毕赤酵母表达系统及其发酵策略

毕赤酵母是一种广泛应用的异源蛋白表达系统,已在多个领域成功表达了许多基因工程产品。由于其优越的表达性能和可持续的重复性,毕赤酵母已经成为目前最受欢迎、使用最广泛的宿主之一,广泛应用于外源蛋白的生产。文章探讨了毕赤酵母表达系统的常用宿主菌和载体,并以培养基成分、发酵温度、pH、溶氧量、泡沫、甲醇补料流加方式和培养时间等因素为重点,阐述了毕赤酵母高密度发酵的策略及这些因素对外源蛋白表达结果的影响,同时也指出了当前毕赤酵母高密度发酵过程中存在的问题。

人工合成二聚体运动相关肌因子Irisin-Irisin的表达与功能

目目的的:运动相关肌因子Irisin是以二聚体的形式来发挥功能,故设计串联的Irisin-Irisin模拟二聚体,探讨大肠杆菌表达的重组Irisin-Irisin在活性、对肿瘤细胞功能方面与商品化单体Irisin的异同。方法:选择BL21(DE3)大肠杆菌表达菌株、pET-30a表达载体,通过异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导,获得大肠杆菌重组蛋白Irisin-Irisin。用镍柱亲和纯化获取高纯度的重组Irisin-Irisin,将重组Irisin-Irisin和单体Irisin分别处理C2C12骨骼肌细胞,观察线粒体相关基因UCP-1的表达来验证活性,并在胃癌、结直肠癌等消化道肿瘤中验证其功能,对比重组Irisin-Irisin和单体Irisin在活性及对肿瘤细胞功能方面的差异。结果:(1)重组Irisin-Irisin表达、纯化结果:与未诱导的样品比较,IPTG诱导后重组Irisin-Irisin显著表达;通过镍柱亲和纯化法得到大小约27 kDa高纯度的重组Irisin-Irisin。(2)重组Irisin-Irisin活性检测结果:与空白对照组比较,重组Irisin-Irisin组和Irisin组处理C2C12细胞均能上调UCP-1的表达(P<0.05);相较于Irisin组,重组Irisin-Irisin组诱导UCP-1效果更显著(P<0.05),活性更强。(3)重组Irisin-Irisin抗肿瘤功能检测结果:与空白对照组比较,100 ng/mL Irisin-Irisin组和200 ng/mL Irisin-Irisin组均能抑制胃癌细胞和结直肠癌细胞的迁移能力(P<0.05),但对其增殖、克隆形成能力无影响;相较于Irisin组,重组Irisin-Irisin组抑制细胞迁移的效果更显著(P<0.05)。结论:大肠杆菌原核系统表达的重组Irisin-Irisin有活性,且活性优于单体Irisin;重组Irisin-Irisin对胃癌细胞、结直肠癌细胞迁移有影响,且效果优于单体Irisin。

2003年安徽省中稻花期高温热害的调查与分析

根据对2003年安徽省江淮地区单季中稻结实率的调查,结合气象资料和栽培技术资料进行分析,初步认为,2003年安徽省单季中稻大面积严重减产的主要原因是花期持续高温导致结实率严重下降,同一品种抽穗期不同,受害程度不同;同田块不同稻穗或同一穗的不同部位颖花,受害程度也有差异,表明花期与高温重叠时间越长,受害越重。不同品种间凡是高温期抽穗开花的,结实率均下降,但程度有差异,可能与不同品种的耐热性有关。还对今后的防御措施进行了讨论。

水稻覆膜旱作的生态生理效应

研究结果表明，水稻品种在旱作条件下其分蘖期、拔节长穗期、抽穗开花期和灌浆期耐旱性不同，采用地膜覆盖可有效阻挡地面蒸发，节水效率达６０～８５％，生育期延长７～９ｄ，分蘖力增强，最高分蘖数比水作的多１７０１×１０４·ｈｍ－２，有效穗数增加，但每穗粒数、结实率和千粒重下降，其产量水平与水作差异不显著．覆膜旱作水稻前期生长优势强，但后期叶面积指数（ＬＡＩ）、净同化率（ＮＡＲ）、群体生长率（ＣＧＲ）和比叶重等均有所降低，灌浆速度较慢。

