从小鼠11.5d胚胎cDNA文库中筛选Dishevelled2相互作用蛋白

Dishevelled (Dvl)是个多功能、进化上非常保守的蛋白 ,在Wnt信号传导通路中起着重要的作用。为了研究Dishevelled介导Wnt信号传递的分子机制 ,利用GAL4酵母双杂交系统筛选了小鼠 1 1 5d胚胎cDNA文库 ,发现了1 5个可与小鼠Dvl2DEP结构域和羧基端相互作用的蛋白质。将阳性文库质粒测序并对测序结果做BLAST分析 ,发现其中一个阳性克隆是编码Gli3蛋白氨基端 (6 1 2 2aa)的cDNA片段 。

黑色素瘤相关抗原MAAT1p15与LRP6的相互作用及其对Wnt信号通路的调控

为了深入研究Wnt信号的传导机制 ,利用GAL4酵母双杂交系统 ,以Wnt受体LRP6的胞内区为诱饵蛋白 ,筛选小鼠 11 5d胚胎cDNA文库 ,发现了一个新的LRP6相互作用蛋白 :黑色素瘤相关抗原MAAT1p15 (melanoma associatedantigenrecognizedbycytotoxicTlymphocytesp15 ) .免疫共沉淀方法证明了LRP6胞内区和MAAT1p15在哺乳动物细胞中也存在相互作用 .荧光素酶报告系统分析实验显示 ,MAAT1p15能够明显增强Wnt1和LRP6响应的下游基因的转录活性 。

罗汉果复配武夷肉桂凉茶饮料的制备

以罗汉果和武夷肉桂茶为主要原料,添加蜂蜜、柠檬酸等辅料,研制兼具保健功能及优良口感的复合凉茶饮料。以感官评分为评价指标,考察料液比、提取温度和提取时间对罗汉果提取液和武夷肉桂提取液品质的影响。结果表明,罗汉果及武夷肉桂提取液的最佳制备工艺分别为:料液比1∶60和1∶70,提取时间30 min和40 s,提取温度均为90℃。采用正交试验设计优化罗汉果肉桂复合凉茶饮料的配方,得到最佳感官配方为:罗汉果与武夷肉桂提取液的比例为1∶2,蜂蜜添加量为2.0%,柠檬酸添加量为0.05%,其成品能量较低、口感清爽。

GABARAP克隆表达及其抗体的制备与应用

GABARAP(GABA_A-receptor-associated protein)是最新发现的与GABA_A受体γ2亚基胞内区有相互作用的蛋白,目前的研究结果表明它可能是通过与微管相互作用辅助GABA_A受体向细胞膜上运输并使受体在膜上聚集。本文中用PCR方法扩增出编码人GABARAP(hGABARAP)的cDNA片段,然后分别克隆到真核表达载体pcDNA6/HA和谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX4T2中。将后者导入大肠杆菌BL21中,经过IPTG诱导后用谷胱甘肽偶联的Sep- harose-4B柱子纯化出融合蛋白GST-hGABARAP。以此蛋白作为抗原免疫家兔制备抗GABARAP的抗血清,并用GST- hGABARAP耦联的NHS-activated Sepharose4柱子纯化抗体。纯化的抗体可以用于真核细胞中过量表达hGABARAP的Western和免疫染色检测。结果表明,过量表达的hGABARAP在真核细胞核和细胞质中都有表达,部分集中于核周区域。

ATF5与TCF4相互作用及其对Wnt信号通路的调控

应用酵母双杂交技术, 鉴定Wnt通路关键信号分子TCF4与cAMP效应元件结合蛋白家族新成员-- 激活转录因子5(ATF5)之间的相互作用, 酵母表型分析和β-半乳糖苷酶(β-gal)活性测定结果发现, 两者的作用位于ATF5蛋白C端含有碱性亮氨酸拉链(bZIP)区域(162～ 282 aa). 通过受TCF启动的荧光酶报告系统分析ATF5对Wnt信号通路的影响, 结果显示ATF5蛋白C端能进一步加强TCF4对Wnt通路的激活效应. 由此提示, ATF5可能是Wnt通路下游信号的辅助激活因子(co-activator), 它能协同β-连环蛋白/TCF4参与Wnt信号通路的激活.

激活转录因子5在肾癌细胞系中的表达及意义

目的 探讨新基因激活转录因子 5 (ATF5 )在不同肾癌细胞系中的表达及意义。 方法 采用RT PCR及Northernblot方法检测ATF5基因在肾癌细胞系A498、786 O、GRC I和胚肾细胞系2 93及正常肾小管上皮细胞系HK 2中的表达 ,计算机辅助图像分析结果。 结果 RT PCR检测ATF5在肾癌细胞系A498、786 O、GRC I和胚肾细胞系 2 93中呈强表达 ,其灰度面积吸光度A值分别为35 195 .2± 2 8.2、35 70 9.3± 18.3、370 38.5± 2 4.2、33 318.8± 34.2 ,而在正常肾小管上皮细胞系HK 2中表达较弱 ,灰度面积吸光度A值为 2 42 3.6± 3 .3,肾颗粒细胞癌细胞系GRC I中的表达是HK 2的 15倍 ,两者差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。Northernblot检测ATF5在不同肾癌细胞系的表达结果与RT PCR方法检测结果一致。 结论 ATF5在肾癌发生和发展中具有一定作用 ,其致病机理可能与协同Wnt信号通路相关。