应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取 6 3份已知HLA DRB型的脐血标本 ,经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交 (RDB)基因分型 ,同时采用SSOP和PCR SSP方法进行比较。结果表明 ,所有样本用RDB方法基因分型均获得成功 ,可准确地分辨 6 0个HLA DRB等位基因 ,且结果与用SSOP和PCR SSP方法的结果完全一致。结论提示 ,RDB方法可准确地分辨HLA DRB等位基因 ,分辨率高 ,操作简单 。

1572份广东汉族人群脐血HLA分布及连锁不平衡分析

目的 总结广州脐血库中HLA分型资料,分析广东省汉族人群HLA分布特点。方法 采用单克隆板和寡核苷酸探针杂交方法对15 72份脐血检测HLA -A、B、DRB1抗原,用PCR -SSP及SBT方法对有疑问的结果进行复核。结果 共检出HLA -A抗原18种,B抗原4 0种,DRB1抗原13种,有显著统计意义的HLA -A -B单倍型有70种,扩展型单倍型(HLA -A -B -DRB1) 2 0 0种。结论 广东省汉族人群HLA分布有自身特点,与北方汉族等人群有着显著差异,与台湾人群HLA分布较为接近。

论全面加强疾控机构人事档案的管理

随着近年来疾控机构管理制度的改革,给疾控机构人事档案管理工作带来了一定的影响。因此,加强疾控中心人事档案的管理,已经成为新时期疾控机构工作全面发展必须要面对的问题。本文对此进行了分析,针对这些问题,本文论述了全面加强疾控机构人事档案管理工作的重要性。

事业单位档案管理信息化建设的方法策略

为了满足国家现代化建设的需求,我国正在积极推进信息技术的推广和应用工作,并将信息技术进行广泛的普及和应用,也因此让人们的生产生活发生了巨大的改变。在事业单位深化改革的进程中,同样注重对信息技术的广泛应用,尤其是将其和档案管理工作进行了有效整合,在减少资源投入的同时,还显著提高了档案管理的规范性和科学性。为进一步保持这样的优势,事业单位要立足实际对档案信息化建设的方法策略展开深入探究。

多重PCR用于缺失型α-地中海贫血的基因检测

为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α 地中海贫血中的临床应用 ,观察缺失型α 地中海贫血的基因分布频率 ,采用单管多重DNA扩增的方法 (M PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α 地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的 14 5例患者进行基因检测。扩增产物经 1.2 %琼脂糖凝胶电泳 ,出现 1.3及1.8kb条带者 ,提示为 SEA/αα ;1.6及 1.8kb条带者为 α4.2 /αα ;1.8及 2 .0kb条带者为 α3 .7/αα ;1.3及 1.6或 2 .0kb条带 ,提示为缺失型HbH病 ( SEA/ α4.2 或 SEA/ α3 .7)。结果表明 ,14 5例受检者中发现 10 0例 SEA/αα(6 8.9% ) ,15例 α3 .7/αα(10 .3% ) ,8例 α4.2 /αα(5 .5 2 % ) ,2例 α3 .7/ α4.2 (1.38% ) , α3 .7及 α4.2 纯合子各 1例 (0 .6 9% ) ;14例 SEA/ α3 .7(9 6 5 % ) ,2例 SEA/ α4.2 (1.38% ) ;另有 2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿。结论 :运用多重PCR技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的 α3 .7、 α4.2 、 SEA3种缺失型α 地中海贫血 ,这一技术对α 地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法。

