干扰核仁磷酸蛋白对人白血病OCI／AML3细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨抑制核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)1基因对人白血病细胞凋亡的影响及相关机制。方法:将空载慢病毒p GIPZ和NPM干扰慢病毒sh NPM分别感染携带NPM1突变的OCI/AML3白血病细胞株以及对照白血病细胞株HL60。采用q RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测白血病细胞的sh NPM组以及Mock和p GIPZ组细胞及NPM1 A型突变(NPM1-m A)基因和蛋白的表达,流式细胞仪和瑞氏染色法观察OCI/AML3的sh NPM组以及Mock和p GIPZ组细胞凋亡情况,q RT-PCR和Western blot检测OCI/AML3的sh NPM组以及Mock和p GIPZ组凋亡相关蛋白(Bax/Bcl-2)和p-ERK信号分子表达;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路抑制剂(PD98059)处理后OCI/AML3的sh NPM组以及Mock和p GIPZ组细胞凋亡率的改变。结果:干扰NPM1明显抑制OCI/AML3细胞株NPM1-m A的m RNA水平(F=20.078;P=0.000,PMock vs.sh NPM=0.001,Pp GIPZ vs.sh NPM=0.003,PMock vs.p GIPZ=0.333)和蛋白水平,伴有胞质NPM突变蛋白表达明显减弱;干扰NPM1能明显上调OCI/AML3细胞凋亡率(F=25.236,P=0.000,PMock vs.sh NPM=0.001,Pp GIPZ vs.sh NPM=0.001,PMock vs.p GIPZ=0.729),同时光镜下观察到干扰组细胞出现凋亡小体等凋亡形态学特征。此外,干扰NPM1可上调OCI/AML3细胞中促凋亡分子Bax的蛋白和m RNA表达(F=7.649,P=0.000;PMock vs.sh NPM=0.015,Pp GIPZ vs.sh NPM=0.015,PMock vs.p GIPZ=0.984)、下调抗凋亡分子Bcl-2的蛋白和m RNA表达(F=5.190,P=0.000;PMock vs.sh NPM=0.034,Pp GIPZ vs.sh NPM=0.029,PMock vs.p GIPZ=0.909);干扰NPM1能明显下调p-ERK的表达,PD98059抑制剂阻断MAPK通路可促进OCI/AML3细胞凋亡(F=25.643,P=0.007)。结论:NPM1突变基因在白血病细胞抗凋亡特性中发挥重要作用,潜在的分子机制可能与ERK信号分子及Bax/Bcl-2表达有关。

胞质NPM1突变蛋白与AKT的相互作用及其对急性髓系白血病细胞增殖的调控

目的探讨细胞质中核仁磷酸蛋白A型突变体(NPM1 mutant A,NPM1 m A)与AKT的相互作用,观察NPM1 m A联合AKT对白血病细胞增殖的影响。方法免疫共沉淀实验观察胞质蛋白NPM1 m A与AKT的相互作用。通过RNA干扰技术抑制NPM1突变阳性的OCI/AML3白血病细胞株中NPM1突变蛋白的表达。不同浓度AKT抑制剂(AKT INHIBITORⅣ,AKTⅣ)处理白血病细胞抑制磷酸化AKT蛋白表达。CCK-8法检测细胞体外增殖能力。结果胞质NPM1 m A能够与内源性的AKT蛋白相互结合。干扰NPM1后,OCI/AML3细胞中NPM1 m A和野生NPM1蛋白表达明显下降(P<0.05),白血病细胞的体外增殖能力亦明显降低(P<0.05)。AKTⅣ处理后,白血病细胞体外增殖较未处理细胞显著下降(P<0.05)。若NPM1沉默合并AKTⅣ处理,则OCI/AML3细胞干扰组体外增殖明显降低(P<0.05)。结论在NPM1突变的白血病细胞中,胞质NPM1 m A能够与AKT相互结合,并参与调控白血病细胞的增殖。

