高校研究生实验室安全员机制的构建

研究生是高校研究型实验室、机构、研究所里最重要的成员,他们不仅是研究项目最主要的实施者和执行者,也是这些实验场所里最前线的工作人员。研究生中的传帮带教学和指导一直是一种优良传统。结合这些因素,教师应发挥研究生的优点,设计、建立合理有效的研究生实验室安全员机制和工作流程,完善实验室安全管理架构,在锻炼他们能力的同时,也让他们成为守护实验室安全的一分子,为完善和提高实验室安全管理的整体水平提供更有力的支撑。

肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白T细胞表位的预测、筛选及确定

目的确定肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白CD4 T细胞及CD8 T细胞的表位。方法通过生物信息学方法预测肺炎链球菌LytA蛋白分子小鼠的MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)和MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)序列并人工合成相应肽段;经诱导表达、纯化、透析、去内毒素、定量等步骤得到纯化的rLytA蛋白用以免疫小鼠;分离每只免疫组小鼠和对照组小鼠的脾及淋巴结细胞并分别与每条人工合成的候选表位肽段体外共培养,取培养上清进行双夹心ELISA检测每组细胞IFN-γ的产生情况;用初步筛选到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式技术检测,筛选出LytA蛋白分子T细胞表位。结果利用多种方法分析了LytA蛋白分子的MHC-Ⅰ结合肽及MHC-Ⅱ结合肽,经整理得到候选MHC-Ⅰ结合肽26条,候选MHC-Ⅱ结合肽7条,并进行了人工合成。利用分子生物学技术获得了rLytA蛋白并成功免疫了小鼠;双夹心ELISA结果初步提示:肽段LⅠ4、LⅠ5、LⅠ6、LⅠ7、LⅠ11、LⅠ12、LⅠ13、LⅠ14、LⅠ25以及肽段LⅡ3、LⅡ4、LⅡ5刺激免疫小鼠细胞产生的IFN-γ量比相应的对照小鼠显著升高;细胞流式技术进一步确定:经肽段LⅠ4、LⅠ6、LⅠ7、LⅠ11、LⅠ12、LⅠ13、LⅠ14及LⅠ25刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD8双阳性的细胞百分比较对照小鼠细胞的百分比显著升高;经肽段LⅡ4和LⅡ5刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD4双阳性的细胞百分比较对照小鼠细胞的百分比显著升高。结论确定了肺炎链球菌LytA蛋白分子2个CD4 T细胞及8个CD8 T细胞的表位。

重组日本血吸虫FKBP12基因的酶活性及其转录水平鉴定

目的对日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)FK506结合蛋白12(FKBP12)进行肽基脯氨酸顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)活性鉴定,并比较它与26 000 Mr的谷胱甘肽转移酶(Sj26GST)基因在成虫、尾蚴和虫卵的转录水平。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增SjFKBP12基因,将其克隆入pGEX-4T-1载体中,诱导表达重组融合蛋白,经纯化后进行PPIase活性测定。利用RT-PCR半定量分析SjFKBP12基因与Sj26GST基因的转录水平。结果将SjFKBP12基因成功克隆入pGEX-4T-1载体中后,表达、纯化的重组融合蛋白有PPIase活性。SjFKBP12在尾蚴与虫卵期的转录水平相仿,都高于Sj26GST基因,是成虫期转录水平的1.5倍左右。结论成功鉴定了重组SjFKBP12酶活性,SjFKBP12在尾蚴和虫卵期较高的转录水平,为将其进行疫苗等研究提供了依据。

日本血吸虫尾蚴cDNA文库的免疫学筛选及EST序列的分析

目的为获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)基因的部分或全长cDNA序列,同时验证用针对某一蛋白的抗体筛选表达文库是否可以得到相应蛋白对应的基因序列。方法采用兔抗鼠TGF-β1血清,对Sj尾蚴cDNA表达文库进行免疫学筛选,对阳性克隆进行PCR扩增后,将大于500bp的克隆进行复筛,对复筛阳性的克隆进行测序和生物信息学鉴定。结果对大约106个噬菌斑进行了初筛,共获得7个阳性克隆;经过PCR扩增后,其中有4个克隆大于500bp,复筛获得3个持续阳性克隆;对测序后的阳性克隆进行生物信息学鉴定,得到的三个克隆均与日本血吸虫辅酶Q10氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高的同源性(Blastn分值都大于200)。结论SjCHGC蛋白与兔抗鼠TGF-β1抗体的反应为交叉反应,用抗某一蛋白的抗体筛选表达文库得到相应蛋白的基因序列的方法不一定可行。

