慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系。方法检测76例慢性乙型肝患者血清及肝组织外周血HBsAg,HBeAg和HBVDNA水平,常规病理和肝组织内的HBsAg,HBcAg。结果外周血中HBeAg阳性的患者中有91·49%HBVDNA阳性,而在HBeAg阴性的患者中,有58·62%的患者HBVDNA阳性,只有慢性乙型肝炎轻度患者的血清HBVDNA水平与其他各组差异有显著性(P<0·05),而其余各组之间HBVDNA的复制水平均无明显差异,中度以上的血清HBVDNA多呈高水平分布。所有样本肝组织的HBsAg均为阳性,从肝组织不同HBsAg表达强度下,HBcAg表达的趋势来看,HBcAg有随着HBVDNA量的增加而表达增强的趋势。结论患者血清HBVDNA水平的变化可以反映HBV的复制水平而不能反应肝脏损伤程度。同时肝组织内的HBsAg检测更适合于低水平HBV感染的患者。

4种引起慢性感染的肝炎相关病毒的流行病学研究

目的 了解HBV ,HCV ,HGV和TTV等 4种病毒在当前预防模式下的流行情况。方法 收集 9种人群共 616份的血清标本 ,采用EIA检测 4种病毒的抗原或抗体 ,PCR方法检测 4种病毒的核酸 ,并进行纵向与横向比较分析。结果 HBV ,HCV ,HGV和TTV在健康人群中均能检出 ,现行感染率分别为 13 3 % ,0 8% ,0 8%和 2 5 %。在献血员和骨髓移植供体人群中 ,未检出HBV现行感染和HCV感染。在其他各人群中 ,除血液透析患者外 ,HBV总感染率和现行感染率均约高于HCV ,HGV和TTV相应感染率的 5～ 2 0倍。 47 6%急性肝炎由HBV感染引起 ,未发现急性丙型肝炎患者。在有肝功能损害人群中 ,HBV为主要感染病毒 ,其次为HCV ,而HGV和TTV则主要表现为其他肝炎病毒重叠感染。结论 HBV感染仍是各人群中主要流行病毒和引起肝功能损害的主要病原体 ,是今后肝炎病毒感染防治的重点。

婴儿黄疸与CMV感染的关系及其治疗

目的 :探讨婴儿肝炎综合征及胆道闭锁与CMV感染的关系及其治疗方法。方法 :采用回顾性调查方法 ,对 38例婴儿黄疸患儿的临床与CMV感染的关系及其治疗情况进行分析。结果 :38例婴儿黄疸患儿中CMV感染率为5 0 0 % (19 38) ,高于 40例非黄疸婴儿中的CMV感染率 (7 5 % ;3 40 ) ,P <0 0 0 1;2 9例婴儿肝炎综合征中CMV感染率为 44 8% (13 39) ,与 9例临床诊断为胆道闭锁病儿的CMV感染率 (6 6 6 % ;6 9)比较无统计学差异 ,P >0 0 5。本组由99mTC -EHIDA肝核素扫描诊断为胆道闭锁的 9例病儿 ,经内科保守治疗的有效率达 88 8% (8 9)。结论 :CMV感染是婴儿肝炎综合征及胆道闭锁的重要原因 ,胆道闭锁可能是婴儿肝炎综合征进一步发展的结果 ;部分经99mTC -EHIDA肝核素扫描诊断为胆道闭锁的病儿 。

