淡紫紫孢菌ZJPL08可湿性粉剂研制及对柑橘木虱的毒力分析

淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)ZJPL08对柑橘木虱具有强致病性,以该菌为材料的生防菌制剂研发对柑橘木虱的防治具有重要意义。本研究以淡紫紫孢菌ZJPL08为有效成分,进行载体、润湿剂、紫外保护剂等的筛选,确定了淡紫紫孢菌ZJPL08可湿性粉剂的最佳配方:淡紫紫孢菌ZJPL08分生孢子粉10.00%(有效成分)、十二烷基硫酸钠3.00%(润湿剂)、木质素磺酸钠5.00%(分散剂)、腐殖酸0.25%(紫外保护剂)、氯化钙0.10%(孢子萌发促进剂)、黄原胶0.05%(黏着剂)和硅藻土81.60%(载体)。在此条件下制得的淡紫紫孢菌ZJPL08可湿性粉剂孢子含量为3.25×10^(10)个/g,悬浮率为85.67%,润湿时间为86.22 s,细度为95.39%粉剂过300目筛,pH值为6.65,产品各项指标符合国家农药制剂产品要求。半田间防效试验结果表明,该制剂1500倍液处理能有效防治柑橘木虱,防效达97.78%,与对照药剂30%噻虫嗪可湿性粉剂1000倍液(100%防效)相比无显著差异,但显著高于1.80%阿维菌素乳油1500倍液(78.33%防效)。综上所述,本研究研制的淡紫紫孢菌ZJPL08可湿性粉剂对柑橘木虱具有较好的防效,在替代化学农药防治柑橘木虱上具有良好的应用前景。

代森锰锌对异色瓢虫雌虫生殖毒性初探

在农林业生产中,化学农药的使用成为了生物防治实施的制约因素之一。为了促进化学防治和生物防治的协调应用,评估农药对天敌昆虫的影响是天敌昆虫推广应用中的重要环节。异色瓢虫Harmonia axyridis是我国农业生产中常用的捕食性天敌之一,为了确保异色瓢虫在应用中的安全性,保障其持续发挥控害作用,本文采用毒蚜饲喂法,以卵巢发育情况为指标,评价了常用杀菌剂代森锰锌对异色瓢虫雌成虫的生殖毒性。试验结果表明,不同发育阶段的异色瓢虫在摄入代森锰锌后均会出现雌成虫卵巢发育受抑制的现象。主要表现为卵巢管长度下降、卵巢发育指数降低、Vg1和Vg2相对表达量降低。并且摄入代森锰锌的时间越长,对卵巢发育的抑制作用也越明显。此外,通过解剖观察未发现代森锰锌对异色瓢虫卵巢具有致畸作用。因此,推测代森锰锌对异色瓢虫具有较弱的生殖抑制作用。本文研究结果将增强代森锰锌与捕食性天敌昆虫应用的兼容性,提高代森锰锌与天敌昆虫的使用效率。

15种杀菌剂对异色瓢虫的影响

异色瓢虫Harmonia axyridis(Pallas)是一种重要的天敌昆虫,在田间应用时常会受到施用药剂的影响。为了解浙江地区常用杀菌剂对异色瓢虫的影响,本文选用该地区田间15种常用杀菌剂,采用喷雾法,在实验室条件下测定了其对异色瓢虫2龄和4龄幼虫、蛹以及成虫的影响。结果显示:不同杀菌剂对异色瓢虫不同虫态有不同程度的影响,但大多数杀菌剂对异色瓢虫相对安全。60%唑醚·代森联WG、50%异菌脲SC、99%矿物油EC、43%氟菌·肟菌酯SC、42.4%唑醚·氟酰胺SC对异色瓢虫2龄幼虫影响较大,其中42.4%唑醚·氟酰胺SC对异色瓢虫2龄幼虫影响最大,平均校正死亡率最高达到93.22%。30%氧氯化铜SC、1亿cfu/g枯草芽孢杆菌CG、0.5%几丁聚糖AS、42.4%唑醚·氟酰胺SC、40%噻唑锌SC对异色瓢虫蛹有一定程度的影响,其中40%噻唑锌SC对异色瓢虫蛹的影响最大,平均校正死亡率达到31.04%。试验的15种杀菌剂对异色瓢虫4龄幼虫和成虫相对安全,平均校正死亡率皆小于21%。从安全性考虑,当异色瓢虫处于2龄幼虫阶段时,不建议使用60%唑醚·代森联WG、50%异菌脲SC、99%矿物油EC、43%氟菌·肟菌酯SC、42.4%唑醚·氟酰胺SC。当异色瓢虫处于4龄幼虫、蛹和成虫时,15种供试杀菌剂都比较安全,使用时可选用对其影响较小的杀菌剂。