p38γMAPK蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨人结肠癌中p38γMAPK蛋白的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学法检测54例结肠癌组织、近癌旁组织、癌周正常组织和15例腺瘤息肉组织中p38γ蛋白的表达情况。结果p38γ蛋白的表达主要定位于胞质中,仅少量在胞核中表达。p38γ蛋白在结肠癌组织、癌旁组织、癌周正常组织中的高表达率分别为75.93%、51.85%、37.04%,在结肠腺瘤息肉组织中高表达率为33.33%。p38γ蛋白在结肠癌中的表达明显高于癌旁组织、癌周正常组织和腺瘤息肉组织,有统计学意义(P<0.01)。p38γ的表达与Duke分期,组织分化程度及有无淋巴结转移有显著差异(P<0.01),p38γ的表达与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置无明显相关(P>0.05)。结论结肠癌组织中p38γ蛋白处于过度表达状态,与结肠癌的发生、发展和转移密切相关。

兔抗鼠TGF-β1抗体对日本血吸虫尾蚴cDNA文库的免疫学筛选

目的为获得日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)基因的部分或全长cD-NA序列,同时验证用针对某一蛋白的抗体筛选表达文库是否可以得到相应蛋白对应的基因序列。方法采用兔抗鼠TGF-β1血清,对Sj尾蚴cDNA表达文库进行免疫学筛选,对阳性克隆进行PCR扩增后,将大于500bp的克隆进行复筛,对复筛阳性的克隆进行测序和生物信息学鉴定。结果对大约106个噬菌斑进行了初筛,共获得7个阳性克隆;经过PCR扩增后,其中有4个克隆大于500bp,复筛获得3个持续阳性克隆;对测序后的阳性克隆进行生物信息学鉴定,得到的3个克隆均与日本血吸虫辅酶Q10氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高的同源性(Blastn分值都大于200)。结论SjCHGC蛋白与兔抗鼠TGF-β1抗体的反应为交叉反应,用抗某一蛋白的抗体筛选表达文库得到相应蛋白的基因序列的方法不一定可行。

留学生医学微生物学教学中PBL和LBL联合运用的尝试

在本科临床专业留学生医学微生物学教学过程中,根据课程大纲的具体要求、各章节的内容以及学生的学习能力,联合运用PBL和LBL教学法,教学效果显著提高,获得学生广泛认可,为留学生教育改革的全面深入开展提供了思路。

恒河猴IL-4与变异IL-4促进外周血单核细胞向树突状细胞转化功能的比较

【目的】比较重组的恒河猴IL-4与变异IL-4在促进外周血单核细胞向树突状细胞转化方面功能的异同。【方法】利用葡聚糖-泛影葡胺梯度离心法分离恒河猴外周血单个核细胞,阴性筛选非CD3+细胞,随后贴壁分离外周血单核细胞并进行流式细胞技术确定筛选结果。将所分离的外周血单核细胞分为阴性对照组,IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组进行体外培养,收集细胞并表面染色CD14、CD1a、CD11c和CD83进行流式细胞分析。【结果】利用三步分离的方法得到了纯度达90%的未激活的外周血单核细胞。培养后的细胞进行流式分析,结果提示与阴性对照组相比,IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组细胞的CD14表达明显下降,而CD1a、CD11c和CD83表达明显上调,两实验组间无差别。【结论】与IL-4相同,vIL-4亦能促进外周血单核细胞转化为树突状细胞。

日本血吸虫TGF-β1成熟肽编码序列的克隆、表达及其转录水平

目的获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)成熟肽基因的DNA,进行原核克隆和表达,并比较它与Sj26kd的谷胱甘肽转移酶(Sj26GST)在成虫和虫卵期的转录水平。方法根据美国国立生物信息学中心(NCBI)上登录的小鼠TGF-β1基因的全长序列,设计两条位于保守区的寡核苷酸作为引物,利用RT-PCR从日本血吸虫成虫的mRNA中扩增SjTGF-β1基因的部分序列,并利用生物信息学进行分析和鉴定。克隆SjTGF-β1成熟肽基因的cDNA到原核表达载体pGEX-6p-3,将重组载体转化大肠杆菌BL21株并诱导表达。利用RT-PCR半定量分析SjTGF-β1基因与Sj26GST基因在成虫和虫卵期的转录水平。结果成功获得并构建了SjTGF-β1成熟肽基因的原核表达载体。融合表达后的重组融合蛋白经SDS-PAGE分析,显示其相对分子质量约为35000,与目的基因编码蛋白的预测分子量相符。SjTGF-β1在成虫与虫卵期的转录水平都低于Sj26GST基因,但虫卵期的转录水平比成虫高。结论SjTGF-β1成熟肽基因的获得为其编码序列全长的获得奠定了基础;重组融合蛋白的成功表达为进一步的功能研究提供保障;虫卵期该基因的转录水平高提示该基因在血吸虫虫卵与宿主的相互作用中可能具有一定的作用。