体检发现谷丙转氨酶升高人群中检出TT病毒

目的：了解新型肝炎病毒—ＴＴ病毒在中国的流行情况，探讨其核酸变异性。方法：收集１９例健康体检发现谷丙转氨酶升高者的血清标本，采用ＰＣＲ方法检测ＴＴ病毒的ＤＮＡ。所得ＰＣＲ产物再采用限制性片段长度多态性分析和ＤＮＡ序列分析方法进行验证。最后将测序结果与ＧｅｎＢａｎｋ中的一些分离株进行比较，分析它们的同源性。结果：１９例转氨酶升高者中，２例ＰＣＲ检测呈阳性反应，其产物经限制性片段长度多态性分析证实为特异性产物。ＤＮＡ序列分析显示，２个阳性产物间的核酸同源性为９８７％，与Ｔａｋａｈａｓｈｉ等分离株和Ｏｋａｍｏｔｏ等分离株相比，同源性分别为９８７％和８９２％。两个ＴＴＶＤＮＡ片段中均存在精氨酸取代丝氨酸变异。结论：在中国广东人群中存在ＴＴ病毒感染，其核酸序列与Ｔａｋａｈａｓｈｉ等在日本得到的分离株高度同源。因而，设计ＰＣＲ引物时宜选择Ｔａｋａｈａｓｈｉ等分离株为标准。精氨酸取代丝氨酸变异的意义需进一步研究。

慢性乙型肝炎发生致死性肝衰竭的病因研究

乙型肝炎病毒(HBV)感染患者,部分发生肝功能异常,甚至致死性肝衰竭.如果弄清慢性乙型肝炎病程中出现致死性肝衰竭的相关病因,就可设法采取预防措施,以降低慢性乙型肝炎的死亡率.最近报道,部分慢性乙型肝炎患者发生肝病活动或肝衰竭与重叠其他嗜肝病毒感染有关[1-7],也可见于HBeAg至抗-HBe的血清转换期[8-12].为此,我们探讨了142例慢性乙型肝炎病程中发生致死性肝衰竭时其他嗜肝病毒重叠感染和HBeAg和抗-HBe血清学状态的情况,试图找出部分相关病因.

引物长度不对称PCR技术制备单链DNA探针

目的 建立引物长度不对称PCR制备单链DNA探针技术 ,评价单链探针进行斑点杂交的优越性。方法 设计 1对引物 ,其中 1条引物长度为 34bp ,复性温度为 75 2℃ ,另 1条为 2 0bp ,复性温度为 5 5 7℃。首先以 5 2℃的复性温度进行双向对数扩增 ,获得一定数量的双链DNA ,再以 72℃的复性温度进行单向扩增 ,获得单链DNA片段。以含HBVS基因片段的质粒为模板 ,在PCR体系中加入地高辛标记核苷酸直接制备探针 ,并收集 4 0份乙型肝炎患者的血清进行斑点杂交检测。结果 采用引物长度不对称PCR可成功地制备出单链探针且重复性好。对 4 0份乙型肝炎患者血清进行斑点杂交检测 ,HBVDNA检出率为 4 0 %。双链探针和单链探针的检出率一样 ,但单链探针的斑点更清晰 ,背景更好。结论 引物长度不对称PCR可能成为制备单链DNA片段或探针的简便而有效方法。单链探针具有高效和简便特点 。

简化HBV-DNA抽提用于多聚酶链式基因扩增

采用异硫氰酸胍、柠檬酸钠、2-巯基乙醇、十二烷基肌氨酸钠作为变性裂解剂,结合水饱和酚、氯仿、异戍醇等进行快速程序式抽提血清HBV-DNA模板用于多聚酶链式(PCR)基因扩增。该提取法比一般方法简单、稳定、不易污染,抽提过程可在lh内完成。PCR应用结果表明敏感性高于地高辛素标记探针斑点杂交法。经酶切及a-^(32)标记放射自显影鉴定PCR产物具有良好的特异性。

串联重复核酸序列构建及其杂交信号放大作用

采用交错延伸聚合酶链反应技术将含重复单位的 DNA片段拼接成 4串联重复核酸序列 ,再用重复克隆方式获得含 2 5串联重复核酸序列的重组载体。通过杂交产物直接凝胶电泳和斑点杂交等方法分析其信号放大作用。经凝胶电泳和限制性内切酶分析证实 ,2 4串联重复核酸序列构建成功 ,加上插入噬菌粒原有的 1个重复单位 ,使整个重组载体含 2 5个串联重复。凝胶电泳分析显示 ,串联重复核酸序列可与多个次级探针结合。斑点杂交分析显示 ,串联重复核酸序列可使信号放大 ,将检测的敏感性提高约 16倍。串联重复核酸序列具有较好的信号放大作用 ,克隆化后又有利于大量制备和降低成本 。