柑橘黄脉病毒在台州市发生分布情况及其分子特性研究

柑橘属(Citrus L.)是一类芸香科(Aurantioideae)植物,包括有橙子、柑橘、酸橙、柚子、葡萄柚等品种[1],主要种植在中国、美国、巴西等热带或亚热带国家地区[2],目前是全世界也是我国第一大类水果[3]。在我国柑橘种植主要分布在北纬20°~33°之间,海拔1000m以下,包含有云南、四川、两广、江西、福建、浙江、湖北、湖南等地[4]近年来随着柑橘栽培模式和大众消费观的改变,越来越多新的柑橘品种从国外被引进并大规模推广种植,加之柑橘常用嫁接、扦插等无性方法进行繁育,这些因素导致更多新的病虫害发生积累和传播[5],这给柑橘产业的发展带来一定风险和威胁。

浙江省金华市柑橘黄龙病检测及柑橘木虱分布情况调查

为了解浙江省金华市柑橘主要种植区内柑橘黄龙病及媒介昆虫柑橘木虱的发生情况,本研究在金华市5个县市区16个乡镇街道进行柑橘黄龙病和柑橘木虱发生情况调查与采样,调查研究结果如下,采集的210份样品中检测出13份样品携带黄龙病菌,黄龙病菌检出率达6.2%,其中永康市唐先镇样品检出率最高,达20.0%,此外武义县白洋街道,婺城区洋埠镇、罗埠镇,永康市花街镇样品检出率均超过10.0%;通过对黄龙病菌16S rDNA进行特异性扩增,发现克隆后的测序结果与已报道的亚洲柑橘黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)相似性均在99.5%以上。金华市下辖的兰溪市、婺城区、金东区、武义县及永康市均有柑橘木虱的发生,其中永康市柑橘木虱发生率最高,达到83.3%,兰溪市柑橘木虱发生密度最高,成虫虫口密度为21.0头·株^(-1),有虫株率为41.9%。综合黄龙病检测结果与柑橘木虱发生情况表明,金华市下辖的兰溪市、婺城区、武义县和永康市属于黄龙病和柑橘木虱发生重叠区。

柑橘黄脉病毒一步法RT-PCR快速检测技术探究

本研究通过对柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)的三基因盒基因、病毒外壳蛋白基因及23 K基因序列分析并设计出7对引物,对引物特异性和灵敏度进行比较,筛选出能够应用于实验室一步法RT-PCR快速检测CYVCV的引物,由此建立起针对CYVCV一步法RT-PCR快速检测体系。结果表明:引物对TGB1-F/R能从柑橘总RNA稀释160000倍(0.004 ng·μL^(-1))的稀释液中检测出CYVCV,利用该体系对607份田间随机样品进行检测,CYVCV的感染率为10.05%,说明该体系可靠稳定,适用于实验室里的大量检测;一步法RT-PCR获得CYVCV的TGB1、TGB2、TGB3、CP和23 K的特异性片段,片段序列长度分别为678、327、183、978和669 bp,通过克隆和测序结果比对显示,各片段与已报道的CYVCV病毒序列具有较高的同源性,同源性均在99%以上。

常规和巢式PCR对柑橘黄龙病菌的检测灵敏度比较

根据柑橘黄龙病(citrus Huanglongbing,HLB)病菌16SrDNA、16S/23S核糖体基因间隔区(ribosomal intergenic region,RIR)、核糖体蛋白β操纵子(β-operon)和外膜蛋白(out membrane protein,OMP)基因序列设计了8对引物,通过常规和巢式PCR方法对各引物的检测灵敏度进行了比较。结果表明,不同引物的检测灵敏度不同。对于上述任何基因,巢式PCR的灵敏度均比常规PCR至少高103倍;对于同一种基因,扩增短片段的引物比扩增长片段的引物灵敏度高或相当;在扩增产物大小相同时,用以扩增核糖体蛋白β操纵子基因的引物较其他三种稍高。对不同症状柑橘样品的检测进一步验证了该结果。因此,对于柑橘黄龙病的检测,可优先考虑使用巢式PCR方法,若使用常规PCR,则宜选用具有高灵敏度的扩增小片段引物。