水稻地膜覆盖旱作技术研究初报

３ａ的试验研究表明，水稻采用旱育秧、大田旱整地、地膜覆盖保湿、旱栽秧旱管理，可以节约８０％～９０％的灌溉用水，增产幅度达１０％以上，同时具有省肥、省药、省种子等优点，是干旱地区水稻避灾保收的一项重要措施。

安徽省单季中稻施肥技术浅析

对安徽省单季中稻施肥的种类和数量、时间与方法等进行了调查分析,提出了施肥技术存在的问题,并就高产栽培条件下单季中稻施肥技术的改进进行了探讨。

IL-6细胞因子家族在肾细胞癌中的研究进展

近年来肾细胞癌(RCC)的发病率在我国和世界范围内均呈逐年上升趋势,RCC大约60%的病例是偶然发现的,这就提示我们要寻找有效的指标对肿瘤发展程度进行判断。白细胞介素-6(IL-6)家族的细胞因子在肾癌的转移和预后中起重要作用,血清中IL-6和IL-27的含量已经成为转移性肾癌的重要指标,为此,文章对IL-6细胞因子家族成员在肾细胞癌中的研究进展进行阐述。

安徽省江淮丘陵地区单季中稻旱灾原因浅析及对策

对安徽省江淮丘陵地区水资源现状、水稻旱胁迫成灾的原因、栽培习惯和技术因素等进行了分析。研究了水稻节水灌溉的主要技术,提出了减灾稳产增效对策。

安徽省单季中稻播栽期和密度与产量关系浅析

根据对安徽省南、北单季中稻区水稻的播栽期和密度及其与产量关系的调查和试验研究,分析了影响产量进一步提高存在的问题。并就高产栽培条件下的适宜播栽期与密度进行了讨论,就解决的办法进行了探讨。

CDK4/6抑制剂在非小细胞肺癌治疗中的研究进展

由细胞周期失调和细胞周期蛋白依赖激酶(CDKs)激活导致的细胞持续增殖是癌症的标志,抑制CDKs可抑制癌症细胞的异常增殖,因此开发CDKs抑制剂是一种很有前景和吸引力的抗癌药物开发策略。在非小细胞肺癌中常见情况是由CDK细胞通路的异常调控造成的,CDK4/6抑制剂可通过阻止肿瘤细胞从G1期进入S期达到抑制肿瘤细胞增殖的效果,经过研究,CDK4/6抑制剂具有作为一种新的治疗剂的潜力且可成为一种新的治疗手段。文章对CDK4/6抑制剂在非小细胞肺癌中的研究进展,包括作用机制、药物治疗、临床研究进展及展望进行综述。

淠史杭灌区水资源优化配置的研究

通过对淠史杭灌区实时水资源供需状况的模拟运行,以及模拟运行方式的变化对灌区水资源整体供需关系的改变,优化配置出每片的供水量,评价出每个灌区片的实时水资源盈亏状态,为灌区的实时调度决策提供依据,以提高水资源利用效率。

人骨形态发生蛋白4多拷贝表达盒的构建及其表达

为了了解在毕赤酵母中人骨形态发生蛋白4基因剂量对其表达量的影响,利用毕赤酵母表达载体pAO815质粒上的2个同尾酶BglⅡ和BamHⅠ在体外构建了人骨形态发生蛋白4成熟肽序列1,3,6,9个拷贝表达盒,并对它们进行表达量研究.结果表明,在毕赤酵母中表达人骨形态发生蛋白4蛋白时,1个拷贝基因能达到最大表达量,增加人骨形态发生蛋白4基因的拷贝数并不会增加人骨形态发生蛋白4的表达量,基因拷贝数的增加反而导致人骨形态发生蛋白4在毕赤酵母中的表达水平下降.

