具有自发活性的重组caspase-3对裸鼠SKBr-3肿瘤生长的抑制

目的 :探讨具有自发活性的caspase 3分子对乳腺癌肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法 :重构型caspase 3转染SKBr 3细胞后 ,以观察细胞的形态、进行细胞计数和及流式细胞仪分析等方法 ,验证caspase 3大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase 3分子的促凋亡活性。将重组真核表达载体 pcDNA3 revcas pase 3直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤生长的抑制作用 ,间接免疫荧光染色法检测肿瘤组织中重构型caspase 3基因表达情况 ,用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡。结果 :重构型cas pase 3基因转染后 ,可诱导SKBr 3细胞凋亡 ,将 pcDNA3 revcaspase 3重组质粒直接注射荷SKBr 3瘤裸小鼠后 ,肿瘤的生长明显受到抑制 ,免疫组化染色可检出重构型caspase 3蛋白的表达 ;TUNEL法检测证实肿瘤细胞发生凋亡。结论 :重构型caspase 3基因的体内表达可诱导SKBr

靶向于HER2的siRNA表达载体在人乳腺癌细胞SKBr-3中的表达

目的:探讨针对HER2分子的RNA干涉对乳腺癌细胞生长的影响.方法:人工合成DNA,经退火磷酸化后克隆入pSUPER载体.基因转染后通过观察细胞形态和细胞计数等方法验证发夹状小干涉RNA(siRNA)对细胞生长状态的影响,以激光共聚焦检测基因表达情况.结果:siRNA表达载体转染后可以引起SKBr-3细胞大量死亡,间接免疫荧光检测出HER2蛋白表达降低.结论:针对HER2进行RNA干涉可在体外抑制SKBr-3细胞生长.

HER2基因沉默抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长和侵袭

目的:探讨针对HER2基因的RNA干涉对人胃癌细胞生长和侵袭的影响。方法:构建了针对癌基因HER2的siRNA表达载体,分别命名为pcDNA3-sihe1和pcDNA3-sihe2,将构建的干涉载体与对照载体转染胃癌SGC-7901细胞,通过间接免疫荧光实验确定干涉效果;以软琼脂集落形成实验检测干涉后细胞的集落形成能力,以流式细胞术检测细胞在悬浮培养条件下的凋亡情况;并以Boyden chamber法检测转染后细胞的侵袭能力。结果:成功构建针对癌基因HER2的siRNA表达载体,siRNA表达载体转染SGC-7901细胞后HER2表达水平明显降低,证实siRNA成功抑制HER2蛋白的表达。HER2低表达的细胞株集落形成能力降低,流式细胞术检测发现HER2下调可引起胃癌细胞的凋亡,Boydenchamber实验表明针对HER2的RNA干涉可抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭能力。结论:RNA干涉有效地抑制了HER2分子的表达,进而影响SGC-7901细胞的生长和侵袭,本实验为进一步研究HER2分子与肿瘤细胞生长和转移的关系奠定了基础。

氢氧化钙根管消毒剂对根尖封闭性影响的研究

目的:研究氢氧化钙根管消毒剂的使用对根尖封闭能力的影响。方法:60个离体单根管前牙,随机分为4组,第1组和第2组不使用根管消毒剂,第3组和第4组使用氢氧化钙根管消毒剂。第1组和第3组用K锉联合生理盐水冲洗处理根管;第2组和第4组用K锉联合170g/LEDTA+10g/L次氯酸钠液冲洗处理根管。4组均采用冷牙胶侧方加压技术进行根管充填,染料渗入法测量根尖微渗漏值,评价各组根尖封闭能力。结果:使用氢氧化钙根管消毒剂的根尖封闭能力显著大于不使用根管消毒剂(P<0.05)。使用不同的冲洗剂结合K锉去除氢氧化钙根管消毒剂对根管微渗漏无明显影响(P>0.05)。结论:氢氧化钙根管消毒剂的使用可增强根尖封闭能力。

氢氧化钙类根管消毒剂的研究进展

氢氧化钙是根管消毒中常规选用材料之一。与其他根管消毒剂相比,具有吸湿性强,组织相容性佳,抗菌性强等优点,但同时也面临着操作较复杂,消毒时间较长等问题。本文主要就氢氧化钙的抗菌性, 组织相容性及其作为消毒剂对于根管充填封闭性的影响等方面所做的研究进行综述。