三种侵染柑橘木虱的蜡蚧菌属真菌的生物学特性

菌株ZJLA08、ZJLP09和ZJLSP07为从柑橘木虱虫体中分离纯化的蜡蚧菌属真菌,经鉴定分别为渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum、刀孢蜡蚧菌Lecanicillium psalliotae及1个新种Lecanicillium sp.,均对柑橘木虱具有强致病性。为明确这3个菌株的生物学特性,测定了温度、光照和紫外照射等条件对菌株生长、产孢和孢子萌发的影响。结果表明:25~30℃是菌株生长、产孢和孢子萌发的适宜温度;光照对菌株生长和孢子萌发影响不显著,但适当的光照有利于菌株产孢,如在连续光照条件下培养7 d后,菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的产孢量依次为6.72×108、6.13×108、10.38×108个·m L^(-1);紫外照射对3个菌株的生长、产孢和孢子萌发均产生显著的抑制作用,如紫外照射60 min对菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的产孢抑制率分别达38.32%、51.17%和32.41%,对孢子萌发的抑制率分别为81.43%、87.35%和78.14%;湿度高有利于菌株孢子的萌发,如在相对湿度为62%时,菌株ZJLSP07、ZJLA08和ZJLP09的孢子萌发率相比饱和湿度条件下分别下降了84.31%、86.21%和77.47%。在测试的3个菌株中,菌株ZJLP09的菌丝生长速率、产孢量、孢子萌发率等均显著高于其他2个菌株,且其对高温、低湿和紫外照射等具有更强的抗逆性。

田间柑橘植株不同部位黄龙病菌的PCR检测及发病原因分析

[目的]了解黄龙病菌在柑橘植株不同部位的分布,为深入研究病菌在植株体内的扩散情况奠定基础;明确病害的发生原因为有效防控该病害提供借鉴。[方法]调查浙江省台州市柑橘黄龙病(huanglongbing,HLB)的发生情况,通过常规和巢式PCR,检测了发病情形不同的两个果园内柑橘病株不同部位及不同植株中的黄龙病菌,并对其发病原因进行分析。[结果]发现一果园内病株的无症状叶片、有症状叶片和枝条中均含有黄龙病菌,而其周围植株不含病菌;另一果园内病株的有症状叶片、枝条、主干和砧木中均含有黄龙病菌,而其周围植株也含菌。[结论]分析认为这两种果园内柑橘植株发病原因不同,一种可能为通过携带黄龙病菌的柑橘木虱所感染,另一种可能为嫁接过程中通过带菌的接穗感染。

柑橘黄龙病菌核糖体蛋白基因的多态性及系统发育分析

通过PCR扩增6个不同地区柑橘黄龙病（citrus huanglongbing，HLB）病原茵的核糖体蛋白基因，采用4种不同的限制性内切酶对PCR产物进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析；并对核糖体蛋白基因克隆和测序后，使用DNAman和NCBI Blast等软件对基因序列进行比对分析，并通过软件Mega4．1构建其系统发育树．结果表明：6个分离物核糖体蛋白基因的RFLP指纹图谱有所差异，表现出一定的多态性；不同分离物核糖体蛋白基因的核酸序列和氨基酸序列均存在差异，但相互之间同源性很高，其中核酸序列与数据库中亚洲种（CandidatusLiberibacterasiaticus）的同源性高达99％～100％，与非洲种（Ca．L．africanus）的同源性为85％，与美洲种（Ca．L．americanus）的同源性为77％～80％；系统发育分析显示所有的Ca．L．asiaticus亲缘关系极近，归为一个类群，而后与Ca．L．africanus和Ca．L．americanus组成韧皮部杆菌属（CandidatusLiberibacter）一个大的类群．

