自贡地区不同年龄阶段妊娠早期妇女甲状腺功能指标参考区间的建立

目的:采用间接法建立四川自贡地区健康妊娠早期妇女不同年龄阶段甲状腺激素测定的参考区间,为临床诊断和治疗提供依据。方法:选取自贡市第一人民医院妇产科建档的2019年1月至2021年12月健康妊娠早期妇女的数据,共1518例。根据孕妇年龄分为A组(<26岁)、B组(26~34岁)、C组(>34岁)3组,以2.5%至97.5%的百分位点数所在区域作为参考区间。对3个年龄阶段目标人群的促甲状腺激素(TSH)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)、血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和血清游离甲状腺素(FT4)这5项甲状腺激素数据进行统计分析。结果:不同年龄妊娠早期妇女的TSH、FT3和FT4这3项指标之间无统计学差异,3组年龄合并的参考区间分别为TSH(0.12~3.81 mIU/L)、FT3(2.20~5.03 pmol/L)、FT4(4.79~16.13 pmol/L);不同年龄的TT3、TT4水平有统计学差异,其中年龄小于26岁的妊娠早期妇女的TT3、TT4的参考区间分别为1.04~2.78 nmol/L和91.80~204.88 nmol/L,而年龄大于26岁的妊娠早期妇女的TT3、TT4的参考区间分别为1.04~2.55 nmol/L和82.70~190.00 nmol/L。各指标年龄组A、B、C组与非妊娠组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:建立的自贡地区不同年龄阶段妊娠早期妇女甲状腺激素5项指标参考区间,可为临床疾病诊断、治疗和预后判断提供参考。

高三尖杉酯碱通过下调IRS4蛋白质的表达抑制黑色素瘤维罗非尼耐药细胞周期和增殖

黑色素瘤是一种死亡率极高的恶性肿瘤。近年来,其发病率逐年上升且耐药问题日渐突出。因此,如何克服耐药提高治疗效果是目前急需解决的问题。本文对高三尖杉酯碱对黑色素瘤维罗非尼耐药细胞A375R的作用及其机制进行初步探究。采用CCK-8法检测发现,维罗非尼对黑色素瘤细胞A375和A375R的半数抑制浓度(IC50)分别为0.94μmol/L和49.09μmol/L,其耐药倍数为52.22倍,证明A375R具有耐药性,可进行后续实验;高三尖杉酯碱作用于A375R细胞24、48、72 h后的IC50分别为18.57 ng/mL、9.88 ng/mL、9.23 ng/mL,说明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性。克隆形成实验显示与对照组相比,给予高三尖杉酯碱5、10、20 ng/mL,作用24 h,克隆形成率分别为52.18%、29.72%、2.36%,表明高三尖杉酯碱能有效抑制A375R细胞的克隆形成。流式细胞术检测显示,G0/G1期细胞由正常对照组的38.94%增加至55.05%,细胞阻滞在G0/G1期。蛋白质印迹结果显示,与A375细胞相比,A375R细胞中胰岛素受体底物4(IRS4)、p-Akt蛋白质表达水平上调,使用高三尖杉酯碱能下调A375R中IRS4、p-Akt、细胞周期蛋白E1、CDK2蛋白质的表达水平。以上结果表明,高三尖杉酯碱可能通过下调IRS4蛋白表达抑制PI3K/Akt通路的激活,使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制黑色素瘤耐药细胞的增殖。

高三尖杉酯碱激活ATM/p53通路抑制人肝癌细胞PLC5增殖

目的探讨高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)对肝癌细胞PLC5增殖的影响及其可能的机制。方法采用CCK-8以及EdU检测HHT对PLC5细胞增殖的影响;流式细胞术检测HHT对PLC5细胞周期的影响;Western blot检测周期相关蛋白CyclinA、CDK2、p21以及p53、ATM的表达。结果CCK-8结果显示,HHT(0、5、10、20、40、80μg·L^(-1))分别作用PLC5细胞24、48、72 h后,HHT对PLC5细胞的抑制率明显升高,且呈现浓度和时间依赖性;EdU结果显示,经HHT作用后,PLC5细胞增殖能力明显减弱;流式细胞结果显示,HHT可将PLC5细胞阻滞在S期;Western blot结果显示,HHT可上调PLC5细胞中p21、p53以及ATM的蛋白水平,并下调PLC5细胞中CyclinA、CDK2的蛋白水平。结论HHT可诱导PLC5细胞发生DNA损伤,激活DNA损伤修复信号通路,阻滞细胞周期,从而抑制细胞增殖。

