一种简便且灵敏的核酸杂交新方法——地高辛配基标记探针细胞原位杂交法应用于癌基因表达研究

肿瘤细胞由多聚甲醛直接固定在硝酸纤维素膜上,经蛋白酶消化后与地高辛配基(di-goxigenin)标记的癌基因探针进行DNA-RNA杂交,洗膜后用酶联免疫法显色,可以半定量的确定癌基因在肿瘤细胞中的表达状况。该方法不需提取RNA,因此操作简便易行。由于利用地高辛配基标记探针,克服了同位素放射性和蜕变带来的诸多不便。实验将此法用于肺癌细胞经诱导分化后癌基因表达改变以及白血病细胞中癌基因表达情况研究,5×10~3个细胞即可获得阳性杂交信号。

红细胞分化调节因子对体外培养的L929和KB细胞的生长抑制作用

从兔网织红细胞提纯的红细胞分化调节因子(erythroid differentiation factor,EDF),能对体外培养的自发转化成纤维细胞系L929及人鼻咽癌细胞系KB产生作用。当EDF剂量为0.10μg/ml时,可引起L929细胞形态发生改变,并有细胞核固缩现象。第2d的细胞生长抑制率为64.86％,软琼脂集落形成率为0;第5d时细胞增殖为负值。~3H-TdR掺入率明显降低。EDF剂量为0.15μg/ml时,对KB细胞生长已有抑制作用。EDF剂量达0.30μg/ml时,生长抑制明显。以上结果证明了EDF对恶性细胞具有增殖抑制作用。这种作用对不同种类细胞敏感性不同,并且与剂量呈正相关。

维甲酸诱导黑色素瘤分化的实验研究

我们应用维甲酸对人黑色素瘤细胞系的分化进行了实验研究。实验结果显示:维甲酸对黑色素瘤细也有一定的生长抑制作用,使瘤细胞倍增时间延长,裸鼠皮下移植瘤生长速度减缓,细胞形态亦随之发生变化,由上皮样细胞向梭形或树突状细胞转化。电镜下,诱导后的细胞细胞器较丰富.黑色素小体增多。免疫组化HLA-DR染色在未诱导细胞阳性,诱导后转阴。酪氨酸酶活性在诱导后呈增高趋势,r-src癌基因表达减少。上述结果支持维甲酸通过改变细胞表面的抗原性、癌基因及细胞内酶活性等多种途径发挥诱导分化作用。

细胞融合对肿瘤细胞转移能力的影响

利用基因转移技术，将新霉素抗性质粒ＰＳＶ２ｎｅｏ转入正常小鼠脾细胞，然后用ＰＥＧ促融，使其与具高转移力人肺巨细胞癌细胞系ＰＬＡ８０ｌ－Ｄ９５细胞融合，经Ｇ４１８筛选后获得１个无转移力克隆细胞系ＰＭＳ－２。染色体分析和以新霉素抗性基因为探针的ＤＮＡ－ＤＮＡ斑点杂交均证实，ＰＭＳ－２为杂种细胞克隆。裸鼠接种亲代肿瘤细胞３×１０６个细胞／只可发生明显的肺及淋巴结等脏器转移，接种ＰＭＳ－２７×１０６个细胞／只后仅能形成有完整包膜的肿瘤结节，无转移灶产生。此外，细胞的一般特性、生长速度、３Ｈ－ＴｄＲ参入率等也有明显的改变。提示正常小鼠脾细胞与肿瘤细胞融合后表现出的肿瘤转移能力抑制，可能由肿瘤转移抑制基因控制或其他水平干预所致。

人宫颈鳞状上皮细胞癌克隆细胞系的研究 Ⅱ.HGPRT-突变型细胞系的建立及其生物学特性

用具有稳定遗传标记的突变型细胞进行体细胞杂交的技术,已被广泛应用。突变型细胞形式多样,次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺失(HGPRT-)的突变体细胞是常用的杂交亲本细胞类型。杂种细胞易于在HAT(含次黄嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶核苷)培养液中被筛选。本研究用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)处理人宫颈鳞状上皮细胞癌克隆细胞系CC-801,诱发细胞突变,然后用8-杂氮鸟嘌呤(8-AG)进行筛选,成功地分离了几株抗高浓度8-AG的突变细胞株。