两个水稻品种(系)酵母双杂交cDNA文库的构建和比较分析

"武育粳3号"和"KT95-418"为两个遗传背景基本一致而对水稻条纹叶枯病表现为明显抗性差异的粳稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)品种(系)。利用SMART技术合成双链cDNA后,通过SfiⅠ酶切位点将cDNA片段定向插入到改造的载体NpGADT7中,构建了两品种(系)水稻的酵母双杂交cDNA文库。检测结果表明:所构建的两个文库库容量均大于1.0×106cfu;初始文库滴度分别为1.0×1010cfu/mL和5.0×1010cfu/mL,扩增文库滴度均为1.0×1011cfu/mL;两文库重组率均大于95%;"武育粳3号"文库cDNA插入片段长度集中分布在700bp^800bp之间,"KT95-418"集中分布在750bp^1000bp之间;小规模测序结果表明两文库中全长基因的比例均超过60%。两品种(系)水稻酵母双杂交cDNA文库的构建为筛选分离抗病相关的变异基因及开展寄主与水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)互作的研究奠定了基础。

柑橘黄龙病菌亚洲种16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区的PCR-RFLP及序列分析

为明确柑橘黄龙病菌的遗传多样性,PCR扩增了6个不同地区黄龙病菌的16SrDNA和16S-23S rDNA间隔区(intergenic spacer regions,ISR),分别通过4种内切酶对其进行了限制性片段长度多态性分析,发现不同分离物的16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区各酶切产物的电泳谱带完全一致,未表现多态性。对16S-23SrDNA ISR进行了克隆和测序,经DNAman和NCBI Blast比对分析发现,6个分离物16S-23SrDNAISR序列之间不存在碱基差异,与数据库中柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)同源性高达99.0%～100%。系统发育分析显示所有的Ca.L.asiaticus归为一个类群,而后与Ca.L.africanus、Ca.L.americanus和Ca.L.psyllaurous组成韧皮部杆菌属(Candidatus Liberibacter)一个大的类群。结果表明,同一种柑橘黄龙病菌不同分离物16S rDNA和16S-23S rDNAISR无分子变异或变异较小,不存在遗传多样性。

黄岩橘区柑橘木虱发生情况及其带菌率

柑橘黄龙病（CitrusHuanglongbing）广泛分布在亚洲、非洲、美洲等40多个国家和地区[1]。自1980年代在浙江温州南部的平阳、苍南等地发现该病害以来，其逐渐向北蔓延扩散，在2001～2004年的4年时间内，浙江省病害发生面积从1332．5hm2扩大到10650．9hm2，病株数从72．9万株上升到187．1万株[2]，而台州市黄岩区自2002年底发现该病害以来，至2004年柑橘病株数已上升至31．2万株[3]，给当地柑橘生产造成了严重的危害。尽管近年来人们通过综合防治等措施使该病害得到了一定的控制，但因缺乏理想的防治药剂，其仍是当前柑橘生产中威胁最大的一种病害。

利用酵母双杂交系统研究水稻条纹病毒三个功能蛋白的互作

通过RT—PCR扩增获得水稻条纹病毒（Rice stripe virus，RSV）的CP、SP和NSvc4基因，分别将其与酵母双杂交载体pGADT7和pGBK77相连，构建了重组子pGAD-CP、pGBK—CP、pGAD—SP、pGBK-SP、pGAD．NSnv4、pGBK-NSnv4。利用酵母双杂交系统研究了CP、SP、NSvc4三个蛋白的自激活、蛋白自身以及三个蛋白两两之间的互作情况。结果发现：RSV的CP、SP和NSvc4三个蛋白都不具有自激活现象；CP蛋白自身能够发生互作，SP和NSvc4蛋白未观察到自身互作现象；而CP、SP和NSvc4三个蛋白两两之间也未检测到互作现象的存在。该研究结果初步明确了RSV的CP、SP和NSvc4三个蛋白之间的关系，为追一步研究适三种蛋白的功能及RSV的致病机制奠定了基础。

海洋放线菌A3202发酵液对柑橘绿霉病菌的抑制活性测定

目前对柑橘绿霉病的防治主要以化学药剂为主,如咪唑类杀菌剂咪鲜胺和抑霉唑、双胍盐类杀菌剂百可得等。化学农药的长期大量使用除带来环境污染、食品安全等问题外,还易诱发病原菌产生抗药性。研究表明柑橘绿霉病菌已对咪鲜胺等杀菌剂产生了普遍的抗药性。

