周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆及序列分析

[目的]克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease of periodic Brugiamalayi,BmCP)基因到原核载体中,测定其序列,为进一步的研究奠定基础。[方法]从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增出BmCP基因序列,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pMD18-T-BmCP,经测序验证,并进行同源性比较。[结果]RT-PCR扩增出一条约1201bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%。[结论]成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶重组质粒pMD18-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件。

审视内外病因在消渴病中的发病学机理——中医内科教材消渴篇有待完善

教材认为:阴虚燥热为消渴病理特点,其病变脏腑在肺、胃、肾,并以肾为主。消渴病宗"三消"分型,养阴清热,生津除消为治疗消渴病的大法。但实际上消渴病之病理特点应为精微不得正化。主要病变脏腑在肺、脾、肾并以脾为主。即使宗三消分型,消渴病发病也与痰湿脂热关系密切,甚至与寒湿二邪有关,养阴生津通治消渴甚不合理。与此同时,教材论消渴的发病原因无外邪一说,此不符合消渴病的发病学基础,应补充更正。

益肾蠲痹丸及雷公藤对日本血吸虫虫卵肉芽肿的影响

对感染15条日本血吸虫尾蚴的雌性小鼠.分别于感染后25d及45d起喂服益肾蠲痹丸和雷公藤.结果表明益肾蠲痹丸对虫卵肉芽肿发展具明显抑制作用,肉芽肿平均直径和肉芽肿内嗜酸粒细胞均明显减少.雷公藤对急性期虫卵肉芽肿可有促进发展作用,而对慢性期虫卵肉芽肿则有抑制作用.

互联网视听节目内容管理与自律准则

随着互联网视听服务获得蓬勃发展，影响力日益扩大，各种不良内容也借互联网的开放平台趁虚而入，因此，对互联网视听节目内容进行有效管理势在必行。结合互联网的特性及境外管理经验，发挥行业自律显得尤为重要。《中国互联网视听节目自律准则》应运而生。《中国互联网视听节目自律准则》依据我国法律及一般社会公共道德制定，回答了“该依据什么规范内容，管理内容传播”的问题，对该准则的认可和遵循将有助于网站有效降低内容传播过程中可能存在的法律风险，并有助于提升视听节目品味。

常见吸虫微量金属元素测定

本研究用原子吸收光谱法对常见吸虫日本血吸虫、卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫和布氏姜片吸虫四种成虫及日本血吸虫卵进行微量金属元素测定，测出成虫和虫卵含有镁、钙、铜、铁、锌、锰、铅等元素，血吸虫卵还含有镉元素，四种吸虫成虫未检出镉、铬、镍、银元素。

吡喹酮与左旋咪唑对日本血吸虫虫卵肉芽肿的影响

对感染15条日本血吸虫尾蚴的雌性小鼠分别于感染后45天起喂服吡喹酮及左旋咪唑，小鼠肝内虫卵肉芽肿平均直径和肉芽肿内嗜酸粒细胞明显减少，表明这两种药物对血吸虫虫卵肉芽肿的发展具有明显抑制作用。

周期型马来丝虫副肌球蛋白基因真核表达重组质粒构建

提取周期型马来丝虫总RNA。跟据已知的马来丝虫副肌球蛋白(BmPmy)基因序列,设计合成引物,并引入HindⅢ和BamHⅠ酶切位点,应用RT-PCR技术,扩增BmPmy基因片段,克隆至载体pGEM-T中,经PCR和双酶切鉴定后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-BmPmy,并转染COS-7细胞后进行RT-PCR分析。转染的COS-7细胞高水平表达周期型马来丝虫副肌球蛋白mRNA,结果与预期相符。

马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测

根据GenBank中马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(BmG3PD基因)序列设计引物,以马来丝虫mRNA为模板,RT-PCR扩增BmG3PD基因,将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆。经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及PCR鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-BmG3PD,经序列分析及同源性比较,以及对其编码产物进行B细胞表位预测,结果表明PCR扩增的特异性条带为1020bp,与预期相符,与GenBank已知基因序列同源性为99%。编码产物B细胞表位预测,氨基酸区域可能在22～36、242～255、303～318和326～336位。