恙虫病的诊断分析与疗效观察

用变形杆菌ＯＸｋ凝集反应、找焦痂和用患者血液接种小鼠腹腔作恙虫病的诊断。结果：２２例中，变形杆菌ＯＸｋ凝集反应阳性，滴度≥１：１６０者１８例，占８１．８％；发现焦痂２１例，占９５．５％；６例患者血液接种小鼠腹腔均呈阳性。提示用这３种方法基本上可作出诊断。本组均用氯霉素作病原治疗，２１例治愈，１例死亡。

乙型肝炎病毒YMDD变异对临床病情的影响

目的 研究拉米夫定治疗乙型肝炎出现YMDD变异后对临床病情及病毒量的影响 ,以及YMDD变异与前C区变异的相关性。方法 对 13 5例曾用过拉米夫定治疗后复发的住院病例 ,按检查结果分为两组 ,YMDD变异组 61例 ,未变异组 74例 ,对两组病情诊断、病毒载量、肝功能指标 ,YMDD变异与HBeAg、前C区变异的关系进行对照分析。结果 YMDD变异与未变异在慢性肝炎 (轻度 )分别为 9.8% ( 6/ 61)与 8.1% ( 6/ 74)、慢性肝炎 (中度 )分别为 44 .3 % ( 2 7/ 61)与 48.6% ( 3 6/ 74)、慢性肝炎 (重度 )分别为 2 6.2 % ( 16/ 61)与 2 9.7% ( 2 2 / 74)、慢性重型肝炎分别为 9.8% ( 6/ 61)与 14 .9%( 11/ 74)、肝硬化分别为 4.9% ( 3 / 61)与 10 .8% ( 8/ 74) ,各组比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。两组病毒载量 <1×10 4copies/ml者分别为 1.6% ( 1/ 16)与 2 0 .3 % ( 15 / 74,P <0 .0 1)、1× 10 4～ 10 6copies/ml者分别为 9.8% ( 6/ 61)与 2 9.7% ( 2 2 /74,P <0 .0 1)、≥ 1× 10 7copies/ml者分别为 88.5 % ( 5 4/ 61)与 5 0 .0 % ( 3 7/ 74,P <0 .0 1)。肝功能 6项指标中ALT、ALB、A/G、TBIL对比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,AST、PTA对比差异显著 (P <0 .0 5 )。YMDD变异组中HBeAg阳性率 68.9% ( 4 2 / 61) 。

83例静脉药瘾者的TT病毒感染状况

调查静脉药瘾者中TT病毒（TTV）的感染状况。方法：在TT病毒开放读码框（ORF）1保守区设计引物，建立巢式PCR，检测83例静脉药瘾者和105名献血员血清中TTVDNA。结果：83例静脉药瘾者中33例TTVDNA阳性，阳性中为40％，而献血员的阳性率为11％（P＜0．05）、结论：静脉药瘾者是TT病毒感染的高危人群，不洁注射是感染TT病毒的重要途径。

