交叉反应性抗类脂A单克隆抗体的制备及初步鉴定

应用杂交瘤技术得到２株可稳定分泌高效价抗鼠伤寒杆菌类脂Ａ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，二株均为ＩｇＧ１，且与大肠杆菌类脂Ａ以及绿脓杆菌、布氏杆菌均有较好的交叉反应，并对大肠杆菌的致死性攻击具有一定的保护效应。

噬菌体表达短肽模拟脂多糖类脂A表位的研究

目的：得到拟类脂Ａ的六肽。方法：用抗类脂Ａ的单克隆抗体筛选噬菌体随机六肽库，经四轮筛选后进行ＥＬＩＳＡ检测，用得到的１５个阳性克隆分别免疫小鼠，并将使小鼠产生抗ＬＰＳ抗体的１０个克隆进行测序，将保守序列进行肽合成。结果：得到保守序列为ＬｙｓＰｈｅＳｅｒＳｅｒＡｒｇ，即ＫＦＳＳＲＸ。固相合成此小肽可与其１Ｂ６抗体结合，且此结合可被ＬＰＳ抑制。

TPA 及细胞因子对 U937 细胞中 IL-1β mRNA 表达的影响

本文利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法，检测了几种细胞因子及ＴＰＡ对人单核细胞白血病传代细胞系Ｕ９３７细胞中ＩＬ１βｍＲＮＡ表达的影响。结果显示，ＴＮＦα，ＩＬ６，ＩＦＮγ，ＩＬ２，ＩＬ３，ＩＬ８，ＩＬ９和ＧＭＣＳＦ对ＩＬ１βｍＲＮＡ的表达，均有不同程度的刺激作用，尤以ＴＮＦα和ＩＬ６最为明显。ＴＰＡ刺激Ｕ９３７细胞表达ＩＬ１βｍＲＮＡ的时间效应显示，１２ｈ表达量较高；９ｈ表达量次之；６ｈ表达量较少；

人IL－1βPCR－cDNA片段的克隆及鉴定

人ＩＬ－１βＰＣＲ－ｃＤＮＡ片段的克隆及鉴定鲍永利，杨贵贞，于永利（白求恩医科大学免疫教研室，长春１３００２１）ＩＬ－１β是一个生物学效应极其广泛的细胞因子，目前认为它与中枢神经系统的生长发育及损伤修复有关。本文利用ＰＣＲ技术扩增了ＩＬ－１βｃＤＮＡ...

细胞因子转基因治疗肿瘤的可能机制

本文将以几种主要的细胞因子为例阐述其转基因抗肿瘤的作用机制。将细胞因子Ｇ－ＣＳＦ，ＩＬ－６，ＴＮＦ－α，ＩＦＮ－γ基因转入到肿瘤传代细胞系或杀伤细胞中，再移植给同系鼠，移植后的细胞，在局部所分泌的细胞因子通过自分泌或旁分泌从以下两方面起作用：使杀伤性效应细胞向肿瘤局部聚集并增强其功能；增强肿瘤的ＭＨＣ或肿瘤相关抗原的表达，从而提高效应细胞对肿瘤细胞的识别能力。已知每种细胞因子转基因治疗肿瘤的机制有所不同，现将有关内容综述如下。

竹叶中黄酮提取纯化工艺研究

采用正交试验的方法对竹叶中黄酮的乙醇提取条件进行了系统研究,同时采用大孔吸附树脂吸附法对纯化条件进行了研究.结果表明:以30倍体积80%的乙醇水溶液在80℃水浴中浸提3 h为最佳,4种大孔吸附树脂中AB-8树脂为纯化的最适树脂.

麻叶千里光挥发油抗病毒活性及成分分析

利用体外细胞病变效应(CPE)法,发现菊科千里光属植物麻叶千里光(Senecio cannabifoliusLess.)挥发油对呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)致HeLa细胞病变有显著的抑制作用,能不同程度地延缓副流感病毒、柯萨奇病毒B3、腺病毒Ⅲ型和流感病毒致细胞病变作用。为进一步确定麻叶千里光挥发油抗病毒的活性成分,经气相色谱-质谱联用技术对其进行了成分分析。麻叶千里光挥发油得率0.22%(mL/100g),从中初步鉴定了26种化合物,占挥发油总量的88.47%,主要为正十六(烷)酸(27.01%)、胡萝卜次醇(13.73%)、9,12-十八碳二烯酸(9.99%)、α-蒎烯(9.28%)和β-蒎烯(5.58%)。在鉴定出的化合物中,萜烯占47.42%,脂肪酸类占37.61%,其它成分仅占3.44%,故提示麻叶千里光挥发油中高含量的萜烯和脂肪酸类可能与其抗病毒活性有关。