罗沙司他治疗心血管疾病的最新进展

心血管疾病目前仍然是导致死亡率较高的疾病之一,当前防治心血管疾病的药物可以明显改善症状,但在降低死亡率方面仍有不足,所以需要既能改善症状,又能减少死亡率的新型药物。罗沙司他作为一种脯氨酸羟化酶抑制剂,通过调控缺氧诱导因子(HIF)的表达,可以有效改善患者缺氧症状,从而延长生存时间。HIF几乎参与机体所有发育、病理或生理的过程,包括促红细胞生成素的生成、铁吸收代谢、细胞分化、能量代谢、炎症和免疫调节等过程。目前该药在治疗肾性贫血方面有很好的前景,但在心血管疾病方面应用还较少。该文系统、全面地探讨了罗沙司他在心血管疾病中的作用,以期为心血管疾病的治疗提供一定帮助。

免疫组化染色及FISH检测12号染色体短臂捕获对Ⅱ型睾丸生殖细胞肿瘤的诊断意义

目的:分析Ⅱ型睾丸生殖细胞肿瘤(TGCT)的各亚型病理形态以及免疫组化特点、分子生物学改变,探讨免疫组化染色(IHC)及荧光原位杂交(FISH)检测在TGCT诊断分型中的意义。方法:收集97例TGCT(含有精原细胞瘤成分75例,胚胎癌成分17例,卵黄囊瘤成分11例,成熟性畸胎瘤16例,未成熟畸胎瘤3例,表皮囊肿1例),正常睾丸组织20例,以及非生殖细胞肿瘤的睾丸肿瘤6例。通过IHC检测TGCT各亚型对于不同抗体的阳性表达情况,并运用FISH技术检测各亚型中12号染色体短臂等臂和扩增的发生率。结果:TGCT各亚型的免疫表型各有不同,人类婆罗双树样基因-4(SALL4)及胎盘碱性磷酸酶(PLAP)最广谱、敏感性高,CD117及人八聚体结合转录因子4(OCT4)在浸润性精原细胞瘤和原位生殖细胞瘤(GCNIS)中强阳性表达,而在正常生精小管不表达。卵黄囊瘤显著表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3),表达范围和强度均优于人调节T细胞特异转录因子3(GATA3)和甲胎蛋白(AFP)。胚胎癌表达人广谱细胞角蛋白(CKpan)、OCT4、CD30。绒癌表达人绒毛膜促性腺激素(h CG)。浸润性TGCT中12号染色体短臂发生等臂和扩增的阳性率为96.7%(29/30)。结论:临床病理工作中,绝大部分病例单凭组织形态观察即可诊断TGCT,IHC检测利于更精确的分型,对于个体化治疗选择和预后评估意义重大。12号染色体短臂捕获是Ⅱ型TGCT的特异性分子改变,有助于排除其他病变。

抗HER2单链抗体融合凋亡蛋白对SKOV3细胞的靶向杀伤

目的 :探讨分泌表达的抗HER2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白对HER2抗原阳性肿瘤细胞的靶向杀伤作用。方法 :将重构型人caspase 3基因亚克隆入pCMV e2 3scFv PEII PEIII的相应位点 ,构建重组真核表达载体 pCMV e2 3scFv PEII revcasp3,并转染人T淋巴瘤细胞系Jurkat,筛选并建系。用ELISA检测培养上清中融合蛋白的分泌表达。通过共培养实验观察含有该融合蛋白的培养上清对人卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用。结果 :融合蛋白基因可在Jurkat细胞中 ,分泌表达并杀伤SKOV3细胞。结论 :分泌表达的抗erbB2单链抗体与重构型人caspase

ATM业务监控的一种模糊逻辑判决算法

本文描述了一种用于ＡＴＭ业务监控的模糊逻辑算法．在本算法中信元的合法性通过提取进入网络的信元流的平均参数和突发性参数，并根据一组模糊规则决定．利用计算机仿真对本算法进行了研究，结果表明本算法对业务流平均到达率的响应和对突发性的响应都优于漏桶算法．