荧光定量PCR产前快速诊断唐氏综合征可行性研究

目的建立快速高效的产前诊断唐氏综合征的分子生物学方法。方法分别在21号染色体上选取7个微卫星重复序列(SmallTandemRepeat,STR)(D21S1433,D21S1442,D21S1444,D21S1411,D21S1412,D21S1413,D21S1414)作为遗传标记,利用荧光定量PCR(QF-PCR)扩增技术及片段分析技术,对250例羊水标本进行检测,并与羊水标本染色体核型分析结果进行对比。结果250例羊水标本中,核型分析发现24例21三体,2例性染色体数目异常,24例唐氏综合征样本采用QF-PCR全部检出。224例正常羊水标本中,QF-PCR检出阴性标本223例,1例样本呈假阳性,假阳性率为0.4%,24例21三体标本中,七对引物同时检测诊断阳性率为100%。所有试验结果均在24h内得出。结论QF-PCR作为一种快速、准确、高效的分子生物学方法,对诊断唐氏综合征具有重要意义。

HLA-DRB1高分辨测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相关性分析

1998年6月至2003年7月,广州脐血库向国内21家移植中心提供非亲缘异基因脐血移植54例。本研究采用PCR产物直接测序法对HLA-DRB1进行高分辨分型(PCR-sequencing based typing PCR-SBT),并结合HLA-SSP低分辨分型结果,探讨非亲缘性脐血移植供/受者HLA-DRB1等位基因及其亚型与脐血移植GVHD发生率的关系。利用盐析或柱提法提取48例非亲缘性脐血及移植患者全血DNA,采用HLA-SBT方法分别对HLA-DRB1等位基因进行高分辨分型,并与HLA-SSP(HLA-sequencing specific primers)低分辨结果进行比较分析。结果表明:采用双盲法对48例非亲缘性脐血移植供/受者样本HLA-DRB1进行高分辨分型,结果HLA-DRB1等位基因亚型匹配全相合病例的GVHD发生率(25%)显著低于不完全相合病例的GVHD发生率(65.6%)(P=0.008)。结论:对HLA-DRB1采用高分辨分型方法在非亲缘性脐血移植HLA分型方面具有重要的临床应用价值。

多份脐血移植13例回顾性分析

为了探索成人多份脐血移植的可行性 ,对广州市脐血库 1998年 6月至 2 0 0 3年 7月提供的 13例非亲缘关系多份脐血移植进行回顾性分析。脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇 ,脐血分离、冻存、复温方法参照纽约脐血库标准及相关文献 ;多份移植脐血HLA匹配为 1 6 - 2 6位点不相合。结果表明 :1998年 6月至2 0 0 3年 7月 ,广州市脐血库向国内 7家移植中心提供非亲缘关系脐血 2 8份 ,治疗患者 13例。受者中位年龄 2 2 (8- 4 1)岁 ,中位体重 5 0 (2 1- 75 )公斤 ,2 8份脐血中TNC总输入量中位数为 2 .91× 10 7 kg。13例中 6例植入 (中性粒细胞 >5× 10 8 L) ,植入率为 4 6 .1% ,植入平均时间为 19天。 1例患者发生GVHD反应 ,1例患者发生自体恢复。生存率 4 6 .2 % (6 13)。结论 :多份脐血移植具有良好的应用前景。

浅谈新时期人事档案管理

目前在人事档案管理的过程中,信息是相关管理过程中主要的一个来源。因此就目前人事档案管理来看,人事档案是对于人才管理的一个重要工具,是识别人才的一项关键步骤。优化人事档案管理模式、更新人事档案内容、合理开发人事档案信息资源,为人力资源建设提供有效服务具有十分重要的现实意义。本文就相关人事档案管理的资料进行了研究,主要就人事档案管理过程中存在的一些问题进行探讨。