皖西大别山区茶稻间作技术及效益分析

１９９４～１９９７年，在安徽省霍山县原种场进行茶稻间作技术研究，所得结果表明，新辟茶园５年内实行茶稻间作，由于采用施肥及地膜覆盖等措施，比单作茶园土壤肥力有所增加，夏季地面温度下降，茶园内相对湿度增加，有益于系统对光、热、水、气资源的充分利用，平均每公顷每年可产稻谷３３００ｋｇ，纯收入增加２０００元以上，对解决贫困缺粮山区群众的温饱问题具有重要意义。

种植类专业综合实践教学改革的尝试

改革开放以来，社会对人才的需求与高等农业院校种植类专业实践教学不相适应的现象日益严重，我们从１９９４年开始，深化实践教学的改革，着重于对学生知识和技能、素质和能力的培养。

毕赤酵母表达系统外源基因表达序列优化的软件设计

作为真核生物表达系统,毕赤酵母已成功表达了包括病毒、细菌和真核生物在内的多种外源蛋白。但并非所有的外源序列在毕赤酵母中都能得以高表达,外源序列含有毕赤酵母中低频密码子或是序列中A+T含量不合理是限制高表达的重要原因。根据毕赤酵母密码子使用的有关特性,利用遗传算法,建立外源基因表达序列优化的数学模型,并依此设计一套毕赤酵母外源基因表达序列的优化软件。

重组葡激酶(r-Sak)工程菌发酵工艺的研究

通过对影响重组葡激酶表达的几个主要因素的研究 ,建立了较为适宜的发酵条件 :接种量 4% ;初始 p H7.2 ;在 A6 0 0 nm=2 .5时加 2 0 %蔗糖诱导 ,诱导后 4～ 5 h收获 ,发酵液上清 r-Sak含量可达到 2 5 0 mg/L以上 ,酶活力可达到 65 0 0 RU/ ml以上 .

重组人骨形态发生蛋白4在毕赤酵母中的表达研究

试图建立人骨形态发生蛋白-4在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达技术.包括:将hBMP4成熟片段从全长cDNA亚克隆到分泌型表达载体质粒pPIC9K多克隆位点上,构建能表达rhBMP4的载体质粒pPIC9K-hBmp4.经转化Pichia pastoris宿主菌株GS115,PCR鉴定基因整合后,摇瓶培养,用甲醇诱导表达.表达上清液经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果表明rhBMP4以单体形式分泌到发酵上清液中,单体分子质量大小约为26 ku,摇瓶表达量达到20.13μg/mL.

一种简单实用的鲎试剂检测细菌内毒素法

在鲎试剂检测内毒素原理的基础上对传统的凝胶法进行改良 .经改良后的新方法与传统方法相比具有检测结果一致 ,鲎试剂用量少 ,检测时间短 ,操作误差小等优点 .

大别山区冷浸田水稻旱秧垄作栽培早熟增产的生理学基础

研究结果表明，将水稻旱育秧技术和垄作栽培技术相结合（以下简称旱秧垄作），可显著改善山区冷浸田水稻群体质量，增强群体光合性能，促时水稻生长发育和光合产物的生产、积累与分配，早熟高产，比普通栽培方法增产４７．５％。

淮北地区大穗型水稻配套高产栽培技术

为了提高淮北地区的水稻产量和种稻效益，在调查研究的基础上，选用大穗型高产优质水稻品种，采用田间试验和生产示范的方法，制定了大穗型水稻配套高产栽培技术体系，经大面积生产示范，水稻平均单产增长２６．２％，１ｈｍ２生产成本降低６２８．５元，实现了高产节本优质高效。