脂肪分化相关蛋白对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的:构建编码脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因全长序列的真核表达载体,探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9 c2心肌细胞凋亡有何影响。方法:(1)采用PCR的方法,以成年SD大鼠心肌cDNA为模板扩增编码ADRP全长的DNA序列,重组入pEGFP-C1质粒表达载体中,酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,扩增后提取质粒,进行酶切和测序鉴定;(2)采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒转染H9 c2心肌细胞株,经G418筛选获得抗性细胞克隆后扩大培养;荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白报告基因表达情况;RT-qPCR和Western blot检测转染细胞与正常细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平;(3)采用流式细胞术检测不同浓度软脂酸对上述细胞细胞凋亡率的影响。结果:(1)酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入表达质粒pEGFP-C1;(2)荧光显微镜观察细胞内有绿色荧光蛋白表达且传20代以上无消失;RT-qPCR和Western blot证明重组质粒转染H9 c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P<0.01);(3)经不同软脂酸刺激后,重组质粒转染H9 c2细胞凋亡率明显低于空质粒转染组和正常H9 c2细胞组(P<0.05)。结论:(1)成功构建了H9 c2细胞真核质粒表达载体pEGFP-C1-ADRP,获得了稳定表达ADRP基因的H9 c2心肌细胞株;(2)ADRP能够抑制软脂酸诱导的H9 c2心肌细胞凋亡,表明ADRP对高脂环境中心肌细胞可能具有一定的保护作用。

脂肪分化相关蛋白真核表达载体的构建及其对H9c2心肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:构建编码脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein,ADRP)基因全长序列的真核表达载体,探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响。方法:(1)RT-PCR扩增编码ADRP全长的DNA序列,重组入pEGFP-C1质粒表达载体中,酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,扩增后提取质粒并进行鉴定;采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒稳定转染H9c2心肌细胞;荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达情况;RT-qPCR和Western blotting检测ADRP表达情况;(2)采用MTT比色法和流式细胞术检测不同浓度软脂酸对细胞增殖和凋亡的影响。结果:(1)成功构建了真核质粒表达载体pEGFP-C1-ADRP,转染H9c2细胞后,荧光显微镜下观察发现细胞内有绿色荧光蛋白表达;RT-qPCR和Western blotting显示重组质粒转染H9c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P<0.01);(2)经不同软脂酸刺激后,重组质粒转染H9c2细胞增殖抑制率和凋亡率均明显低于空质粒转染组和正常对照组(P<0.05)。结论:(1)成功获得了稳定表达ADRP的H9c2心肌细胞株;(2)软脂酸可抑制H9c2心肌细胞增殖并可诱导其凋亡,而ADRP高表达可对抗软脂酸的这一作用,表明ADRP对高脂环境中心肌细胞可能具有一定的保护作用。

脂肪分化相关蛋白的生理功能及其与疾病的关系

PAT家族蛋白是最主要的脂滴相关蛋白，与细胞内脂代谢密切相关。目前发现该家族包括5种蛋白，脂肪分化相关蛋白（ADRP）是其中的一员。与其他PAT家族蛋白相比，无论是在组织分布、分子结构还是生理功能上ADRP均有其独特之处，如它在脂肪细胞分化、肝脏甘油三酯蓄积、乳汁生成与分泌方面发挥重要的作用，ADRP的表达异常还可能与多种疾病的发生和发展有关，如脂肪肝、糖尿病、动脉粥样硬化、肿瘤等，可能为相关疾病提供新的诊断思路和治疗靶点。现就ADRP的结构、功能及其与疾病关系的研究进展作一综述。

代谢综合征患者血浆氨基末端B型利钠肽前体水平的观察

回顾分析2005-2009年间在我院内分泌科和心内科收治的代谢综合征（MS）患者和非MS患者的临床资料，采用多元线性回归分析Log（NT—proBNP）值与血压、血脂等指标的关系，并采用协方差分析各组间Log（NT—proBNP）值的差异。年龄、体重指数、收缩压、舒张压、胰岛素抵抗指数、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、肌酐、左房内径、左室舒张末期后壁厚度、左室射血分数为Log（NT-proBNP）值的独立预测因素；MS组患者Log（NT—proBNP）值明显低于非MS组患者（P〈0．05）；高甘油三酯和体重指数、正常收缩压、舒张压和空腹血糖的MS患者Log（NT—proBNP）值均明显低于非MS患者（P〈0．05）。表明MS患者NT—proBNP水平明品低于非MS患者，这可能与MS患者血脂代谢紊乱和肥胖有关。

碳酸酐酶Ⅲ在疾病和肌肉疲劳发生发展中的作用

碳酸酐酶(carbonic anhydrases,CAs)是一种广泛存在的含锌的金属蛋白酶,能可逆性地高效催化CO2的水合反应,参与调节胞内pH值、离子运输和生物合成反应等多种生理过程。在哺乳动物体内已发现13种CA同工酶和3种CA相关蛋白,其中CAⅢ与其他CA同工酶相比,在组织分布、分子结构和生物学功能上均有其独特之处。CAⅢ表达异常可能与多种临床疾病的发生和发展有关,还可能参与了肌肉疲劳的发生。