链霉菌MY0504纤溶酶YG4基因的克隆及生物信息学分析

本研究获得了海洋链霉菌MY0504纤溶酶YG4基因,并对其进行生物信息学分析。利用依据同源序列设计的兼并引物,对提取的链霉菌MY0504的基因组DNA进行PCR扩增,将得到的DNA片段连接到pMD18-T载体后转化感受态Trans10细胞,然后对阳性克隆进行测序,并对序列进行生物信息学分析。最终克隆了1083bp的海洋链霉菌MY0504纤溶酶YG4基因。将获得的YG4基因输入Gen Bank网站,进行检索比对,结果显示与丝氨酸蛋白酶基因碱基序列同源性100%。对16s rDNA序列分析结果表明,该菌株与达格斯地链霉菌、氢化链霉菌、嫩白黄链霉菌、浅紫链霉菌的亲缘关系较近;通过对YG4基因编码蛋白的一级结构、二级结构、亚细胞定位和三级结构的预测和分析,结果表明:该基因编码360个氨基酸,其编码产物为稳定的亲水蛋白;二级结构以α螺旋和β折叠为主,无信号肽和跨膜结构域,有40个磷酸化位点;高级结构以无规则卷曲为主。本研究结果为研究海洋链霉菌MY0504纤溶酶YG4基因的表达机制及目的蛋白表达水平的提高提供了重要信息。

青海弧菌Q67用于硝基呋喃类药物的急性毒性测试及其冻干保护剂的研究

本文应用淡水发光细菌青海弧菌Q67( Vibrio qinghaiensis sp .Q-67)对硝基呋喃类药物进行了急性毒性测定,并对青海弧菌Q67的冻干保护剂进行了筛选。结果表明,青海弧菌在培养13h发光值可达到最大,通过测定菌密度发现此时青海弧菌已处于对数生长期。以青海弧菌Q67为毒性测试发光微生物,通过测定其对不同质量浓度硝基呋喃类药物的相对发光率,计算EC 50 值,结果显示硝基呋喃类药物对青海弧菌的急性毒性大小依次为:呋喃西林>呋喃唑酮>呋喃妥因>呋喃它酮,其EC 50 值分别为7.32μg/mL、13.34μg/mL 15.58μg/mL和16.86μg/mL;10%脱脂乳和10%蔗糖的复合保护剂对Q67菌液制成冻干粉的保护效果最好,并且冻干粉在复苏20min时,其发光值达到最高。该实验所得保护剂配方以及冻干程序对青海弧菌Q67制成冻干粉是可行的,为青海弧菌Q67冻干粉的制备提供了一定的技术支撑。

牛奶过敏原β-乳球蛋白抗体的制备及免疫检测方法的建立

本文将牛奶过敏原β-乳球蛋白抗原分别免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠制备其多克隆抗体和单克隆抗体,并对所获得的抗体进行了效价等特性测定;采用蛋白A亲和层析法将多克隆抗体进行了纯化,采用辛酸-硫酸铵法对单抗细胞株3A7进行了纯化;实验建立了双抗体夹心的ELISA检测方法,并对一些蛋白样品进行了初步的检测。实验结果表明,所制备的抗β-乳球蛋白兔多克隆抗体效价达到了1:6.56×106;Western-blotting鉴定结果显示所制备的多克隆抗体能够与β-乳球蛋白特异性反应;3株单抗的效价均在106以上,纯化后多抗仅与酪蛋白有一定的交叉反应,而纯化后单抗与乳中主要蛋白及其它过敏原蛋白基本没有交叉反应,特异性很好;利用所建立的方法对一些蛋白样品进行检测,准确率100%。