正常人子宫颈长期器官培养的超微结构研究

器官培养既能在一定程度上保持组织的完整性,又能使各种因素同时作用于各种类型的细胞,所以它已越来越广泛的用于癌变原理的研究。为了延长组织在体外存活的时间,并能适应研究组织代谢的需要,培养的方法也在不断的改进。近年来,“摇摆法”已逐渐为人们所采用。“摇摆法”培养和其它器官培养方法的主要不同之处在于它利用机械装置,使培养物交替地处于培养液和按一定比例配制的混合气体之中。气液的交替更接近于体内环境,因此组织在体外存活的时间能延长。

细胞融合技术应用于肿瘤抑制研究的进展

细胞融合技术已广泛应用于生物医学的许多领域,不仅在核质关系、基因调控、遗传互补、肿瘤发生、基因定位、衰老控制等基础理论领域取得了令人鼓舞的结果,而且在杂交育种、病毒诊断、单克隆抗体生产、基因治疗等实际应用领域也展示了美好的前景。本文就细胞融合技术应用于肿瘤抑制研究的进展综述如下。

红细胞分化因子对小鼠红白血病细胞系生长的抑制作用

分析了红细胞分化因子（ＥＤＦ）对小鼠红白血病（ＭＥＬ）细胞生长的抑制作用。当ＥＤＦ剂量为０．１２ｇ／ｍｌ时，处理２ｄ后的３Ｈ－ＴｄＲ掺入率比对照组降低５０％，第３ｄ的细胞增殖抑制率达８２％；在软琼脂上形成的集落数为对照组的０．５２％。同时，处于细胞周期不同时相的细胞数量发生显著改变．Ｇ０加Ｃ１期细胞数比对照组增加５５．６６％，Ｓ期细胞数增加１４．３％，而Ｇ２和Ｍ期细胞数则减少２８．８％。此外，细胞电泳迁移率也减少到对照组的５０％。以上结果说明，ＥＤＦ对ＮＩＥＬ细胞的增殖有抑制作用。

神经发育中基因调控研究进展

神经发育是一个极其复杂的生物学过程,最近每年都有大量的研究报告,本文将为读者提供几个侧面,以引起我国科学工作者的兴趣。 早期神经发生的有关基因 导致神经原基(neural Primordium)形成的早期神经发生是研究神经细胞分化的合适系统。果蝇神经母细胞在外胚层神经发生区中分离出来是神经发育的开端。

癌基因与白血病

癌基因与肿瘤的发生和发展有关。但其活化前原本是具有正常功能的基因,称原癌基因。基因突变可使正常细胞转化为恶性或不死性细胞。过去30年中,细胞遗传学和分子遗传学业已取得突破性成就。研究提示,癌症是一种获得性基因异常疾病。

尖锐湿疣和假性湿疣病理组织学及人乳头瘤病毒DNA研究

应用免疫组化、核酸原位杂交和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等方法，对２７４例尖锐湿疣和假性湿疣病例的活检组织石蜡包埋标本，进行病理组织学和人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６ｂ、１１ＤＮＡ及核壳抗原（ＨＰＶ－Ａｇ）的检测。结果：尖锐湿疣和假性湿疣表面上皮呈乳头状结构，尖锐湿疣有明显的基底细胞增生、上皮增厚、典型的挖空细胞；假性湿疣则无上述改变。尖锐湿疣组织中ＨＰＶ６ｂ、１１ＤＮＡ检测阳性率分别为：核酸原位杂交法８２．５％，ＰＣＲ法８３．９％，免疫组化法检测ＨＰＶ－Ａｇ阳性率为４８．９％。假性湿疣组织中，核酸原位杂交检测ＨＰＶ６ｂ、１１ＤＮＡ和免疫组化法检测ＨＰＶ－Ａｇ无１例阳性，ＰＣＲ法检测ＨＰＶ６ｂ、１１ＤＮＡ，３例阳性。提示：假性湿疣是外阴和阴道粘膜结构异常的表现，局部表现易与尖锐湿疣混淆。ＰＣＲ法检测灵敏，阳性率高，核酸原位杂交法有细胞定位的优点。

白血病中N－ras，H－ras，K－ras，Myc，Src和Sis高表达及其意义

白血病中Ｎ－ｒａｓ，Ｈ－ｒａｓ，Ｋ－ｒａｓ，Ｍｙｃ，Ｓｒｃ和Ｓｉｓ高表达及其意义＊＊本院青年科学基金资助课题（８９１２０４０）＊＊中国医学科学院基础医学研究所北京１００７３０董陆佳鲍家驹＊＊沈德愉＊＊贾蜀琼蒋本荣军事医学科学院附属医院北京１０００３９...