血清甲胎蛋白和α-L-岩藻糖苷酶检测在老年肝细胞癌中的辅助诊断价值

目的探讨血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)和-L-岩藻糖苷酶(-L-Fucosidase,AFU)检测在老年肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的辅助诊断价值。方法收集2017年11月—2019年10月在复旦大学附属华东医院就诊的90例原发性肝细胞癌患者(HCC组)、74例肝炎及肝硬化患者(肝慢性疾病组)、99例非肝肾疾病及非糖尿病患者(对照组),分别比较组间血清AFP和AFU水平差异。结果 HCC组血清AFP和AFU水平高于肝慢性疾病组和对照组(P<0.01),AFP和AFU的ROC曲线下面积分别为0.710和0.874,AFU单项检测灵敏度为92.2%,高于AFP单项检测灵敏度(58.9%)(P<0.01)。AFP和AFU联合检测灵敏度为95.6%,高于AFP和AFU单项检测(P<0.01)。结论 AFP和AFU联合检测可提高肝细胞癌的检测灵敏度,对提高老年HCC的诊断具有一定价值。

MicroRNA-10b通过调控锌指蛋白KLF4阻滞白血病细胞分化

探讨microRNA-10b(miR-10b)通过调节锌指蛋白Krüppel-like factor 4(KLF4)的表达对急性白血病细胞分化的影响。Real-time PCR及Western blot分别检测不同分化程度的白血病细胞系中miR-10b与KLF4的表达;1,25-二羟基维生素D3(1,25D3)诱导人白血病细胞系HL60向单核系分化,检测此过程中miR-10b及KLF4的表达变化;利用体外合成的寡核苷酸(miR-10b mimics)转染HL60细胞,瑞氏–吉姆萨染色观察1,25D3诱导后细胞分化形态学的改变;流式细胞术检测单核细胞表面标志CD14的表达。结果显示,miR-10b在分化早期的KG-1a细胞中表达最高,在分化晚期的U937、THP-1细胞中表达最低(P<0.01),而KLF4的表达与之相反;1,25D3诱导HL60向单核系分化过程中,miR-10b表达呈时间依赖性降低,KLF4表达则逐渐增高;HL60细胞中过表达miR-10b后可抑制1,25D3诱导的细胞分化形态特征的改变及CD14的表达(P<0.05)。提示miR-10b通过负调控KLF4的表达阻滞白血病细胞HL60单核系的分化。

敲低TRAF6对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

该文探讨了干扰肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)表达对人白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。将靶向TRAF6基因的sh RNA慢病毒载体感染K562细胞,利用荧光显微镜观察感染效率;Western blot方法检测TRAF6蛋白表达的改变;CCK-8法检测体外细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达和AKT磷酸化水平的变化。结果显示,TRAF6-sh RNA慢病毒载体成功感染K562细胞,TRAF6蛋白表达水平明显下降。与空白对照组和TRAF6-NC组相比较,TRAF6-sh RNA组细胞增殖能力明显受抑(P<0.05),而细胞凋亡率增加(P<0.05);同时,促凋亡蛋白Bax表达升高、抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。此外,干扰TRAF6可下调K562细胞p-AKT(T308)和p-AKT(S473)活性,而总AKT水平未见明显变化。该研究表明,干扰TRAF6表达可抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调AKT活性有关,提示TRAF6可作为白血病治疗的一个潜在靶点。