脐血库HLA匹配机率分析

对广州脐血库 1998年以来保存的 30 0 0份脐血和 10 6 0名患者进行回溯分析 ,分析患者在脐血库中搜寻非亲缘脐血的HLA匹配结果 ,以探讨患者找到适于移植的非亲缘脐血的可能性。结果表明 ,6 /6HLA全相合的患者有 119人 (11.2 3% ) ,4 /6以上相合的患者高达 992人 (93.5 8% )。其中 ,分别有 6 1.2 9% ,89.79%的患者可以找到总有核细胞 (TNC)剂量≥ 3.7× 10 7/kg ,≥ 2 .0× 10 7/kg的 4 /6以上HLA相合脐血 ,相应的体重最高者分别为 79kg和 175kg。结论 :脐血库容量在 30 0 0份以上就可以有HLA 93%的匹配率。由于不同体重对脐血TNC数量要求更高 ,广州脐血库能够满足 30 % - 80 %成人患者的需要。在为患者寻找造血干细胞移植非亲缘供者时 ,无论成人或儿童患者 ,在寻找骨髓供者的同时 ,都有必要寻找适宜的脐血供者。

54例非亲缘脐血造血干细胞移植回顾性分析

本研究对广州市脐血库1998年6月至2003年7月提供的54例非亲缘脐血移植进行回顾性分析,以研究 脐血移植的相关影响因素。脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇,脐血分离、冻存、复温方法参照 纽约脐血库标准及相关文献;选择脐血的依据是HLA相合程度及有核细胞数量。结果表明:1998年6月至2003 年7月间,库存脐血3475份,与21家移植中心合作提供脐血99份,治疗患者85例。其中同胞脐血移植11例。时 54例非亲缘关系脐血移植病例进行统计分析显示,在54例受者中,恶性病患者43例,占79.6％,非恶性病患者11 例,占20.4％,受者中位年龄9.5(1.2-33)岁,中位体重27(10-60)公斤,TNC中位输入量6.82×107／k异,移植后 60天植入43例(ANC>500／μl的中位时间为17天),植入率为79.6％。脐血移植有核细胞重建时间与输入的有 核细胞数以及疾病类型相关,同HLA相合程度不相关。急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率为21.6％,慢性GVHD发生率 为5.4％。6例患者出现自体恢复(11.1％)。存活率42.6％。结论:非亲缘性脐血造血干细胞移植尤其在治疗小 儿白血病方面具有良好的应用前景。

改良盐酸胍法提取脐血DNA用于HLA基因分型

为了比较经典的盐酸胍(Gu·HCl)抽提DNA法和改良盐酸胍抽提DNA法在提取脐血DNA的效果,探讨这两种方法在脐血组织相溶性抗原(HLA)基因分型中的应用,使用盐酸胍抽提DNA法和改良盐酸胍抽提DNA法提取72例脐血标本的DNA,并分别测定其DNA的浓度和纯度,采用序列特异性引物聚合酶反应方法(PCR-SSP)比较这两种方法所提取的DNA。结果表明:两种方法提取脐血DNA均获成功;根据对DNA的质量监测发现,用改良盐酸胍抽提DNA在质量上较盐酸胍法好;用于HLA基因分型时,改良盐酸胍抽提DNA法可减少非特异性条带的出现。结论:改良盐酸胍抽提DNA法不但操作简便,成本下降,而且在最少血量中能提取出高纯度的DNA,减少非特异性条带的出现。该法完全可以满足脐血库的日常脐血样品DNA的提取以及脐血HLA基因分型的要求。

脆性X染色体综合征快速筛查的聚合酶链反应技术

目的 建立一种简便的筛查脆性X综合征的聚合酶链反应 (PCR)方法。 方法 提取 76例原因不明的智力低下男性患儿外周血DNA ,用PCR扩增FMR1基因的三核苷酸重复序列。 结果 96 1% (73/ 76 )的标本PCR反应出现产物 ,条带大小为 4 0 0～ 5 0 0bp ,相当于三核苷酸重复次数 2 0～ 30 ;3 9% (3/ 76 )PCR反应无产物 ,其中 2例被证实为脆性X综合征患者。 结论 该方法简便、快速、价廉 ,可用于高危人群的快速筛查。

脆性X综合征的快速PCR筛查

目的 建立一种简便、快速、经济的脆性X综合征基因筛查PCR方法。方法 通过提高预变性温度联合应用betaine扩增FMR1基因的三核苷酸重复序列。结果 本方法扩增正常等位基因效率高 ,重复性好。结论 该方法简便、价廉 ,可用于高危人群的快速筛查。