周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因原核和真核表达质粒的构建

目的构建我国流行的周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(BmCP)基因原核和真核表达质粒,为进一步研究奠定基础。方法从周期型马来丝虫虫体中提取总RNA,反转录成cDNA,设计合成引物,以cDNA为模板,通过PCR从cDNA中扩增出目的基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆人pMD18-T载体.进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒,进行测序分析和同源性比较。阳性克隆的质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+).转化感受态大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果RT-PCR扩增出1条约1201 bp的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GenBank已知的基因序列同源性为99%。构建了真核重组表达质粒peDNA3.1-BmCP。结论成功构建了周期型BmCP原核和真核重组表达质粒,为进一步研究该基因的功能提供了条件。

马来丝虫肌球蛋白部分编码基因Bm-M55的克隆与真核表达

根据马来丝虫肌球蛋白部分编码基因(Bm-M55)序列设计引物,以其微丝蚴总RNA为模板,反转录PCR扩增目的基因。用TA克隆方法将目的基因克隆至载体pGEM-TEasy中,经PCR和双酶切鉴定并测序后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bm-M55,转染COS-7细胞后进行RT-PCR验证。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)对获得重组蛋白Bm-M55进行分析和鉴定。RT-PCR鉴定结果显示,转染的COS-7细胞表达了Bm-M55基因,根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank(登录号为AAA27858)中的一致,重组蛋白Bm-M55相对分子质量(Mr)约为55000。

周期型马来丝虫HSP70基因原核表达载体的构建及表达产物的分析

目的 在大肠埃希菌宿主系统中表达周期型马来丝虫热休克蛋白70（HSP70）基因，并对表达产物进行SDS—PAGE分析。方法以重组质粒pGEM—T—HSP70为模板，根据报道的HSP70基因序列设计合成一对引物，用PCR法扩增HSP70基因（包括完整开放读码框架片段及其上下游序列共长2198bp），PCR产物定向插入原核表达载体pGEX-4T-3中，构建的重组质粒pGEX-4T-3-HSP70经双酶切鉴定。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），用IPTG诱导GST．Tag融合蛋白的表达。经SDS—PAGE分析并经凝胶图像分析确定目的蛋白的表达水平。结果重组表达质粒pGEx-4lT-3-HSP70全长约7200bp，经双酶切后应得到长度为4968bp的载体和2198bp的目的基因2个片段，1％琼脂糖凝胶电泳显示结果同预期完全相符。HSP70相对分子质量（Mr）为70×10^3，质粒pGEX-4T-3的融合部分（GST．Tag）表达产物的胁约为26×103，将重组质粒转化BL-21（DE3）菌。经IPTG诱导表达，菌体蛋白的SDS—PAGE图谱显示，诱导组出现特异性蛋白表达条带，其Mr约100×10^3，与预计大小相同。目的蛋白占菌体总蛋白的12％左右。结论 成功地构建了重组原核表达载体pGEX一4T一3-HSP70：周期型马来丝虫HSP70基因可在大肠埃希菌中稳定表达，为制备和纯化表达蛋白以及丝虫病疫苗的进一步研究打下基础。

宿主对周期型马来丝虫微丝蚴细胞毒作用的体内研究

目的以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，研究宿主体内清除虫体、减轻虫体负荷、控制丝虫感染的免疫效应机制。方法提取纯净的周期型马来丝虫微丝蚴（ｍｆ）装入微孔实验盒，然后植入 ＳＤ大鼠体内，在不同时间观察机体免疫系统对ｍｆ的杀伤作用。结果含ｍｆ的３．０μｍ微孔盒内，迁入的细胞量随植入时间延长而逐渐增多。迁入的细胞种类及百分率，各实验组之间无明显差异。免疫血清组ｍｆ被效应细胞粘附、杀伤率均明显高于正常血清组。免疫血清用抗ＩｇＧ免疫球蛋白处理后，粘附细胞虫体及虫体死亡率都大大下降。 ３．０μｍ微孔盒内大量效应细胞粘附于虫体表面。扫描电镜下，观察到效应细胞粘附的虫体表面出现坏死、剥脱。结论ｍｆ对宿主效应细胞有一定的趋化作用。宿主体内存在着抗体介导的细胞毒作用，参与细胞毒作用的抗体主要是ＩｇＧ。其主要的效应细胞是中性粒细胞、巨噬细胞和嗜酸粒细胞。