干扰PML对人髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及机制探讨

早幼粒白血病(promyelocytic leukemia,PML)基因与维甲酸受体α(retinoic acid receptorα,RARα)基因形成PML-RARα融合基因是急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)发生的分子基础,而PML在除APL外的其他髓系白血病亚型中的作用研究少见报道。为探讨PML在非APL的髓系白血病恶性表型中的调控作用及潜在机制,该文首先通过q PCR和Western blot检测了5株非APL来源的髓系白血病细胞中PML的表达水平。接着将靶向PML基因的sh RNA慢病毒(sh PML group)感染高表达PML的THP-1细胞;同时,设立未处理对照组(Mock group)和阴性对照组(Scramble group),嘌呤霉素筛选稳定表达sh PML的细胞株。q PCR和Western blot检测sh RNA干扰效率;CCK-8检测细胞体外增殖活性,克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白质Bcl-2、Bax水平和AKT及下游靶分子Foxo3a磷酸化蛋白质水平的改变。结果显示,5株髓系白血病细胞中PML m RNA和蛋白质水平不同,其中以THP-1细胞中的PML表达水平较高。靶向PML基因的sh RNA慢病毒感染THP-1细胞后,PML m RNA和蛋白质水平均明显下降,提示成功构建稳定表达sh PML的THP-1细胞株。与Mock组和Scramble组相比,sh PML组的细胞增殖能力显著增强(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05);同时,抗凋亡蛋白Bcl-2水平升高、促凋亡蛋白Bax水平降低;此外,干扰PML表达可增加p AKT(S473)及下游靶分子p Foxo3a(S253)的蛋白质水平,而总AKT和Foxo3a的蛋白质水平未见明显变化。该研究的结果提示,PML基因可能通过调控AKT/Foxo3a信号通路活性抑制白血病的恶性表型,表明PML在不同白血病型别中发挥着不同的作用。

探讨髓系白血病细胞株糖酵解表型特征

探讨髓系白血病细胞株的糖酵解表型特征及其潜在的调控机制。葡萄糖试剂盒和乳酸试剂盒分别检测5株白血病细胞培养上清液中的葡萄糖消耗(G)和乳酸生成含量(L),计算L/G比值来评估糖酵解水平;定量PCR检测糖酵解相关基因GLUT、MCT1 mRNA表达;CCK8法检测细胞体外增殖能力;Western blot检测AKT蛋白磷酸化水平。结果显示,KG1a和K562细胞体外培养24 h后的L/G比值分别为1.78和1.71,接近糖酵解表型时L/G为2的比值,同时这两株细胞高表达糖酵解相关基因GLUT1和MCT1 mRNA。低糖(0.5 mmol/L)、中糖(5 mmol/L)、高糖(10 mmol/L)处理KG1a和K562细胞40 h后,两株细胞的增殖能力、葡萄糖消耗和乳酸生成随葡萄糖浓度增加而增强,高糖组增加更为显著(P<0.05)。相反,若糖酵解抑制剂2-DG(0,5,10 mmol/L)处理白血病细胞40 h后,两株细胞的增殖能力及糖酵解代谢水平随2-DG浓度增加而降低,高浓度2-DG组(10 mmol/L)降低更为显著(P<0.05)。此外,AKT抑制剂低浓度(5μmol/L)短时间(12 h)处理后能抑制白血病细胞AKT蛋白磷酸化水平,同时降低细胞的葡萄糖消耗和乳酸生成(P<0.05)。该研究提示髓系白血病细胞具有高糖酵解表型,AKT可能参与调控白血病的糖代谢过程,这有助于阐明白血病的能量代谢特征以及为白血病的靶向抗代谢治疗奠定基础。

Neddylation修饰通路抑制剂MLN4924诱导细胞死亡的研究进展

蛋白质类泛素化修饰Neddylation是重要的新型蛋白质翻译后修饰方式,可广泛调控细胞周期、细胞生长和发育代谢等生物学过程。近年来研究发现,Neddylation修饰小分子抑制剂MLN4924具有显著的抗肿瘤效果,可通过诱导细胞周期阻滞、衰老和凋亡,以及抑制血管生成等方式抑制肿瘤生长。文章针对Neddylation修饰通路抑制剂MLN4924诱导细胞程序性死亡的相关机制研究进行综述。

靶向Neddylation修饰通路及通路抑制剂MLN4924的抗肺癌作用及其机制研究

Neddylation修饰通路在肺癌中过度活化,可通过激活其底物CRL泛素连接酶活性诱导CRL抑癌蛋白底物降解,从而促进肺癌的发生发展。Neddylation修饰通路的小分子抑制剂MLN4924可以诱导肺癌细胞发生细胞周期阻滞、细胞凋亡和衰老,发挥抗肺癌作用。此外,通过靶向Neddylation修饰通路关键酶及其底物Cullin家族蛋白也可以抑制肺癌发生发展。