肿瘤相关成纤维细胞外泌体对乏氧条件下肺腺癌细胞自噬的影响及其机制研究

目的 探讨肿瘤相关成纤维细胞外泌体对乏氧条件下肺腺癌A549细胞自噬的影响及其机制。方法 选取手术的肺癌标本及癌旁组织标本,进行肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)和成纤维细胞(NFs)的原代分离和鉴定;收集CAFs和NFs细胞培养上清,利用差速离心法从细胞培养上清液中分离出外泌体(exo),并通过电子显微镜和Western Blot对分离出的外泌体进行鉴定;采用CoCL_(2)体外构建乏氧微环境,将A549细胞复苏并传代后,把外泌体与A549细胞共培养,共分为4组:常氧A549组、乏氧A549组、乏氧A549+CAFs-exo组、乏氧A549+NFs-exo组;利用Western印迹法检测不同细胞组中LC3Ⅱ、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达变化,并通过Western Blot确定各组中AMPK、p-AMPK、mTOR和p-mTOR的表达水平;采用CCK8法、划痕实验、Transwell法,研究外泌体在不同环境中与细胞共同培养后对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 Western Blot显示CAFs中FSP-1、FAP、a-SMA蛋白高表达,透射电镜观察到提取的外泌体具备典型的结构特征。与常氧A549组相比,乏氧A549各组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.001),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,p-AMPK/AMPK比值上升,p-mTOR/mTOR比值下降(P<0.001);与乏氧A549组相比,乏氧A549+NFs-exo组细胞增殖、迁移、侵袭能力无明显变化,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR比值均无明显变化;与乏氧A549组相比,乏氧A549+CAFs-exo组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显强于乏氧A549组且LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,p-AMPK/AMPK比值上升,p-mTOR/mTOR比值下降。结论 在乏氧微环境下,肿瘤相关成纤维细胞外泌体基于AMPK/mTOR信号通路,增强A549细胞自噬,可能是A549细胞抵抗乏氧环境、维持细胞增殖的机制之一。

肿瘤相关成纤维细胞外泌体对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制

目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)外泌体对肺腺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法取洛阳市中心医院胸外科收治的肺腺癌患者的癌组织和癌旁组织标本,并分离培养原代CAFs和正常成纤维细胞(NFs);收集CAFs和NFs细胞培养上清液,使用差速离心法提取CAFs外泌体和NFs外泌体。取对数生长期的A549细胞,随机分为对照组、NFs外泌体组、CAFs外泌体组,NFs外泌体组、CAFs外泌体组细胞分别加入NFs外泌体、CAFs外泌体孵育,对照组细胞常规培养。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白PTEN、PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白上皮钙黏素(E-cad)、神经钙黏素(N-cad)、波形蛋白(VIM)表达。采用随机数字表法将15只裸鼠分为A549裸鼠组、NFs外泌体裸鼠组、CAFs外泌体裸鼠组,每组5只,将对照组、NFs外泌体组、CAFs外泌体组细胞分别移植到A549裸鼠组、NFs外泌体裸鼠组、CAFs外泌体裸鼠组小鼠左侧腋下,移植6周内每周测量小鼠肿瘤体积。结果培养24 h时,3组细胞的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时,CAFs外泌体组细胞的增殖能力显著高于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);培养48、72 h时,对照组与NFs外泌体组细胞的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48 h时,CAFs外泌体组细胞的迁移能力显著高于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);培养24、48 h时,NFs外泌体组与对照组细胞的迁移能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组侵袭细胞数显著多于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组的侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组细胞中N-cad、VIM蛋白相对表达量显著高于对照组和NFs外泌体组(P<0.05),E-cad蛋白相对表达量显著低于对照组和NFs外泌体组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组细胞中N-cad、VIM、E-cad蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组细胞中PTEN蛋白相对表达量显著低于对照组和NFs外泌体组(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值显著高于对照组和NFs外泌体组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组细胞中PTEN蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值比较差异无统计学意义(P>0.05)。移植第1周,3组小鼠的肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05);移植第2~6周,CAFs外泌体裸鼠组小鼠的肿瘤体积显著大于A549裸鼠组和NFs外泌体裸鼠组(P<0.05);移植第2~6周,NFs外泌体裸鼠组与A549裸鼠组小鼠的肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CAFs外泌体可促进肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在小鼠体内促进肺腺癌的生长,其机制可能与EMT和PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

哮喘-慢阻肺重叠患者EBC中8-isoPG、LTB4及PCT检测的意义

目的探讨不同时期哮喘-慢阻肺重叠(ACO)患者呼出气冷凝集液(EBC)中8-异前列腺素(8-iso PG)、白三烯B4(LTB4)及PCT的变化及其临床意义。方法随机选择2017年9月-12月在我院住院治疗的急性加重期ACO患者40例作为观察组,分别于急性加重期及稳定期测定EBC中8-iso PG、LTB4及PCT,同时期健康体检者40人作为对照组,测定EBC中8-iso PG、LTB4及PCT,比较不同时期ACOS患者EBC中8-sio PG、LTB4及PCT的变化。结果急性加重期ACO患者EBC中8-sio PG、LTB4及PCT较稳定期明显升高(P<0.05);稳定期ACOS患者EBC中8-sio PG、LTB4较健康成人明显升高(P<0.05),但两组间PCT差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同时期ACO患者EBC中8-sio PG、LTB4及PCT水平不同,可以作为检测ACO患者气道炎症的指标。