葛花异黄酮对急性心肌梗死小鼠心肌的保护作用

目的通过小鼠急性心肌梗死模型观察葛花异黄酮对缺血心肌的影响,并探讨其作用机制。方法开胸结扎左冠状动脉前降支建立小鼠急性心肌梗死模型,以丹参注射液为阳性对照,观察葛花总黄酮低、高剂量组对心肌梗死面积、血清心肌酶、血清SOD和MDA含量的影响;并通过RT-PCR的方法,检测葛花总黄酮对缺血心肌β-肾上腺受体激酶1(β-adrenergic receptor kinase,β-ARK1)表达的影响。结果葛花总黄酮可明显缩小小鼠心肌梗死面积,降低血清心肌酶和MDA含量,下调心肌β-ARK1 mRNA的表达,并随着剂量的增加其作用加强。结论葛花总黄酮对急性心肌梗死小鼠心肌有明显的保护作用,其作用机制与其抗氧化损伤及下调心肌β-ARK1mRNA的表达有关。

金丝桃素分子结构及其与HIV病毒蛋白酶作用的分子动力学研究

采用用计算化学方法研究金丝桃素分子结构特征,并用分子动力学方法研究其与HIV蛋白酶的相互作用,探讨其可能的抗HIV病毒作用机理.结果表明,金丝桃素分子结构具有刚性特征,与HIV蛋白酶在酶的催化活性位点与ASP-A25 and ASP-B25以氢键作用相结合.

提取高质量人参RNA的方法研究

针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90～120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究.

苦碟子挥发油化学成分的分析

对我国东北地产苦碟子中挥发油成分进行系统分析,确定挥发油的化学成分,为阐述其生物活性提供依据.采用水蒸汽蒸馏法提取挥发油,气相色谱--质谱联用仪进行分析.结果鉴定出37种化合物.在这些化合物中,脂肪烷烃类占53.21%,酮、醛类占39.05%,烯、烯醇、烯酸类占4.94%,酯类占1.57%.其挥发油的主要成分是6,10,14-三甲基-2-十五烷酮,含量为33.98%.

离子凝聚法制备负载流感疫苗的壳聚糖微球

采用三聚磷酸钠(TPP)作为离子交联剂,应用离子凝聚法制备负载流感疫苗的壳聚糖微球.筛选出壳聚糖起始质量分数为1%.TPP的浓度对壳聚糖微球的制备影响较大,采用低浓度的TPP(200μg/mL)制备的微球放置过夜均出现沉淀现象,高浓度的TPP(800μg/mL)在制备过程中出现絮状沉淀.固化比影响微球的释放行为,固化比为1∶1的微球爆炸式释放率达到90%,固化比为1∶3的微球6 h后逐步释放,12 h后释放率达到95%.固化比为1∶5的微球6 h后没有明显的释放行为.壳聚糖溶液的pH对微球的制备和释放没有显著的影响.通过对负载流感疫苗的壳聚糖微球的制备条件和释放行为的研究结果表明,pH=5.6的壳聚糖溶液,固化比为1∶3,TPP的质量浓度为400μg/mL是较理想的流感疫苗壳聚糖微球的制备条件.

千金子油理化性质及其脂肪酸和挥发油成分分析

对千金子油理化性质进行了系统的分析测试,并利用气相色谱法分析了千金子油脂肪酸及千金子挥发油,结果表明,千金子油中油酸含量最高占78.158%,其次是软脂酸、硬脂酸,分别为8.513%和5.523%;千金子挥发油中油酸、亚油酸和油酸-2-丙三醇酯含量较高,分别为17.747%,15.852%和13.196%.

地锦草总黄酮最佳提取分离工艺的研究

采用四因素三水平的正交实验方法,对地锦草总黄酮的最佳提取工艺进行了探索.采用乙酸乙酯萃取、酸碱沉淀、铅盐沉淀3种方法,对其最佳分离工艺进行了探索.正交实验结果表明:温浸法中四因素对地锦草黄酮的影响顺序为乙醇浓度>样液比>提取温度>提取时间.通过实验得到了地锦草总黄酮的最佳提取工艺:以10倍体积的50%的乙醇水溶液在80℃浸提1 h.地锦草总黄酮的最佳分离方法为酸碱沉淀法.这些数据为中药地锦草的开发和应用提供了科学依据.