肝炎肝硬化患者TNF-α和IL-6水平的变化及其临床意义

目的：探讨肝炎肝硬化（ＨＣ）患者体内肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和白细胞介素６（ＩＬ６）水平对细菌感染的诊断价值。方法：用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测了４１例ＨＣ患者血清和腹水ＴＮＦα和ＩＬ６的水平。结果：ＨＣ合并感染组血清ＴＮＦα和ＩＬ６的水平均显著高于正常对照组和无合并感染组（Ｐ＜０．０１），死亡／恶化组患者血清ＴＮＦα和ＩＬ６水平显著高于好转组（Ｐ＜０．００５和Ｐ＜０．００１）。合并自发性细菌性腹膜炎（ＳＢＰ）患者的腹水ＩＬ６水平显著高于无合并ＳＢＰ患者（Ｐ＜０．００１）。以腹水ＩＬ６≥１２００ｎｇ／Ｌ作为阳性，则ＳＢＰ和无ＳＢＰ两组间的阳性率有极显著性差异（Ｐ＝０．０００）。这一检测方法的灵敏性为８７．５％（７／８），特异性为９２．８％（１３／１４）。结论：ＨＣ患者血清和腹水ＴＮＦα和ＩＬ６的检测对判断感染的存在和预后有一定的临床实用价值。

HBV—DNA不同模板制备进行多聚酶链基因扩增

本文采用 4.2mol/L异硫氰酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.1mol/L2一巯基乙醇,0.5%(W/V)十二烷基肌氨酸钠作为裂解液进行一步法程序式抽提血清标本HBV—DNA模板用于多聚酶链基因扩增.该法与常规DSD抽提法及微量直接法进行比较,具有方法简单、稳定、不易污染且敏感性高.抽提过程可在1个小时内完成,经酶切及a^(32)P标记探针放射自显影鉴定PCR产物具良好特异性,该法尤其适应于大量临床标本的检测,值得推广使用.

等位基因特异性PCR检测HBV G1896A变异的缺陷和改进

目的 :探讨AS PCR检测HBVDNA前C区点突变 (G1896A)的缺陷和改进方法。方法 :采用单管双复性温度方案进行AS PCR检测。以不同浓度的HBV野生型和G1896A突变型重组质粒DNA为模板和不同扩增条件分析AS PCR的缺陷。收集 10 0例HBsAg阳性 /HBeAg阴性患者和 60例HBsAg阳性 /HBeAg阳性患者的血清 ,根据荧光定量PCR的检测结果 ,调整血清中的HBVDNA含量 ,采用AS PCR比较检测调整前后的差异 ,探讨AS PCR的改进办法。结果 :AS PCR检测质粒DNA时显示 ,野生模板数量较大和特异性扩增循环次数过多时易出现假阳性 ,而特异性扩增循环次数过少时检测的敏感性下降。在检测血清标本时 ,HBeAg阳性患者和血清HBVDNA含量高的HBeAg阴性患者易出现假阳性。调整HBVDNA含量后 ,AS PCR的这种假阳性可以消除。改进AS PCR检测血清标本显示 ,在HBeAg阴性患者中 ,血清HBVDNA含量高的G1896A变异检出率显著低于HBVDNA含量较低患者 (P =0 .0 192 )。结论 :AS PCR存在其特异性受野生型原始模板数量影响的缺陷 ,不适用于检测原始模板数量未知、非均一、且波动较大的临床标本。调整标本中的原始模板数量可提高AS PCR检测慢性乙型肝炎患者血清中HBVG1896A变异的特异性。G1896A变异不是HBsAg阳性

恙虫病立克次体的液氮保存

用恙虫病立克次体感染小鼠使其产生腹水，取腹水原液与部分提纯的恙虫病立克次体悬液加或不加二甲基亚砜、采用四级或二级降温方法作液氮保存，并分别于保存１、３、６和１２个月后取出作形态观察及感染小鼠能力测定。结果证明恙虫病立克次体经液氮保存１年后仍具有对小鼠的感染能力。其中以腹水原液，加二甲基亚砜，采用二级降温法作液氮保存效果较好。采用液氮保存恙虫病立克次体具有节时省物、可靠程度高的优点，为对恙虫病立克次体的生物特性和恙虫病的预防。