哮喘-慢阻肺重叠综合症患者诱导痰细胞计数及血清降钙素原检测的意义

目的探讨不同时期哮喘-慢阻肺重叠综合症(ACOS)患者诱导痰细胞分类计数及血清PCT的变化,了解不同时期ACOS患者气道炎症的类型。方法随机选择2016年6月-9月在我院住院诊治的急性加重期ACOS患者30例作为观察组,分别于急性加重期及稳定期检测诱导痰细胞分类计数及血清PCT,同时期健康体检者30人作为对照组,测定诱导痰细胞计数及血清PCT,比较不同时期ACOS患者诱导痰炎性细胞分类计数及血清PCT的变化。结果急性加重期ACOS患者诱导痰炎症细胞总数、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及血清PCT较稳定期明显升高(P<0.05);稳定期ACOS患者诱导痰炎症细胞总数、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞较健康成人明显升高(P<0.05),但两组间血清PCT差异无统计学意义(P>0.05)。结论稳定期ACOS患者气道炎症以慢性炎症为主,主要浸润细胞为嗜酸性粒细胞与中性粒细胞并存,ACOS患者急性加重期多由细菌感染引起,气道急性炎症与慢性炎症共同作用,炎症水平明显高于稳定期。

氟伐他汀在中、重度慢性持续期支气管哮喘治疗中的作用

目的研究分析氟伐他汀在中、重度慢性持续期支气管哮喘治疗中的临床作用。方法选取中、重度慢性持续期支气管哮喘患者30例为对照组,均给予布地奈德/福莫特罗干粉剂吸入治疗,必要时吸入沙丁胺醇气雾剂。同期患者30例为试验组,均在上述治疗基础上给予氟伐他汀缓释片口服80 mg,1次/d。4周后,评估两组患者临床疗效,记录哮喘控制测试评分、日间和夜间症状评分情况,酶联免疫吸附法(ELISA)于治疗前后检测TNF-α、IL-6和IL-10水平。结果试验组总有效率为96.7%(29/30),显著优于对照组66.7%(20/30),二者差异有统计学意义(P<0.05)。试验组治疗后哮喘控制评分以及细胞因子水平改善程度均优于对照组(P<0.05)。结论氟伐他汀辅助治疗可有助于改善中、重度慢性持续期支气管哮喘炎症临床症状,降低体内炎症水平。

哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠综合征患者IL-1β、CRP及IL-6检测的临床意义

目的探讨哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠综合征(ACOS)患者急性加重次数与IL-1β、CRP及IL-6水平之间的关系。方法选取哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠综合征患者60例,在出院前处于稳定期时测定痰液IL-1β、血清CRP和IL-6,并进行1年随访,比较频繁急性加重组(随访期间加重次数≥2次)和非频急性加重组之间的痰液IL-1β、血清CRP和IL-6差异。结果频繁急性加重组患者痰液IL-1β、血清CRP及IL-6水平高于非频繁急性加重组(P<0.05)。结论 ACOS患者气道IL-1β和血清CRP、IL-6与急性加重正相关,可以预测ACOS患者急性加重风险。

脾氨肽对肺炎支原体感染致哮喘患者淋巴细胞亚群的影响研究

目的分析脾氨肽冻干粉口服治疗肺炎支原体(MP)感染所致哮喘发作患者的临床疗效,为MP感染哮喘发作患者临床治疗提供参考。方法选择2015年3月-2016年3月医院治疗的MP感染致哮喘发作患者108例,采用随机数字表法将患者分为对照组和试验组,每组54例,对照组患者采用常规对症治疗及抗菌药物治疗,试验组患者在对照组治疗方案基础上,加用脾氨肽冻干粉口服治疗,两组患者均连续治疗2周,比较两组患者入组、治疗后免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、T淋巴细胞亚群CD3+、CD_4^+、CD_8^+ 、CD_4^+/CD_8^+ 变化情况,并评价两组患者的临床症状评分。结果治疗2周后,两组患者IgG、IgA较治疗前均升高,IgM较治疗前降低(P<0.05),但试验组患者治疗后IgG、IgA高于对照组患者,IgM低于对照组患者(P<0.05);两组患者治疗后CD3+、CD_4^+、CD_4^+/CD_8^+ 较治疗前升高(P<0.05),CD_8^+ 较治疗前明显降低(P<0.05),但试验组患者治疗后CD3+、CD_4^+、CD_4^+/CD_8^+ 高于对照组患者(P<0.05),CD_8^+ 低于对照组患者(P<0.05);两组患者治疗后哮喘临床症状评分均较治疗前有明显降低,但治疗后试验组哮喘临床症状评分明显低于对照组(P<0.05)。结论脾氨肽冻干粉口服辅助治疗可有效降低MP感染致哮喘发作患者哮喘临床症状评分,改善患者T淋巴细胞亚群构成,提高患者免疫功能,对MP感染致哮喘患者的治疗具有较高的临床价值。