白果内酯通过Nrf2/HO-1信号通路改善氧化应激所致体外血脑屏障损伤的研究

目的研究白果内酯对过氧化氢(H_2O_2)所致体外血脑屏障损伤的保护作用及其机制。方法 hCMEC/d3与HEB细胞共培养建立体外血脑屏障模型,模型分为6组:空白对照组、H_2O_2模型组(500μmol/L)、白果内酯低中高剂量组(0.2、1、5μmol/L)、依达拉奉(10μmol/L)阳性组。给予不同浓度白果内酯及依达拉奉预处理体外血脑屏障模型24 h,利用H_2O_2(500μmol/L)诱导2 h模拟氧化应激损伤。采用CCK-8法检测细胞活性,同时检测血脑屏障模型一氧化氮(NO)、还原型谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)及总抗氧化能力;考察跨内皮细胞电阻值及荧光素钠(Na-F)透过率;蛋白免疫印迹检测紧密连接蛋白(claudin-5、occludin、VE-Cadherin)和抗氧化蛋白(Nrf2、HO-1)的表达水平。结果氧化应激会引起体外血脑屏障通透性的增加,下调紧密连接蛋白表达水平。白果内酯预处理可提高内皮细胞总抗氧化能力及NO、GSH水平,降低LDH水平,维持细胞正常的电阻值及较低的Na-F的透过,同时缓解氧化应激引起的紧密连接蛋白下调,并上调Nrf2/HO-1信号通路抗氧化蛋白表达。结论白果内酯可作用于抗氧化信号通路Nrf2/HO-1保护氧化应激所致血脑屏障通透性增加。

吉林省不同种类人参UPLC-PDA指纹图谱及化学模式识别研究

目的:建立吉林省园参、移山参、林下参及野山参等不同种类人参药材的UPLC指纹图谱分析方法,为其质量评价提供依据。方法:采用Phenomenex Luna Omega-C18(100 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱;以乙腈-0.25%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.4 mL/min;检测波长为203 nm;柱温为35℃;进样量为2μL。通过相似度评价、聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘判别分析评价37批人参样品的质量。结果:建立了人参UPLC指纹图谱,筛选出24个共有峰,指认出8个成分。37批人参样品相似度为0.750~0.967;聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘判别分析结果表明37批人参样品聚成6类,并筛选出人参皂苷Rb1、Rd等5个影响分组差异较大的成分。结论:人参UPLC指纹图谱的建立和化学模式识别研究可快速鉴别并评价人参种类和质量,为人参的内在质量控制提供参考。

人参首乌提取物对多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的研究人参首乌提取物对帕金森病神经损伤的保护作用及其作用机制。方法 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶联用丙磺舒(MPTP/p)诱导建立帕金森病小鼠模型,使用不同剂量人参首乌提取物给药,免疫组织化学染色检测黑质致密区的酪氨酸羟化酶活性变化;1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)刺激损伤不同浓度人参首乌提取物预处理的SH-SY5Y细胞,MTT比色法检测细胞活力变化,荧光探针2',7'-二氯荧光素双乙酸盐(DCFH-DA)进行细胞活性氧检测。结果人参首乌提取物能显著减少帕金森病小鼠大脑酪氨酸羟化酶活性神经元的丢失,抑制MPP+引起的细胞活力下降和细胞内活性氧的产生。结论结合前期药效学的研究结果,人参首乌提取物可通过抗氧化途径保护帕金森病所致的神经元损伤。

乌参醒脑方对6-羟基多巴胺诱导帕金森病大鼠的改善作用

目的:观察乌参醒脑方(WSXN)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导帕金森病(PD)模型的治疗作用。方法:雄性SD大鼠纹状体注射6-OHDA建立PD模型,分假手术组、模型组、多巴丝肼组、WSXN(22. 5,45和90 mg·kg^(-1))剂量组。给药24 d,计算APO激发转圈频率和损侧纹状体/脑指数,测定纹状体DA含量和血清SOD、MDA和GSH-Px水平;尼氏染色观察纹状体神经元功能和免疫组化检测黑质多巴胺能神经元数目。结果:与模型组相比,WSXN各剂量组转圈频率减少;纹状体/脑指数升高、DA含量增加,神经元功能改善; SOD和GSH-Px活力上升,MDA水平下降; DA能神经元丢失减轻。结论:WSXN对6-OHDA诱导PD大鼠有一定的治疗作用,其作用可能与抗氧化应激水平、减轻纹状体损伤,减少多巴胺能神经元丢失和提高脑内多巴胺含量有关。

乌参醒脑方对缺血再灌注脑卒中大鼠的神经再生作用

目的:研究乌参醒脑方(Wushen-Xingnao,WSXN)对缺血性脑卒中大鼠的神经再生作用及其机制。方法:雄性Sprague Dawley(SD)大鼠接受大脑中动脉梗塞手术(middle cerebral artery occlusion,MCAO),灌胃乌参醒脑方提取物(30,60和120 mg·kg-1),观察记录各组动物神经行为学评分,采用外源性标记物5’-溴脱氧尿嘧啶核苷(5’-bromodeoxyuridine,5’-BrdU)和神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)进行免疫荧光标记检测梗死侧脑组织新生神经元细胞,试剂盒测定脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,免疫印迹法检测梗死侧脑组织B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:乌参醒脑方能显著改善神经行为学缺陷,降低MCAO模型大鼠脑组织MDA的含量,提高脑组织SOD和GSH-PX的活性,并显著增加梗死侧脑组织皮层区BrdU+/NeuN+阳性细胞的数目,并呈剂量依赖性。上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平,下调促凋亡蛋白Caspase-3表达水平。结论:乌参醒脑方能促进MCAO模型大鼠神经再生,该作用可能与其增加脑组织中抗氧化酶的活性、降低脂质过氧化水平、抑制神经细胞凋亡有关。