剖宫产后瘢痕子宫再次妊娠孕产妇阴道产率及其影响因素研究

目的:研究分析剖宫产后瘢痕子宫再次妊娠孕产妇阴道产率及其影响因素。方法:选取2016年1-12月的2928例剖宫产后瘢痕子宫再次妊娠孕产妇为研究对象,统计其阴道产率,并将不同年龄、文化程度、居住情况、经济状况、社会支持程度、孕期知识认知度、自身生产认知度、家属对生产知识认知度、顺产紧张度及阴道分娩史者的阴道产率进行比较,采用Logistic回归分析上述因素与阴道产率的关系。结果:2928例剖宫产后瘢痕子宫再次妊娠孕产妇中,阴道产者为861例,阴道产率为29.41%,且不同年龄、文化程度、居住情况、经济状况、社会支持程度、孕期知识认知度、自身生产知识认知度、家属对生产知识认知度、顺产紧张度及阴道分娩史者的阴道产率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),经Logistic回归分析显示上述因素均与阴道产有密切的关系(P<0.05)。结论:剖宫产后瘢痕子宫再次妊娠孕产妇阴道产率较低,较多个人及家属因素均可对顺产率造成一定的影响,因此应根据这些因素给予产妇及家属进行针对性的干预。

恶性疟原虫CSP基因重组蛋白及DNA免疫诱导小鼠体液免疫应答比较

本文利用恶性疟原虫FCC1/HN株环子孢子蛋白 (PfCSP)基因DNA质粒通过不同途径、不同剂量免疫小鼠 ,观察其产生的体液免疫应答反应 ,并将其与相应的重组表达蛋白疫苗进行比较。结果显示 :DNA免疫刺激机体产生抗体反应强度的免疫途径依次为肌肉、静脉和皮下 ;宿主对DNA免疫存在一定的剂量依赖性 ;ELISA和Dot -ELISA检测免疫后 4周和 7周 ,DNA质粒组刺激机体产生抗体的滴度均显著低于相应的重组蛋白组。表明PfCSPDNA疫苗与重组表达蛋白疫苗均可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答 。

重新审视2型糖尿病“消渴病”的病机特点

根据现代医学对糖尿病归属于中医消渴病范畴这一事实提出,现阶段消渴病患者不具有典型的"三消"症状,其形体丰肥多脂者甚多,用现行的中医高等院校内科学教材规范的消渴理论难以完整地解释以上现象。本文应用中医内科基础理论,以及《内经》对消渴病的论述,同时结合49例2型糖尿病患者的临床资料及中医辨证分析认为,现阶段的消渴病病理特点不能沿用教材论述的"阴虚燥热"予以规范,而应用"精微不得正化"作为消渴病的病理特点更为妥帖。同时认为,不同时代消渴病的病机有着明显的时代特征,我们应该用审证求因的辩证观点对消渴病的病理特点加以重新审视。现在正在使用的中医内科学教材规范的消渴理论已难以指导消渴病教学及临床,因此必须加以完善。

恶性疟原虫FCC1/HN株CSP抗原细胞免疫应答IL-2和IFN-γ的体外诱生分析

本实验利用恶性疟原虫FCC1／HN株CSP抗原基因在真核细胞（HeLa）中高效表达，将纯化的表达蛋白作为候选疫苗免疫小鼠，并通过体外诱生检测小鼠脾细胞白介素2（IL-2）和γ干扰素（IFN-γ）水平。结果显示经疫苗免疫后的BALB／C小鼠脾细胞体外经特异性刺激后产生的IL-2和IFN-γ水平有显著提高。与我们前期研究结果比较，表明对该疫苗特异性的IL-2、IFN-γ的产生与淋巴细胞增殖以及NK细胞活性增高有明显的相关性；该疫苗对T细胞有一定的刺激能力，可诱导小鼠产生较强的细胞免疫反应。

通便何须久用大黄

大黄又名黄良、将军、火参、肤如，其性本苦寒，能荡涤肠胃，除肠胃之热结，治心下之痞满；能推陈致新，为治疗热结便秘之良药。

细胞毒作用前后马来丝虫微丝蚴氨基酸组成及含量的测定分析

目的 通过观察马来丝虫微丝蚴 (mf)经细胞毒作用后 ,虫体氨基酸含量的变化 ,进一步探讨宿主体内的杀虫机制。 方法 应用高速氨基酸分析仪对细胞毒作用前后的周期型马来丝虫 mf进行氨基酸组成及含量的分析比较。 结果 马来丝虫 mf含 17种氨基酸 ,缺少色氨酸。经宿主细胞毒作用后的虫体氨基酸绝对含量明显低于细胞毒作用前 (P<0 .0 5 )。其中 ,精氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸下降显著 (P<0 .0 1)。 结论 虫体氨基酸含量下降 ,尤其是碱性氨基酸与酸性氨基酸、芳香族氨基酸之间比率下降可能是宿主体内杀伤丝虫 mf的机制之一。