软儿梨的抗炎抗氧化作用

软儿梨是甘肃特色水果,具有润肺止咳的功效,但对其机制研究甚少。炎症是呼吸道疾病的主要诱因,该研究旨在通过体内体外试验评价软儿梨的抗炎抗氧化作用,为其用于呼吸道疾病提供理论依据。采用小鼠耳肿胀试验,以脏器指数、白细胞数量以及肿胀抑制率为指标,探讨软儿梨抗炎作用;采用大鼠足肿胀试验,以抗氧化酶活性、丙二醛及前列腺素E2含量为指标,探讨软儿梨的抗氧化作用。通过体外自由基清除试验,采用四参数拟合法,探讨软儿梨对羟自由基(OH·)、超氧阴离子自由基(O_(2)^(-)·)和二苯基苦基苯肼自由基(Diphenyl Picrohydrazine,DPPH·)的清除力。结果表明,软儿梨能显著控制因二甲苯而引起的小鼠耳肿胀(高剂量组抑制率达36.16%),降低脏器指数,减少外周血中白细胞总量以及中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞数量;显著降低蛋清致炎大鼠肿胀足掌中前列腺素E2含量和血清丙二醛含量,增强蛋清致炎大鼠血清中抗氧化酶活性。在检测浓度范围内,软儿梨对DPPH、OH^(-)和O_(2)^(-)自由基均表现出较强的清除力,IC_(50)分别为:0.26、0.23和0.27 g/mL。因此,软儿梨具有较好的抗炎抗氧化作用,其机制可能与减少致炎因子产生、增加自由基清除力、增强抗氧化物酶活性有关。

基于网络药理学与非靶向代谢组学探讨细辛的肝损伤机制

细辛是临床常用解表药,但其毒性限制了其使用。该研究采用网络药理学与代谢组学相结合的方法探讨细辛的肝损伤机制。GEO数据库下载肝损伤相关数据集GSE54257,采用Limma包对数据集GSE54257进行差异表达基因分析。TCMSP、ECTM、TOXNET等数据库筛选细辛有毒成分与靶点基因,与GSE54257差异表达基因相映射,得到细辛肝损伤靶点基因并构建PPI网络。对靶点基因进行GO和KEGG富集分析,结合上游调控miRNA信息绘制“miRNA-靶点基因-信号通路”网络。30只大鼠分为空白组与细辛高、低剂量组,每日给药1次,连续给药28 d后检测肝功能指标和肝脏病理变化。空白组与细辛高剂量组随机取5个肝脏组织样本,采用超高效液相色谱-质谱(UHPLC-MS)技术分析各组样本小分子代谢产物。利用正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,并对差异代谢物进行富集分析、相关性分析和聚类分析,最后利用MetaboAnalyst平台对差异代谢物进行通路富集分析。经分析发现,细辛中有毒成分有14个,对应靶点基因37个,经与GSE54257中差异表达基因映射得到12个与细辛肝脏毒性相关的基因。动物实验结果显示,细辛可以显著升高大鼠肝功能指标,降低自由基清除酶活性,改变肝脏氧化应激水平,诱发脂质过氧化损伤。非靶向代谢组学分析结果显示,与空白组比较,细辛组大鼠肝脏组织中有9个代谢物上调,16个代谢物下调,这25个代谢物相关性较强,聚类良好。通路富集分析显示,这些差异代谢物与细辛12个肝毒性靶点基因主要参与嘌呤代谢,以及缬氨酸、亮氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸等的生物合成与代谢。该研究证实,细辛致肝损伤作用是多成分、多靶点、多信号通路作用的结果,其机制可能与抑制核苷酸合成,影响蛋白质代谢有关。

细辛通过上调p53介导铁死亡致大鼠肝损伤的作用机制研究

目的 探讨细辛通过上调p53表达介导铁死亡致大鼠肝损伤的作用机制。方法 32只大鼠随机分为对照组和细辛低、中、高剂量(0.27、0.81、1.35 g/kg)组,每组8只,每日ig给药1次,连续28 d。末次给药2 h后采集血清样本和肝脏样本,全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase,ALP)水平;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;比色法检测超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活性和还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSH)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)及Fe2+含量;化学荧光法检测活性氧物质(reactive oxide species,ROS)含量;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝脏病理变化;定量反转录-聚合酶链锁反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测p53、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 members 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor1,TFR1)m RNA含量;Western blotting检测p53、SLC7A11、GPX4、FTH1、TFR1蛋白表达。结果 与对照组比较,细辛组肝功能指标(ALT、AST、ALP)和血清致炎因子(TNF-α、IL-1β)水平显著升高(P<0.05);肝脏出现明显炎性改变;肝组织中SOD活性和GSH水平显著降低(P<0.05),氧化应激水平(ROS、MDA)和Fe2+含量显著升高(P<0.05);p53和TFR1的蛋白及m RNA表达均显著上调(P<0.05),GPX4、SLC7A11和FTH1的蛋白及m RNA表达均显著下调(P<0.05)。结论 细辛对大鼠肝脏有一定的损伤,其机制可能与上调p53、TFR1表达水平,下调FTH1表达水平,提高细胞内Fe2+含量;同时下调SLC7A11表达,使GPX4表达水平降低进而诱发肝细胞铁死亡有关。

基于多数据平台探讨桂枝茯苓丸对乳腺癌的干预机制

目的 利用多数据平台与生物信息分析技术探讨桂枝茯苓丸对乳腺癌的干预机制,并通过细胞试验对分析结果进行验证。方法 从GEO数据库下载乳腺癌相关数据集,分析乳腺癌差异基因;从TCMSP数据库中筛选出桂枝茯苓丸的主要有效成分及作用靶基因;2组靶基因映射出桂枝茯苓丸治疗乳腺癌的关键靶基因。通过TCGA数据平台分析关键靶基因在乳腺癌中的表达,并通过TIMER、CPTAC Data Portal、Kaplan-Meier plotter、TISIDB、SangerBox等数据平台分析该表达与乳腺癌免疫微环境、免疫浸润水平、基因组异质性、免疫亚型和分子亚型以及不良预后的关系。通过Metascape分析平台对关键靶基因进行KEGG通路富集,寻找可能信号通路。最后采用血清药理学方法通过CCK-8试验、细胞划痕试验、Transwell小室试验及Westernblotting技术在体外对分析结果进行验证。结果 桂枝茯苓丸中有效成分42个,对应靶点185个,与GEO数据库映射得到与乳腺癌治疗相关的关键靶点14个,经与TCGA中乳腺癌差异基因比对,得到桂枝茯苓丸治疗乳腺癌的6个关键靶基因。这6个靶基因表达与乳腺癌中6种免疫细胞水平、3个免疫微环境评分、乳腺癌免疫亚型及分子亚型都有很强的相关性(P<0.05),在基因组异质性相关性上也表现出了一致性,且与不良预后有密切的关系(P<0.05)。经KEGG富集分析发现,这6个基因主要富集在PI3K/Akt等信号通路上。细胞试验发现桂枝茯苓丸含药血清可以显著抑制乳腺癌HCC1937细胞的增殖、迁移与侵袭,还可降低HCC1937细胞中p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K蛋白相对表达,且作用呈剂量依赖性。结论 桂枝茯苓丸可能通过阻断PI3K/Akt信号通路,调节肿瘤免疫微环境实现对乳腺癌的干预作用。