HLA测序技术在非亲缘性脐血移植应用价值探讨

1998年6月至2004年7月,广州脐血库向国内21家移植中心54例患者提供了非亲缘性异基因脐血。为了探讨非亲缘性脐血移植供/受者HLA等位基因及其亚型与脐血移植GVHD发生率的关系,对54例非亲缘性脐血移植病例中,半年后有反馈随访资料的48例,利用盐析或柱提法提取移植的非亲缘性脐血的DNA及移植病例的全血DNA,采用HLA-SBT方法分别对HLA-A、B、DRB1位点进行了高分辨分型,并与我库脐血收集常规采用的HLA-SSP(HLA-Sequencingspecificprimers)低分辨结果进行了比较分析。结果发现,HLA不合位点不多于2个和HLA不合位点不少于3个的病例GVHD的发生率具有统计学显著性差异(P<0.05)。在对HLA-A、B、DRB1等位基因高分辨单因素分型结果中,HLA-B和HLA-DRB1等位基因匹配全相合的病例GVHD发生率显著低于不完全相合病例GVHD的发生率(P=0.000,P=0.005)。结论:PCR-SBT技术在非亲缘性脐血移植HLA配型方面具有重要的临床应用价值。

孕妇性传播疾病高危因素评分系统模式的建立

目的通过高危因素评估，建立起我国的孕妇性传播疾病（STD）的高危评分系统。方法前瞻性多中心随机抽取孕妇1656例，进行STD相关因素问卷、妇科检查及实验室检查，进行双盲检测系列STD、Cox比例风险模型等多项统计学处理。结果6种主要STh的总患病率为20．9％（346／1656），发病率首位是沙眼衣原体性宫颈炎，为19．1％（316／1656）。建立了STD高危因素评分模式三三分制。用该模式验证346例STD孕妇，其敏感性与特异性均大于60．0％（分别为61．7％与67．3％），优于国外模式。结论三三制STD高危因素评分模式轻国外多分制评分简便易行，更切合我国国情。

实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的 探讨快速诊断唐氏综合征的检测方法 .方法 采用实时荧光定量PCR技术 ,检测唐氏患者 2 3例、正常人 33例 ,定量分析比较ΔCt值 .结果 正常组和唐氏组ΔCt值有显著性差异 (p <0 .0 0 1) ,并建立了相应的参考值范围 .结论 实时荧光定量PCR具有简单、快速、特异性高等优点 。

