Matrilin家族的研究进展

Matrilin家族即母系蛋白家族,是一个非胶原性细胞外基质蛋白家族,主要在骨和软骨组织中表达,参与形成细胞外基质,是多种骨发育异常疾病、骨关节炎的致病因子,多种细胞信号途经通过调节Matrilins的表达调控细胞外基质的性能。Matrilins可作为具有高分化增殖潜能细胞的标记。在牙体组织中,Matrilin-4特异性表达于成牙本质细胞,可能与牙本质形成、矿化及牙本质发育不全等疾病有关。

口腔变形链球菌感受态刺激因子的蛋白合成及活性检测

目的探讨口腔变形链球菌(S.mutans)密度感应系统信号蛋白的体外合成及其生物活性。方法采用化学合成法口腔S.mutans密度感应感受态刺激因子(CSP)信号蛋白,通过高效液相色谱仪纯化合成蛋白,质谱分析结构,通过扫描电镜对比观察CSP信号蛋白对S.mutans生物膜形成的影响,分析CSP信号蛋白的生物活性。结果化学合成纯化S.mutans CSP蛋白分子,加入CSP信号肽后,S.mutans生物膜呈团状密集分布,细菌之间存在厚实的黏性胞外分泌物,细菌黏连呈链团状。结论成功合成口腔S.mutans CSP信号蛋白,该蛋白肽具备促进S.mutans生物膜形成的生物活性。

变形链球菌ComCDE密度感应参与不同菌种的竞争

目的研究口腔变形链球菌(S.mutans)ComCDE密度感应系统参与血链球菌(S.sanguinis)的相互竞争作用。方法采用LIVE\DEADBacLightTM荧光染色结合激光共聚焦显微镜,观察变形链球菌(简称变链菌)在CSP信号肽诱导下群体细菌自身死亡变化;通过荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细菌素以及细菌素免疫蛋白相关基因表达变化,分析变链菌ComCDE系统参与菌群生存竞争的调控机制。结果在细菌竞争中,变形链球菌ΔcomC、ΔcomD、ΔcomE突变株失去不同菌种间的竞争力,无法抑制相邻S.sanguinis的正常生长;只有野生株保持竞争力,抑制相邻S.sanguinis生长,形成缺陷菌环。CSP信号肽诱导下,变链菌群体死菌/活菌率增高58.1%(P<0.05);细菌素及免疫蛋白相关SMU.151、SMU.423、SMU.1913c基因分别升高23.3倍(P=0.00)、15.9倍(P<0.05)、19.3倍(P<0.05)。结论变形链球菌ComCDE密度感应系统调控变链菌的变链素及免疫蛋白产生、参与不同菌种间竞争生存。

细菌素免疫蛋白调控变形链球菌抗菌敏感性及生物膜形成的实验研究

目的观察细菌素免疫蛋白相关基因对变形链球菌抗菌敏感性及生物膜形成的影响，探讨细菌素免疫蛋白与细菌抗菌剂耐受性的关系，为生物膜抗菌敏感性的研究提供基础数据。方法筛选培养细菌素免疫蛋白基因突变株，绘制生长曲线。酶标仪检测不同质量浓度氨苄青霉素（0．04、0．05、0．06、0．07及0．08mg／L）、氟化钠（50、100、150、200及250mg／L）及不同质量分数的次氯酸钠（0．078％、0．156％、0．313％、0．625％及1．250％）作用下变形链球菌标准株、△immA-和△immB-突变株菌液的吸光度值。应用最小生物膜清除浓度（minimal biofilm eradicatin concentration，MBEC）桩钉96孔板以连续稀释法检测醋酸氯己定对3种菌株生物膜的MBEC。应用激光共聚焦扫描显微镜（confocal laser scanning microscope，CLSM）定量分析标准株和突变株生物膜结构。结果△immA-和△immB-突变株的迟缓期和稳定生长期均比标准株延时1h。氨苄青霉素为0．06ms／L时，标准株、△immA-突变株和△immB-突变株菌液吸光度值分别为0．334±0．016、0．027±0．016及0．047±0．018；氟化钠质量浓度为150mg／L时，3种菌株菌液吸光度值分别为0．254±0．018、0．129±0．011及0．167±0．01；当次氯酸钠质量分数为0．313％时，3种菌株菌液吸光度值分别为0．467±0．008、0．017±0．006及0．050±0．006，以上各组抗菌剂中，标准株与突变株吸光度值差异均有统计学意义（P〈0．01）。醋酸氯己定对3种菌株的MBEC分别为6．25、1．57及3．13mg／L。标准株生物膜厚度显著高于△immA-和△immB-突变株（P〈0．01）；标准株各层活菌比例均高于△immA-突变株（P〈0．05）；标准株中、外层活菌比例高于△immB-突变株（P〈0．01），但内层活菌比例差异无统计学意义（P=0．191）。结论细菌素免疫蛋白参与调控浮游细菌生长，尤其在生长初期；细菌素免疫蛋白相关基因缺陷使浮游态变形链球菌抗菌敏感性提高、抗菌剂MBEC降低及生物膜结构不成熟。