牦牛六个多能性相关转录因子OSKMNL的克隆和多顺反子慢病毒载体的构建

旨在克隆牦牛6个多能性相关转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog、Lin28(OSKMNL),构建多顺反子慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry。本研究以1头3~5月龄健康雌性牦牛胎儿的生殖嵴组织为研究材料,利用RT-PCR技术克隆牦牛6个多能性相关转录因子OSKMNL的完整编码区序列,并对其进行生物信息学分析;应用无缝克隆技术构建慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry;用293T细胞包装慢病毒,将包装好的慢病毒感染293T细胞和牦牛成纤维细胞,通过观察荧光表达和RT-PCR技术检测病毒感染情况(试验分为病毒感染组和空白对照组,每个组设置3个重复)。结果表明,克隆的牦牛OSKMNL基因的编码区大小分别为1 083、963、1 434、1 320、903、618 bp;序列分析发现牦牛OSKMNL氨基酸序列与黄牛的同源性在99%以上,其中Sox2、Klf4、c-Myc与黄牛的同源性为100%;进化树结果显示牦牛与黄牛、瘤牛、水牛的亲缘关系最近,与小鼠的亲缘关系最远;蛋白结构预测发现牦牛的6个转录因子OSKMNL都具有该基因家族相应蛋白功能的结构,比如POU结构域、HOX结构域、HMG结构域、Znf-C2H2结构域、HLH结构域、CSP结构域等;构建了慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry;慢病毒感染293T细胞发现试验组表达红色和绿色荧光;慢病毒感染牦牛成纤维细胞发现试验组表达红色和绿色荧光,RT-PCR结果显示预期大小的条带。本研究成功克隆了牦牛的6个多能性相关转录因子OSKMNL;构建了分别携带牦牛3个转录因子的慢病毒载体FUW-teto-OSM-EGFP和FUW-teto-KNL-mCherry;包装的慢病毒能感染牦牛成纤维细胞。有利于推动多能性相关转录因子OSKMNL在牦牛干细胞中的应用,也为后续研究牦牛iPSC做准备。

险交白卷

在清代的诗人中，王士祯堪称佼佼者。当时，康熙皇帝的身旁有一位文学侍臣张英，常在圣上面前极力推荐他。康熙于是召见王士祯，御笔一挥写了个字，命他以此为题写一首诗献上。王士祯虽是大诗人。但反应却较为迟缓，再加上皇帝在一旁坐等，顿时紧张得汗流浃背，憋了半天也想不出半个字来。张英见状暗暗叫苦，只好在一旁代替他写了一首．然后揉成小团悄悄放在他的桌角上。王士祯照抄了一份，这才交了卷。

410S不锈钢表面麻点缺陷成因分析及改进

酒钢公司收到客户反馈的410S不锈钢表面麻点质量异议,经观察分析,客户提供的410S不锈钢质量异议样板及其金属制品表面的麻点缺陷属于典型的不锈钢点蚀形态。本文根据质量异议样板的化学成分和金相检测结果,结合点腐蚀理论和生产实践,对410S不锈钢表面麻点缺陷的产生原因进行了分析。通过酸洗实验,确定麻点缺陷的产生是因客户酸洗溶液中含有较多的Cl-所致,并非产品质量问题。客户采纳了酒钢公司的建议,停止使用盐酸酸洗,410S不锈钢酸洗板再未出现点蚀的质量问题。

春风春雨润心田

掌声、笑声、欢呼声,阵阵传来,2004年3月4日,正值春暖花开,桃红柳绿之时,鹤壁煤业(集团)公司四矿,举行了一个别开生面的活动.鹤壁市困难职工帮扶中心鹤煤(集团)公司分部四矿示范点揭牌、鹤煤四矿职工大病·助学基金会成立暨"爱心募捐行动"仪式隆重召开.

年轻干部如何赢得人心

一名干部特别是年轻干部，在本单位内赢得同事们的支持和群众的拥护，也就是赢得人心，不仅将为做好各项工作打下坚实的基础，对其个人的成长和取得事业的成就也大有裨益。那么，年轻干部如何赢得人心呢?

险交白卷

在清代的诗人中,王士祯堪称佼佼者。当时,康熙皇帝的身旁有一位文学侍臣张英,常在圣上面前极力推荐他。康熙于是召见王士祯,御笔一挥写了个字,命他以此为题写一首诗献上。王士祯虽是大诗人,但反应却较为迟缓,再加上皇帝在一旁坐等,顿时紧张得汗流浃背,憋了半天也想不出半个字来。张英见状暗暗叫苦,只好在一旁代替他写了一首。