决明子中总蒽醌苷元的大孔吸附树脂纯化工艺的研究

目的探索决明子蒽醌苷元的大孔吸附树脂纯化工艺。方法以决明子总蒽醌苷元质量分数和收率为主要考察指标,比较了乙醚和氯仿对蒽醌苷元提取的专属性,考察了大孔吸附树脂S-8、AB-8、X-5、NKA-12、D4020、D-101对决明子蒽醌苷元的吸附和解吸附特性以及纯化能力。结果决明子药粉采用氯仿浸提,上S-8型大孔树脂柱,水洗至中性,乙醇-5%NaOH(4∶1)洗脱,醇碱洗脱液浓缩、酸化处理得到质量分数为42.62%的蒽醌苷元。结论建立了一种蒽醌苷元的纯化工艺,为决明子中蒽醌苷元类成分的工业化生产提供依据。

北五味子中一种新的莽草酸衍生物的分离纯化及其含量测定

从北五味子中提取分离得到一种新的莽草酸衍生物,经一维、二维核磁共振波谱(1D NMR,HMQC,HMBC)等数据解析,鉴定为莽草酸正丁酯.并采用ZORBAX Extend C18柱,以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长为215nm,流速1.0mL/min,建立了北五味子中莽草酸正丁酯含量的高效液相色谱分析方法.结果表明,莽草酸正丁酯在2～65μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,平均回收率为98.25%,相对标准偏差(RSD)为1.55%,表明本法简单准确,重复性好.

人脂肪干细胞的分离、体外培养及鉴定

目的:进行人脂肪干细胞的分离、体外培养及鉴定,为组织工程的进一步研究提供实验依据。方法:将剪碎的人脂肪组织加入Ⅰ型胶原酶消化,离心。将细胞悬液置于6孔培养板中,37℃、5%CO2培养箱中培养,细胞达80%融合时进行传代。选取第3代细胞,进行免疫组织化学染色,检测细胞表面抗原标记物;选取第3代细胞,分为成骨诱导组和成脂诱导组,每组又分为诱导组(加入相应诱导培养基)及对照组(未经诱导的细胞)。成骨诱导72h后进行碱性磷酸酶(AKP)含量检测,8d后进行茜素红染色,检验细胞内是否出现钙沉积;成脂诱导2周后进行油红O染色,检测细胞内是否形成脂滴。结果:培养细胞均有CD44、CD49d抗原阳性表达,不表达CD45、CD106抗原;成骨诱导72h后,诱导组细胞内AKP含量(0.4883U·g-1prot)较对照组(0.0632U·g-1prot)明显增高(P<0.05);8d后诱导组茜素红染色阳性,对照组阴性;成脂诱导2周后油红O脂肪颗粒染色为阳性,对照组为阴性。结论:利用原代细胞培养技术可成功地从人脂肪组织中分离出脂肪干细胞。

人参叶全长cDNA文库的构建及部分克隆的序列分析

提取人参叶组织总RNA，用SMART^[TM] cDNA文库构建试剂盒所示方法，以λTriplEx2为载体构建了人参叶cDNA文库．经测定该文库初始滴度为1．2×10^6 pfu／mL，扩增后滴度为7．6×10^10pfu／mL，重组率为86％．插入片段长度为0．3～2．5kb．随机挑取16个cDNA克隆体进行测序分析，结果显示16个克隆体中有8个同GenBank中登录的人参皂苷合成相关基因GBR5，GBR3和GBR1高度同源，8个为新的基因序列．人参cDNA文库的建立为克隆人参中有明确功能的特异基因以及克隆和研究人参中的新基因奠定了必要的物质基础．

RPE细胞光损伤相关新基因s-lap编码区克隆及s-lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞中的表达与定位

目的 克隆新基因s lap编码区序列 ,研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。方法 分析s lapcDNA序列 ,建立视网膜色素上皮 (retinalpigmentep ithelium ,RPE)细胞光损伤模型 ,RT PCR克隆其编码区序列 ,构建了带有绿色荧光蛋白的目的基因真核表达重组质粒 pcDNA3 .1 GFP/s lap ,转染B16黑色素瘤细胞 ,观察s lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。结果 s lapcDNA序列含有编码10 1个氨基酸的开放读码框架 ,有 2个可能的N 糖基化位点 ,1个可能的caseinkinaseII磷酸化位点和 2个可能的PKC磷酸化位点 ;成功地克隆了s lap蛋白编码区序列 ,构建了其真核表达载体 ,荧光显微镜观察 ,在转染 pcDNA3 .1 GFP质粒的B16黑色素瘤细胞中 ,荧光呈网状分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染s lap/GFP融合基因的B16黑色素瘤细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 新基因s lap编码的蛋白质可在B16黑色素瘤细胞中获得表达 ,并以细胞核内高表达。