放射后氧化应激对大鼠颌下腺腺泡细胞凋亡的影响

目的:观察大鼠颌下腺放射后导致的氧化应激对细胞凋亡的影响。方法:24只大鼠随机分为对照组及放射24 h、72 h及1周组。对照组未照射,放射组右侧颌下腺进行一次性20 Gy照射,检测各组大鼠唾液分泌流率。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察颌下腺组织形态改变;酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测丙二醛(malondialdehyde, MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)水平。免疫组织化学染色(immunol histochemistry, IHC)观察8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine, 8-OHdG)阳性表达;末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)检测颌下腺腺泡细胞凋亡情况;Western blot和实时定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、Bcl-2关联X的蛋白质(BCL2-associated X protein, BAX)及B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的蛋白及mRNA表达情况。结果:放射后大鼠唾液分泌减少;细胞内空泡化、组织水肿及间隙增宽等病理变化逐渐加重;细胞出现明显的氧化应激反应,并伴随出现细胞的凋亡;凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2及Caspase-3蛋白及mRNA表达量异常。结论:放射后氧化应激反应可能是颌下腺细胞凋亡及功能障碍的重要影响因素。

放射后炎症反应对大鼠颌下腺紧密连接蛋白的影响

目的:观察颌下腺放射后炎症反应导致的紧密连接(TJ)蛋白改变及对旁细胞途径的影响。方法:24只大鼠随机分为对照组及放射1、6、12周组。对照组未照射,放射组右侧颌下腺接受20 Gy照射,特定时间点检测5 min唾液分泌量。苏木精-伊红(HE)染色观察颌下腺组织形态;免疫组织化学(IHC)染色观察肿瘤坏死因子(TNF)-α阳性表达;Western blot及免疫荧光(IF)染色观察claudin-1、claudin-3及水通道蛋白5(AQP5)水平及分布,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测mRNA表达;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测TNF-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-6水平。结果:放射后唾液分泌量降低;组织间质水肿增宽、脱颗粒改变、空泡化及炎症细胞浸润持续加重;炎症因子水平增加;claudin-1、claudin-3和AQP5蛋白水平及mRNA表达量异常,荧光染色强度减弱。结论:放射后炎症反应可能是颌下腺紧密连接蛋白异常,旁细胞途径破坏的重要影响因素。