脑脊液新型隐球菌密度的检查——附18例检查结果

目的：探讨检查脑脊液新型隐球菌密度的较佳方法。方法：对送检的１８例隐球菌性脑膜脑炎患者的脑脊液标本分别进行墨汁涂片镜检与抗酸染色镜检，算出脑脊液新型隐球菌密度，对两种方法的结果作配对ｔ检验。结果：墨汁涂片镜检明显优于抗酸染色镜检，两组间的差异有显著性意义（ｔ＝２．４１，Ｐ＝０．０２１６）。

慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染

研究45例慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染。病例均为后发抗HCV阳性的慢性HBsAg携带者,无先抗HCV阳性而后HBsAg阳性的个案,这可能反映HBV和HCV两种病毒感染的先后次序、不同传播方式及HBV对HCV易感性的增进作用。用RT-PCR检出30/45例血浆HCV RNA阳性,不仅确证HCV重叠感染诊断,还证实HCV复制及传染性。23/30例HCVRNA阳性者有输血史,提示输血是其获得HCV重叠感染的主要途迳。用PCR检出25/45例血清HBV DNA阳性,其中抗HBe阳性者的HBV DNA检出率为42.9％(12/18),明显低于(P<0.001)我们前文报道,提示重叠HCV感染对HBV复制有抑制作用。此外有9例抗HBe阳性者,其HBV DNA阴性但HCV RNA阳性,反映HCV可能已取代HBV成为致肝损害的主要病因。

检测HCA-RNA的RT-PCR技术改进与应用

以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T_3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)技术。应用这一技术对121例非甲非乙型肝炎患者和45例抗HCV阳性的慢性乙型肝炎患者进行了血浆HCV-RNA检测,结果阳性率分别为66.1％(80/121)和66.7％(30/45)。本文对这一技术的方法学、HCV-RNA与抗HCV的关系、血液暴露史对HCV感染的意义以及HBV与HCV的重叠感染进行了讨论。

慢性乙型肝炎出现从HBeAg至抗-HBe自发血清转换之后肝病活动性变化的探讨

目的 为了弄清慢性乙型肝炎出现从ＨＢｅＡｇ 至抗－ ＨＢｅ 自发血清转换之后，肝病的活动性是否减轻。方法 在除外重叠甲、丙、丁或戊型肝炎病毒重叠感染引起慢性乙型肝炎肝病急性发作的前提下，分别比较慢性乙型肝炎ＨＢｅＡｇ 阳性组和从ＨＢｅＡｇ 至抗－ ＨＢｅ 自发血清转换组出现肝病急性发作的严重性指标。结果 肝病急性发作的间隔时间、血清谷丙转氨酶和总胆红素水平、凝血酶原时间和死亡的发生率在慢性乙型肝炎ＨＢｅＡｇ 阳性组和从ＨＢｅＡｇ 至抗－ＨＢｅ 自发血清转换组两组之间比较没有统计学差异（ Ｐ＞ ０ ．５０ ～０ ．０５） 。结论 这些结果提示，慢性乙型肝炎出现从ＨＢｅＡｇ 至抗－ ＨＢｅ 自发血清转换之后。

重组干扰素治疗慢性丙型肝炎100例5年临床随访

目的：观察重组干扰素α－2a，α－2b抗病毒的近、远期疗效。方法：重组干扰素α－2a治疗组64例，重组干扰素α－2b组％例及对照组20例，治疗后随访5年。结果：治疗结束时，HCVRNA阴转率和血清ALT复常率α－2a组分别为67．18％和70．13％，α－2b组分别为69．14％和72．22％；随访5年后，HCVRNA阴转率和血清ALT复常率α-2a组分别为35．93%和46．87%，α－2b组分别为38.88%和50.00%，均显著高于对照组（P＜0．01和P＜0．05）。治疗组病情稳定率49．0％高于对照组（P＜0．01），病情稳定的比率又以血清HCVRNA和肝组织内HCVRNA检测明性者为高（P＜0．05）。结论：重组干扰素α－2a与α－2b均为有效的抗丙型肝炎病毒药物，慢性丙型肝炎患者干扰素治疗的早期疗效较好，但完全应答者的复发率较高。