LTE/LTE-A系统自组织网络技术和标准化进展

文章指出利用自配置技术,每个基站可以在电信管理网络(OAM)节点允许的范围内,自主地选择物理小区标识并建立和维护邻区关系;利用自优化技术,每个基站可以根据当前的负载和性能统计情况,进行参数调整,优化系统性能;利用自治愈技术,OAM持续监测通信网络,一旦发现可以自动解决的故障,就启动对相关必要信息的收集,进行故障分析,并根据分析结果触发恢复动作。文章认为不断增加的基站数量、共存的2G/3G/4G系统、异构网络(HetNet)引入的分层网络架构等,导致网络变得越来越复杂,巨大的管理工作和高昂的运维成本,使得采用以自配置、自优化和自治愈为核心特征的SON技术成为LTE/LTE-A系统的必然选择。

RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究

目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞U87细胞中对MAGE1基因表达的干涉作用。方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE1基因核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建核糖核酸干扰(RNAi)质粒载体。利RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干效果。结果:重组构建的pSUPERMAGE1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成地插入至预计位点,且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论:载体的成功构建并能对U细胞中的MAGE1分子进行RNAi,为进一步研究MAGE1在肿瘤中的作用,分析基因功能,展开肿瘤基因治疗奠了基础。

hTERT siRNA表达载体的构建及对转染的HeLa细胞生长抑制作用

目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况.结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢.结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.

瞬时转染和稳定转染对RNAi抑制乙型肝炎病毒S基因表达的影响

目的:构建针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因的siRNA表达载体pSUPERS1和pSUPERS2,观察瞬时转染及稳定转染对RNAi抑制HBV基因表达作用的影响.方法:设计并合成针对HBVS基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体分别瞬时转染和稳定转染表达HBV的2.2.15细胞,对所得细胞上清中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,RTPCR检测siRNA对靶基因mRNA的抑制效果,并比较两种转染方式对RNAi抑制HBV基因表达作用的影响.结果:在稳定转染并经潮霉素筛选所得的单克隆细胞株中,pSUPERS1和pSUPERS2均能明显抑制HBsAg及HBeAg的分泌(P<0.01),抑制率分别为83%和78%,RTPCR结果证实HBV的mRNA明显降低,而瞬时转染细胞在蛋白质水平上及mRNA水平上的结果则比稳定转染的结果逊色.结论:针对HBVS基因的siRNA能稳定、高效、特异地抑制HBV基因的表达,转染效率对于靶基因的RNA干涉作用有明显的影响.

人抗HBsAg单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定

目的:构建人抗HBsAg单链抗体(ScFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protam ine,tP)融合基因,在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv/tP融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HBsAg ScFvHBs15基因,在其3′端引物引入tP的编码基因,PCR扩增获得ScFv/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET-32 a后,在大肠杆菌BL2 l(DE3)LysS内诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及W estern b lot鉴定后,用N i-NTA螯合层析介质纯化.间接ELISA分析ScFv/tP融合蛋白的亲和活性,凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合的情况.结果:成功获得人抗HBsAg ScFv/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的ScFv/tP融合蛋白不仅保持了与HBsAg结合的能力,同时具有DNA结合活性.结论:ScFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,为该ScFv的进一步应用奠定了基础.

针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用

目的:构建针对HER2/neu的RNA干涉载体,观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响.方法:设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pSUPER质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPCA1,RTPCR检测HER2/neu的mRNA表达,Westernblot和间接免疫荧光法检测HER2/neu的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长.结果:肺腺癌细胞系SPCA1存在HER2/neu过表达;成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPERsiHER2;瞬时转染SPCA1细胞,HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低;G1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P<0.05).结论:成功构建了HER2/neuRNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPCA1HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.

ATM业务监控的最差通过流分析及二级漏桶算法

讨论了一定监控算法下最差通过流的概念，强调了最差通过流的参数特性是评价一种业务监控算法的最重要指标之一．对基本漏桶和缓冲漏桶算法进行了比较．基于改善最差通过流特性及减小信元缓冲器数量的考虑，提出了二级漏桶算法．分析和计算机仿真结果表明：本算法下最差通过流特性较缓冲漏桶算法有所改善，同时所需缓存器数量也比缓冲漏桶算法减少．

