赖氨酸-尸胺反向转运蛋白cadB基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化

旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力,将CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中,与LDC共表达,在谷氨酸棒杆菌合成尸胺的同时,帮助尸胺转运至细胞外,解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物L-赖氨酸,但不含ldc和cadB基因,因而不能够直接合成尸胺。从E.coliK12中克隆出赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因,与绿色荧光蛋白基因gfp融合构建成融合表达载体pXBG,并转化至谷氨酸棒杆菌进行诱导表达,结果表明表达的CadB蛋白可以正确的定位于谷氨酸棒杆菌的细胞膜上。将基因cadB连接到含有赖氨酸脱羧酶基因的pXMJ19-ldc上,构建成能够共表达赖氨酸脱羧酶和赖氨酸-尸胺反向转运蛋白的重组质粒pXLB,并转化到谷氨酸棒杆菌中。

政府工作报告——2010年1月27日在武定县第十五届人民代表大会第三次会议上

各位代表,同志们:我代表县人民政府,向大会报告政府工作,请县人大代表予以审议,并请县政协委员和列席人员提出意见。

吸附-交联法固定D-泛解酸内酯水解酶的研究

选择6种吸附树脂和离子交换树脂对D-泛解酸内酯水解酶进行固定化,筛选出了固定化效果较好的大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂D-380为载体,用先吸附后交联的方法固定化。通过实验对固定化条件进行了优化,得出最佳的固定化条件为:加酶量6 U/g树脂、吸附pH 7.5、吸附时间4 h、吸附温度30℃、交联剂戊二醛终浓度0.1%、交联时间2 h。实验表明在此条件下制得的固定化酶有很好的稳定性:固定化酶在连续20次的底物水解反应后,剩余酶活达到71%。当温度达到80℃时游离酶几乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活为60%以上。游离酶的pH稳定性范围为pH 7～8,而固定化酶为pH 6.5～8.5。

政府工作报告——2008年2月18日在武定县第十五届人民代表大会第一次会议上

各位代表、同志们:现在,我代表第十四届县人民政府,向大会作政府工作报告,请予审议,并请政协委员和列席人员提出意见。一、2007年和十四届县人民政府五年来的工作回顾2007年,是本届政府任期的最后一年,也是推动经济社会发展步人科学发展轨道的重要一年。在州委、州政府和县委的正确领导下,县人民政府坚持以邓小平理论和"三个代表"重要思想为指导,认真落实科学发展观和县委的决策部署,办实事、求实效、创实绩,圆满完成了县第十四届人民代表大会第五次会议确定的各项目标任务。(一)

政府工作报告——2012年2月17日在武定县第十五届人民代表大会第五次会议上

各位代表,同志们:现在,我代表县人民政府,向大会报告工作,请各位代表予以审议,并请政协委员和列席人员提出意见。一、突出重点、狠抓落实,"十二五"实现开门红2011年是建党90周年和"十二五"开局之年。一年来,我们紧紧围绕上级党委、政府和县委的各项部署,集中精力抓落实、全力以赴促发展。

政府工作报告——2011年3月2日在武定县第十五届人民代表大会第四次会议上

各位代表,同志们:现在,我代表县人民政府,向大会报告政府工作。请各位代表连同《武定县国民经济和社会发展第十二个五年规划纲要(草案)》一并审议,并请政协委员和列席人员提出意见。

政府工作报告——2009年3月7日在武定县第十五届人民代表大会第二次会议上

各位代表,同志们:我代表县人民政府,向大会报告政府工作,请县人大代表予以审议,并请县政协委员和列席人员提出意见。一、解放思想、克难奋进,十五届县人民政府工作开局良好2008年是十五届县人民政府的开局之年。一年来,面对各种困难叠加、多重矛盾交织的复杂形势,在州委、州政府和县委的正确领导下,县人民政府紧紧团结带领全县各族干部群众,坚持以科学发展观统领经济社会发展全局,解放思想、创新举措、

根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系的建立及优化

基于根癌农杆菌介导的遗传转化方法的独特优点,研究黑曲霉转化过程中各主要影响因素,建立高效的黑曲霉遗传转化方法。构建双元载体pBI-hph,通过电转导入农杆菌LBA4404中,以黑曲霉TCCC41056为受体菌株,利用潮霉素B基因作为筛选标记,对影响转化效率的孢子悬液的新鲜程度及浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间、共培养温度这五个条件进行分析,建立根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系。实验结果表明,上述条件对黑曲霉的转化效率有较大的影响,通过优化,黑曲霉转化效率可达83个转化子/107分生孢子;整合到黑曲霉基因组的外源基因可以稳定遗传,在转接10代后遗传性能仍保持稳定,并在众多转化子中筛选得到了糖化酶活力提高18%的黑曲霉突变株。根癌农杆菌介导的黑曲霉转化体系的建立,为进一步研究黑曲霉的功能基因以及开发黑曲霉表达系统提供了有力的手段。

双顺反子翻译偶联表达载体的构建及蚓激酶基因F238在大肠杆菌中的可溶性表达

为了实现外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,利用硫氧还蛋白作为分子伴侣构建双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将大肠杆菌硫氧还蛋白基因插入到pET22b载体NdeI和EcoR I位点之间,同时在硫氧还蛋白编码基因的终止密码子前加入核糖体结合位点,构建成双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将蚓激酶基因F238克隆到该载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE结果表明,所表达的蚓激酶F238是可溶性蛋白。利用血纤维蛋白法对表达产物进行活性测定,重组蚓激酶F238不仅具有纤溶酶活性,而且具有激活纤溶酶原的激酶活性。该双顺反子翻译偶联表达载体的构建,为在大肠杆菌中可溶性表达外源蛋白提供了新方法。

推进民族团结进步示范县建设

习近平总书记在云南考察工作时,明确提出云南要努力成为我国民族团结进步示范区.我们要深刻理解、准确把握习近平总书记考察云南重要讲话的思想内涵、精神实质和总体要求,把“各民族都是一家人,一家人都要过上好日子”作为主线贯穿工作始终,加强和改进新形势下的民族工作,推进民族团结进步示范县建设.