MG动画在医学科普中的应用

在健康中国战略背景下,医学科普对提高居民健康管理能力及健康水平具有重要作用。MG动画凭借“短、平、快”的特点以及制作成本低的优势,已迅速成为网络科普信息传播的重要助推力,能助力医学工作者进行医学科普知识的传播,完成各类适用于各大网络平台传播的医学科普动画。但医学工作者在制作医学科普动画时,应注重根据短视频传播特点进行内容创作,兼顾医学科普内容的专业性和通俗性,以公众需求为中心进行创作,依托专业背景增强科普公信力,建设新媒体科普专业人才队伍。

急性马兜铃酸肾病动物模型建立

目的 建立马兜铃酸Ⅰ引起的小鼠急性肾病模型.方法 将小鼠分为实验组与对照组,实验组分别一次性注射马兜铃酸Ⅰ 20、50、100 mg/kg小鼠体重,引起小鼠急性肾功能损伤.并于实验第3、7天取血、肾组织标本,检测相关肾功能指标以及组织形态学检查.结果 注射马兜铃酸Ⅰ后,小鼠肌酐、血尿素氮含量升高,肾脏切片染色显示注射马兜铃酸Ⅰ后肾脏组织形态学变化与注射剂量及时间相关.结论 应用大剂量马兜铃酸Ⅰ成功建立急性肾病小鼠模型.

日本血吸虫TβRII样基因胞外段的克隆、表达及初步鉴定

目的获得日本血吸虫TGF-β受体II(TβRII)样基因的cDNA完整序列,克隆、原核表达其胞外段蛋白序列,并进行初步免疫学分析。方法应用RACE方法获得SjTβRII样基因cDNA全长序列,构建其胞外段(即N端)原核表达载体,在大肠埃希菌中IPTG诱导表达,表达产物行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。纯化重组蛋白并免疫大鼠制备抗血清,应用Western Blotting方法初步鉴定重组蛋白。结果获得日本血吸虫SjTβRII样基因的cDNA全长序列,为2283bp,编码760个氨基酸,其中胞外段长531bp,编码177个氨基酸。构建的重组质粒在大肠埃希菌中成功表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性和抗原性。结论首次获得日本血吸虫TβRII样基因的cDNA全长序列,其胞外段可在原核表达系统中获得具有免疫原性和抗原性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

92例大学生耐卡那霉素肠球菌的分离鉴定及其相关因素

目的分离鉴定健康大学生粪便中的耐卡那霉素肠球菌,并调查相关因素。方法用卡那霉素ELB选择培养基分离培养92份健康大学生粪便中的肠球菌,调查他们的健康状况及生活习惯等。结果共鉴定出21例携带卡那霉素抗性肠球菌,71例阴性。耐卡那霉素肠球菌的分离率与饮食辛辣的相关性具有统计学意义("2=5.75,P<0.05);而与消化不良、胃肠不适和便秘的相关性无统计学意义("2<3.84,P>0.05)。结论耐卡那霉素肠球菌的分离率与饮食辛辣相关,与消化不良、胃肠不适和便秘等无相关性,其机制及其临床意义有待进一步的研究和随访。

肺炎链球菌表面粘附素A蛋白抗原表位的预测筛选及确定

【目的】确定肺炎链球菌表面粘附素A(Psa A)蛋白抗原的B细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞表位。【方法】通过生物信息学方法预测肺炎链球菌Psa A蛋白分子小鼠B细胞线性表位、MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)及MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)并人工合成相应肽段;克隆重组质粒BL21/p ET/Psa A并得到纯化的r Psa A蛋白用以免疫小鼠;分离每只免疫组和对照组小鼠的血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选B细胞表位;分离小鼠脾及淋巴结细胞并分别与人工合成的T细胞候选表位肽段体外共培养,取上清进行双夹心ELISA检测IFN-γ的量进行初步筛选。用初筛到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式检测,确定Psa A蛋白分子T细胞表位。【结果】分析Psa A蛋白分子的B细胞表位及MHC-Ⅰ结合肽、MHC-Ⅱ结合肽;得到候选B细胞表位肽10条,MHC-Ⅰ结合肽21条,MHC-Ⅱ结合肽7条,并进行了人工合成。利用分子生物学技术获得了r Psa A蛋白并成功免疫了小鼠。间接ELISA结果显示:肽段PB2、PB6,PB7与r Psa A免疫小鼠的血清发生反应,其OD450nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高;双夹心ELISA结果初步提示:肽段PⅠ10、PⅠ14、PⅠ17、PⅠ18、PⅠ21以及肽段PⅡ2、PⅡ5、PⅡ6刺激免疫小鼠细胞产生的IFN-γ量比相应的对照小鼠显著升高。细胞流式结果进一步确定:经肽段PⅡ2、PⅡ5刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD4双阳性细胞百分比较对照小鼠细胞显著升高;经肽段PⅠ14、PⅠ17、PⅠ21刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD8双阳性细胞的百分比较对照小鼠细胞显著升高。【结论】确定了肺炎链球菌Psa A蛋白分子的3个B细胞线性表位;2个CD4 T细胞表位;3个CD8 T细胞表位。