海洋放线菌A3202在不同培养基中的培养特征比较

为明确海洋放线菌A3202发酵培养所需的最佳条件,促进对其活性代谢产物抑菌活性研究的深入开展,测定了菌株A3202在不同固体和液体培养基中的形态特征。结果表明:菌株A3202在不同琼脂含量高氏1号培养基上的培养特征存在明显差异,琼脂含量2.0%以下的培养基不利于菌株A3202的气生菌丝生长及孢子形成;该菌株在相同配方但不同黄豆粉来源的黄豆粉培养基上的形态特征也表现出明显差异,现磨生黄豆粉制备的培养基更利于菌株菌丝生长和产孢。

刀孢蜡蚧菌ZJLP09液体发酵工艺的研究

为明确刀孢蜡蚧菌ZJLP09的最佳产孢条件,测定了培养基、初始接种量、装液量、初始pH、震荡转速和培养时间对菌株产孢的影响,建立了一套刀孢蜡蚧菌ZJLP09液体发酵工艺,具体为初始接种量5%、摇瓶装液量40%~60%,初始pH值5.0~7.0、震荡转速180~220 r·min^(-1)、培养温度28℃、培养时间5 d。为进一步开发孢蜡蚧菌ZJLP09分生孢子制剂提供了依据。

浙东地区‘红美人’杂柑果实品质与土壤和叶片养分的关系

【目的】揭示浙江东部地区‘红美人’杂柑果实品质与土壤肥力、叶片养分的关系,明确‘红美人’杂柑产量、品质的关键影响因子。【方法】在浙江东部‘红美人’杂柑种植区域采集柑橘果实、柑橘叶片和园地土壤样本各33份,统计了柑橘产量,测定了果实品质性状、果实矿质元素含量、叶片营养元素含量和园地土壤理化性状,深入分析了果实品质与土壤理化状况、叶片矿质元素含量的关系。【结果】浙江东部‘红美人’种植区域土壤中水溶性氮、有效磷和速效钾三个大量元素含量基本上在适量和高量范围,而叶片中钾含量偏低。果实的可溶性固形物含量与土壤pH值和交换性钙含量呈显著负相关,说明适度降低土壤pH值有利于增加果实可溶性固形物含量,而土壤交换性钙含量过高会显著不利于增加果实可溶性固形物含量;果实总酸含量与叶片锰含量呈显著正相关,叶片锰含量与土壤有效态铁、锰含量呈显著正相关而与土壤交换性钙含量呈显著负相关,说明土壤和叶片中锰过量会增加果实酸度,而土壤中有效钙过量有降低果实酸度的作用。【结论】‘红美人’橘园应当考虑肥料的平衡使用,防止元素间的拮抗。部分地区因土壤酸碱度不合理而造成钙、镁、硼等中微量元素的缺乏是限制‘红美人’果实产量和品质的重要原因,需要及时叶面补充‘。红美人’果实品质中的单果质量和可溶性固形物含量与土壤的pH值和交换性钙含量密切相关,需要根据橘园土壤条件调节适宜的pH值和适当补充一些中、微量元素。

7种杀菌剂对柑橘炭疽病菌的室内毒力测定

为筛选出可有效防治柑橘炭疽病的药剂,在实验室条件下,采用菌丝生长速率法测定了7种杀菌剂对柑橘炭疽病菌的室内毒力,并比较分析了炭疽病菌对不同杀菌剂的敏感性。结果表明:25%咪鲜胺乳油的毒力最强,EC50为0.0741mg/L;25%吡唑醚菌酯乳油、30%爱苗(15%丙环唑+15%苯醚甲环唑)乳油、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、25%嘧菌酯悬浮剂、60%百泰(5%吡唑醚菌酯+55%代森联)干悬浮剂、50%多菌灵可湿性粉剂的毒力依次减弱。就敏感性而言,柑橘炭疽病菌对25%咪鲜胺和30%爱苗的敏感性明显高于其他几种药剂。因此,在供试药剂中,25%咪鲜胺和30%爱苗具有最好的抑菌效果,可用作防治柑橘炭疽病的有效药剂。

柑橘木虱的防治技术研究进展

防治柑橘木虱是柑橘黄龙病综合防控的关键措施。主要阐述了柑橘木虱的防治技术手段,包括田间管理、化学防治、生物防治等,并且探讨了柑橘木虱防治的发展趋势,旨在为防治柑橘木虱及防控柑橘黄龙病提供理论参考和技术支撑。