尔剪切等功能,模拟手术,建立正常模型、MED摘除手术模型,小开窗手术模型及关节突摘除手术模型。将四组模型导入Ansys软件中进行同样的应力载荷模拟,得出相应的移位云图、应力云图、压力敏感云图,统计云图的数据,对数据进行分析。[结果]随着后路椎板切除面积增大,椎体应力移位明显变大,影响脊柱的稳定性。椎体的应力集中部不因后路手术而改变,而椎间盘切除后压力分布对椎体应力负荷的移位及应力改变较小,达到良好的远期生物力学效果。[结论]MED治疗腰椎间盘突出症术后对脊柱生物力学影响最小,能获得良好的远期生物力学稳定。

过早衰老髓核细胞微环境中BMSCs的生物学行为研究

目的探讨在过早衰老髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)微环境中BMSCs的生物学行为,为充分利用BMSCs干细胞特性进行退变椎间盘修复奠定实验基础。方法收集人退变髓核组织与正常骨髓组织进行NPCs、BMSCs分离、培养及鉴定;对过早衰老诱导的第1代NPCs和正常第3代BMSCs行非接触共培养,根据NPCs与BMSCs不同比例将实验分为A组(75%∶25%)、B组(50%∶50%)和C组(0∶100%)。倒置相差显微镜和透射电镜观察各组BMSCs形态变化;对培养3、6 d的BMSCs进行增殖能力检测:细胞计数试剂盒8检测细胞活力、流式细胞仪检测细胞周期、BrdU标记流式检测DNA代谢;培养6 d检测衰老相关β半乳糖苷酶(senescence associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)活性评价细胞衰老。结果倒置相差显微镜示A、B组BMSCs中混杂的三角形或大多角形细胞增多,尤其是A组;透射电镜观察A、B组均可见典型衰老形态的细胞。培养3、6 d,A组细胞存活率均显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。3 d时,A组G1期细胞比例明显高于B、C组(P<0.05),S期细胞比例明显低于B、C组(P<0.05)。6 d时,A组约81.0%细胞停滞于G1期,S期及G2期细胞比例减小,与B、C组比较各细胞周期分布差异均有统计学意义(P<0.05);B组细胞停滞于G1期比例增加至约74.4%,与C组比较各细胞周期分布差异均有统计学意义(P<0.05)。培养3、6 d,A组掺入的BrdU含量均明显低于B、C组(P<0.05);B、C组间3 d时差异无统计学意义(P>0.05),6 d时B组明显低于C组(P<0.05)。培养6 d,A、B组SA-β-gal活性显著提高,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论过早衰老的NPCs可通过旁分泌效应下调共培养的BMSCs增殖能力,而NPCs数量上的优势使得共培养的BMSCs更早表现出衰老特征。