以培养大学生创新能力为目标的高校实验室的改革探索

培养大学生的创新能力是实践教学的重要目标,传统的病原生物与免疫学试验教学模式已经不能满足现代教学对人才培养的要求。为了更好地发挥试验教学在培养创新人才的作用,本文以病原生物和免疫学实验室为依托,通过构建本学科试验教学资源共享平台、虚拟仿真试验教学、建立大学生创新实验室等多种方式,探索了培养大学生的实践创新能力的途径,推动了试验教学改革和试验平台的建设。

基于医学形态学实验平台开展科普教育的方式探索

随着社会的发展,人们对健康越来越重视,然而通过网络获取的医学科普信息常常对错参半,给广大民众造成极大的误导。所以如何帮助大家获取正确的科普知识,是高等医学院校应该承担的社会责任[1~2]。高等医学院校开展科普教育活动,具有得天独厚的优势和资源[3]。广州医科大学以医学标本馆为支点,辅以病原生物学基础验证实验,在组织大家观摩学习上,辅以解说人体生理功能及疾病发生发展机理,使民众能够进行正确有效的自我防护,正确应对突发急病或者公共卫生事件。同时,充分挖掘医学标本库及病原教学实验资源,把一些深奥的、专业的医学知识赋予有趣亲民的面孔,贴近百姓生活,以百姓看得懂、学得会、用得着的方式普及民众,让民众乐意积极参与科普活动。

以能力为导向的病原生物学实验课改革

传统的病原生物学实验课程是理论课的从属,实验安排往往以生物学特点作为依据,各自验证一个知识点,彼此间缺少联系;而且教授方式以老师作为主体向学生灌输相关知识。随着社会发展,知识获取的途径变得广阔而简便,实验课的教学模式也应随之改变。本文将以学生为主导,培养其能力及探索和创新精神为导向的教学模式为目标,浅析病原生物学实验课的特点以及针对这样的特点进行实验课改革的思考和方法。

增强现实技术在病原生物学实验“金课”中的应用

为保证实验教学质量,实验教学技术与手段必须持续深化改革。因此,淘汰“水课”,打造“金课”,是提高实验教学的必然趋势。将现实场景和虚拟信息相结合呈现的增强现实技术可以把书本知识更灵活地呈现在学生面前,并且还可以通过互动功能为学生提供更好的虚拟实验条件。教师应尝试如何将增强现实技术运用到病原生物学实验课中,为打造“金课”提供更有力的支持。

人体寄生虫学实验教学改革的体会与展望

为了更好地完成人体寄生虫学的实验教学、提高学生自主学习的兴趣和解决实际问题的能力,本文通过总结近年来人体寄生虫学实验教学进行的教学改革模式的转变谈体会和优点。在发扬传统标本教学模式优点的同时,在有限的课时和新教学模式探索里结合新时代展望、转变教学主体。并阐述未来课程改革的展望,以便更好的促进实验教学的创新和多元化。

日本血吸虫感染的小鼠肠系膜淋巴结γδT细胞、NK细胞和NKT细胞表型的变化

日本血吸虫病是由血吸虫引起的一种慢性寄生虫病。本研究着力于探究日本血吸虫(Schistosome japonicum,S.j.)感染的C57BL/6小鼠肠系膜淋巴结不同固有免疫细胞的表型变化。C57BL/6小鼠感染日本血吸虫6周,分离肠系膜淋巴结,制备单细胞悬液,检测固有免疫细胞及其表面相关分子的表达情况。结果显示肠系膜淋巴结中γδT细胞、NK细胞和NKT细胞数量明显增多(P<0.05),但只有NK细胞的百分比含量明显增加(P<0.05);γδT细胞、NK细胞和NKT细胞表面CD69表达显著增高(P<0.01),而CD25的变化均不明显(P>0.05);γδT细胞和NK细胞表面CD4增高(P<0.05);NK细胞表面NKG2A/C/E(CD94)、NKG2D(CD314)表达及NKT细胞表面NKG2D(CD314)表达降低(P<0.05)。表明日本血吸虫感染C57BL/6小鼠肠系膜淋巴结不同固有免疫细胞的表型变化存在显著差异。