VEGF及CD147在单核细胞来源的泡沫细胞中表达动力学的研究

目的:研究CD147,VEGF在单核细胞来源的泡沫细胞中的表达动力学的,探讨CD147,VEGF与动脉粥样硬化的关系.方法:以氧化型低密度脂蛋白诱导,建立人单核细胞系(U937细胞)分化的泡沫细胞模型,通过油红O特殊染色的形态学鉴定.将U937细胞在不同浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL,0,25,50,100,200mg/L)条件下培养48h;在100mg/Lox-LDL条件下,在培养的不同时间点(0,6,12,24,48h)分别收集泡沫细胞和培养上清,采用流式细胞术检测细胞膜表面CD147,ELISA检测培养上清中VEGF的表达和RT-PCR检测mRNA表达水平.结果:CD147及VEGF表达出现最高峰时的ox-LDL浓度分别为25mg/L和50mg/L;与100mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用6,48h后,CD147,VEGF表达分别出现最高峰;VEGFmRNA水平出现最高峰时,ox-LDL作用浓度及时间分别为200mg/L,48h.CD147mRNA水平出现最高峰时ox-LDL作用浓度及时间分别为25mg/L,6h,此后,mRNA水平不变.结论:VEGF及CD147在单核细胞来源的泡沫细胞表达均升高;CD147表达上调早于VEGF,低浓度ox-LDL促进CD147表达,高浓度促进VEGF的表达;U937泡沫细胞中VEGF的mRNA水平与ox-LDL的作用浓度及时间成正相关,泡沫细胞中CD147的mRNA与ox-LDL的作用浓度及时间无关.

治疗方案与慢性肾功能衰竭患者认知功能的关系

目的:探讨不同治疗方法对慢性肾功能衰竭患者的认知功能的影响。方法:将慢性肾功能衰竭患者40例随机分为4组,每组10例。分别予以血液透析+促红素、促红素、血液透析及内科保守等治疗3个月。每组患者治疗前后均接受字母划消测试验、连续相加测验。结果:血液透析+促红素治疗组、促红素治疗组和血液透析治疗组的字母划消测试验、连续相加测验成绩治疗前后差异均有显著性意义(P均<0.01);内科保守治疗组治疗前后差异无显著性意义(P>0.05)。结论:血液透析+促红素治疗能较好的改善慢性肾功能衰竭患者的认知功能;促红素或血液透析治疗,也可在一定程度上改善患者的认知功能;内科保守治疗对患者的认知功能的改善效果不明显。

单链抗体融合重构型人caspase-3蛋白的靶向抑瘤作用研究

目的 :探讨分泌表达的抗ErbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白对ErbB2抗原阳性肿瘤细胞的靶向杀伤作用。方法 :将重构型人caspase 3基因亚克隆入 pCMV e2 3scFv PEⅡ PEⅢ相应位点 ,构建表达分泌型的抗ErbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白基因的真核表达载体 pCMV e2 3scFv PEⅡ revcasp 3,转染人T淋巴瘤细胞系Jurkat,筛选并建系 ,ELISA检测培养上清中融合蛋白的分泌表达。用含有该融合蛋白的培养介质培养人宫颈癌细胞Hela、乳腺癌细胞SKBr3以及人卵巢癌细胞SKOV3等研究该蛋白对细胞生长的抑制作用 ;将转染建系的Jurkat细胞尾静脉注射SKBr3荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用 ,间接免疫荧光检测重构型人caspase 3蛋白在瘤体的靶向分布。 结果 :融合蛋白基因可通过Jurkat细胞分泌表达并杀伤ErbB2抗原阳性的SKBr3和SKOV3细胞而对ErbB2抗原阴性的Hela细胞生长无明显影响 ,尾静脉注射该细胞可靶向抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长。结论 :分泌表达的抗ErbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白靶向诱导ErbB2抗原阳性肿瘤细胞死亡。

针对uPA的siRNA对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用

目的:通过RNA干涉的方法抑制乳腺癌细胞中uPA的表达,观察uPA的表达抑制后对肿瘤细胞的体外侵袭能力的影响。方法:(1)构建可以表达针对uPA的siRNA的干涉载体,转染高侵袭性人乳腺癌细胞系MDA-MB 231,G418抗性筛选,挑选单克隆株;(2)分别通过RT-PCR和Western Blot的方法检测uPA的表达;(3)平板克隆形成试验检测转染前后肿瘤细胞的克隆形成能力;4Bovden chamber Assay检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果:(1)可以稳定表达针对uPA的siRNA的单克隆株,uPA的表达水平显著下降;(2)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株的克隆形成能力降低;(3)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株体外侵袭能力与原代细胞MDA-MB 231相比明显受到抑制。结论:uPA在人乳腺癌侵袭行为中发挥重要的作用,针对uPA的siRNA可以显著降低uPA的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭,可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段。