鸦胆子苦醇通过RhoA/ROCK1信号通路抑制人结直肠癌细胞HCT-116的侵袭和迁移

目的探讨鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对结直肠癌细胞HCT-116侵袭和迁移的影响和可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的BRU对HCT-116细胞增殖能力的影响;划痕和Transwell实验检测BRU对HCT-116细胞迁移能力和侵袭能力的影响;Western blot检测BRU和ROCK抑制剂(Y27632)对HCT-116细胞中迁移侵袭相关蛋白MMP2、MMP9和RhoA、ROCK1表达的影响。结果CCK-8结果显示,经过BRU(0、2.5、5、10、20、40、80、160、320 nmol·L^(-1))处理HCT-116细胞24、48、72 h后,BRU对HCT-116细胞的抑制率明显升高,并且呈浓度和时间依赖性;划痕和Transwell实验结果显示,BRU能明显抑制HCT-116细胞的迁移和侵袭能力;Western blot结果表明,BRU和Y27632都能够明显减少HCT-116细胞中的MMP2、MMP9、RhoA和ROCK1蛋白的表达。结论BRU可能通过RhoA/ROCK1通路抑制结直肠癌细胞HCT-116的迁移和侵袭。

高三尖杉酯碱对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及机制研究

目的探究高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)对人黑色素瘤A375增殖的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测HHT对A375细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色法观察染色质凝集情况;细胞克隆形成实验检测HHT对A375细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测HHT对A375细胞凋亡和周期影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3、Cleaved-PARP、CyclinB1和CDK1蛋白的表达情况。结果CCK-8结果显示,随着药物的剂量(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8μmol·L^-1)和作用时间(24、48、72 h)增加,HHT对A375细胞的抑制作用逐渐增强;Hoechst 33258染色和FCM结果显示,HHT可使A375细胞染色质呈凋亡形态改变,促进细胞凋亡,将A375的细胞周期阻滞于G2/M期;克隆形成实验显示,HTT可以抑制A375细胞的克隆形成能力;Western blot结果表明HHT可下调CyclinB1、CDK1和Bcl-2蛋白水平,上调Bax,Cleaved-caspase 3和Cleaved-PARP蛋白表达水平。结论HHT使A375细胞阻滞于G2/M期,抑制A375细胞增殖;HHT可激活线粒体凋亡信号通路,诱导黑色素瘤A375细胞凋亡。

二甲双胍激活AMPK/p53调节尿素循环抑制结肠癌HCT116细胞增殖

目的探讨二甲双胍(metformin,Met)对HCT116细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖情况;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成的能力;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期和凋亡率;免疫荧光染色观察磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶(p-AMPK)的定位情况,Western blot检测p-AMPK、AMPK、p53、p-p53、精氨酸酶1(ARG1)、鸟氨酸转氨甲酰酶(OTC)和鸟氨酸脱羧酶(ODC)的表达情况。结果 CCK-8结果显示:Met呈浓度和时间依赖性抑制细胞的增殖;FCM结果显示:Met能诱导细胞发生凋亡,将细胞周期阻滞于G1期;克隆形成实验显示:Met可以抑制细胞的克隆形成能力;经免疫荧光染色可知:Met处理组细胞胞质及胞核内p-AMPK的表达增加;Western blot结果显示:p-AMPK、p53、p-p53蛋白的表达上调,ARG1、OTC、ODC蛋白的表达下调。结论 Met可抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,诱导G1期细胞周期阻滞,促进细胞凋亡;其可能的机制与激活AMPK、p53信号,抑制尿素循环ARG1、OTC和多胺生成限速酶ODC的表达有关。

鸦胆子苦醇抑制H1299非小细胞肺癌细胞增殖和促进其凋亡的机制

目的研究鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对H1299非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法使用CCK-8法与EdU实验检测BRU对细胞增殖的影响;克隆形成实验检测BRU对细胞克隆形成的影响;Hoechst33258染色实验与流式细胞仪观察细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、Bcl-2、Bcl-xL、cleaved-caspase-3、caspase-3、Gadd45α、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、细胞核与胞质中NF-κB-p65的蛋白质水平。结果CCK-8实验发现,随着BRU浓度与作用时间的增加,H1299细胞受到的抑制作用逐渐增强;EdU实验显示,BRU处理组的EdU掺入率明显下降;克隆形成实验结果显示,BRU能抑制H1299细胞的克隆形成能力;Hoechst33258实验与流式细胞仪检测发现,BRU能使H1299细胞胞核呈现凋亡状态并增加其凋亡率;Western blot显示BRU可上调Bax、cleaved-caspase-3、Gadd45α,下调Bcl-xL、Bcl-2、caspase-3、p-PI3K、p-Akt与胞核中p65的蛋白质水平。结论BRU以浓度和时间依赖抑制H1299细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活并抑制NF-κB-p65的核转运有关。