佛山地区胎儿NT厚度、孕妇年龄与胎儿染色体异常的关系研究

目的探讨佛山地区胎儿颈项透明层(NT)厚度及孕妇年龄与胎儿染色体异常的关系。方法回顾性分析24856例胎儿产前超声筛查数据,记录、分析胎儿NT厚度、头臀径(CRL)、孕妇年龄及产后随访结果等信息。从NT厚度<1.5 mm到NT厚度>4.0 mm,以每0.5 mm作为一个区段,观察不同NT厚度区段胎儿染色体异常的发生情况;从年龄<20岁到年龄>40岁,以每5岁作为一个区段,观察不同孕妇年龄区段胎儿染色体异常的发生情况。结果 24856例胎儿,其中24720例胎儿(99.45%)娩出正常, 136例胎儿(0.55%)发现染色体异常。正常胎儿NT厚度平均值为1.39 mm,中位数为1.30 mm;CRL平均值为61.80 mm,中位数为62.00 mm;孕妇平均年龄为28.58岁。染色体异常胎儿NT厚度平均值为1.98 mm,中位数为1.60 mm;CRL平均值为60.05 mm,中位数为60.00 mm;孕妇平均年龄为31.21岁。胎儿NT厚度随着CRL的增加而有所增加,但基本不会影响NT增厚的判断标准。胎儿NT测量值不随孕妇年龄的变化发生显著变化。胎儿染色体异常的发生率明显随着孕妇年龄的增加而增长,当孕妇年龄>35岁后,胎儿染色体异常的发生率>1%。当NT厚度≥2.5 mm时,胎儿染色体异常发生率会明显增加,接近9%,而<2.5 mm时,发生率≤0.5%。可见在本地区NT厚度≥2.5 mm可以作为胎儿染色体异常的较好指标。结合孕妇年龄和NT厚度可以更好的检出胎儿唐氏综合征。孕妇年龄≥35岁胎儿唐氏综合征检出率为0.64%,胎儿NT厚度≥2.5 mm胎儿唐氏综合征检出率为3.18%,孕妇年龄≥35岁、NT厚度≥2.5 mm胎儿唐氏综合征检出率为13.43%。结论 NT厚度随着孕周增加而增长,但基本不随孕妇年龄增长而增加。本地区胎儿染色体异常发生率随着孕妇年龄的增长而增加,年龄>35岁的孕妇胎儿发生染色体异常的几率>1%。NT厚度>2.5 mm应当作为胎儿染色体异常的切割值,大于该值的胎儿发生染色体异常的几率远高于正常值范围的胎儿。结合孕妇年龄和胎儿NT厚度可以更好预测胎儿染色体异常。

NGS panel与全基因组SNP芯片在胚胎植入前地贫检测中的应用比较

目的比较NGS panel与全基因组SNP芯片对胚胎植入前地贫的检测性能。方法以胚胎植入前地中海贫血诊断国家参考品为对象,采用NGS panel靶向捕获致病区域SNP位点并进行文库构建,illumina-Miseq平台测序;同时采用全基因组SNP芯片(CytoSNP-12,v2.1)进行杂交检测,iScan芯片平台扫描,最后均在嘉宝仁和公司PGXCould平台进行信息学分析。结果两种试剂在国家参考品HBA基因上游2 Mb范围及HBB基因上下游2 Mb范围内均获得2个以上有效位点,但均未在HBA基因下游0~1 Mb范围内检测到有效位点。在HBA基因下游1~2 Mb范围内,除CNGB030015样本两种方法均未获得有效位点外,NGS panel在其它样本上获得的有效位点数总体多于芯片法,且部分样本中还检测到了STR位点;两种试剂均可实现HBA和HBB基因4个家系单体型构建,但CytoSNP-12(v2.1)对于1号家系HBA基因致病性判断存在风险。结论针对地贫国家参考品,两种试剂均能够对HBB基因致病性做出判断,但针对HBA基因的致病性判断,芯片方法在部分家系中存在一定风险。

多参数流式细胞术在儿童急性B淋巴细胞白血病微量残留病检测中的应用

目的:探讨多参数流式细胞术在儿童急性B淋巴细胞白血病微量残留病检测中的应用价值。方法:基于初诊儿童急性B淋巴细胞白血病相关的免疫表型,采用四色流式细胞术、CD45/SSC和CD45/CD19双参数散点图设门,以CD19-APC/CD45-PerCP/CD10-FITC/CD34-PE为主的抗体组合检测53例68份完全缓解后儿童急性B淋巴细胞白血病的微量残留病细胞。结果:53例初发儿童急性B淋巴细胞白血病检测出18种白血病相关的免疫表型,98.11%患儿存在CD45、CD10、CD19、CD34表达量的异常。12例存在0.012%～0.55%的白血病细胞,为微量残留病阳性,5例保持初诊时的免疫表型异常,7例发生免疫表型变化,占58.33%,只用CD19-APC/CD45-PerCP/CD10-FITC/CD34-PE一组抗体组合发现10例微量残留病阳性(83.33%)。结论:根据儿童急性B淋巴细胞白血病初诊白血病相关的免疫表型,用CD19/CD45/CD10/CD34为主的抗体组合能够有效监测微量残留病。