环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞中功能及作用机制研究

目的探索环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤中功能及作用机制。方法荧光定量PCR验证环状RNA-circ-VCAN在正常胶质细胞以及胶质瘤细胞中的表达情况;核质分离实验验证circ-VCAN在细胞核质分布情况;RNase R消化线性RNA实验验证circ-VCAN对RNase R消化的抵抗能力;构建敲低环状RNA-circ-VCAN的U373和T98G瞬时转染细胞株;CCK8实验检测敲低环状RNA-circ-VCAN后细胞的增殖能力;Western blot检测NF-κB通路蛋白P-P65表达水平。结果与正常胶质细胞(HA1800)相比,环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞(尤其是在U373和T98G)中高表达,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞核质分离实验证明circ-VCAN主要存在细胞质中;circ-VCAN能抵抗RNase R的消化;CCK8实验证明敲低circ-VCAN能抑制U373和T98G的细胞增殖(P<0.05);Westernblot检测敲低circ-VCAN后的U373和T98G细胞显示NF-κB通路蛋白P-P65表达水平减少。结论在胶质瘤细胞中敲低circ-VCAN能减慢胶质瘤细胞的生长,提示circ-VCAN可能成为一个新的治疗靶点。

MiR-125a-3p通过MAPK信号通路影响胶质瘤细胞的增殖及凋亡的实验研究

目的 探讨miR-125a-3p对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响及其在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的作用.方法 (1)比较肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中565例胶质瘤组织和10例正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(2)收集中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2015年4月至2018年4月手术切除并经病理检查证实的胶质瘤标本30例,其中低级别脑胶质瘤7例,高级别胶质瘤23例.另外收集同期因手术入路需要和颅脑外伤切除的正常脑组织标本8例.应用反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(3)体外培养正常胶质细胞HA1800及人脑胶质瘤细胞U251、U373、U87、U138、T98G,72 h后应用RT-qPCR检测6组细胞miR-125a-3p的表达;(4)取对数生长期的U251、U373细胞,分为无义序列组和miR-125a-3p模拟物组,应用LipofectamineTM 2000分别转染无义序列和miR-125a-3p模拟物.转染后72 h应用RT-qPCR检测2组细胞miR-125a-3p的表达,克隆形成实验检测2组细胞的增殖情况,流式细胞术检测2组细胞的凋亡情况,Western blotting检测2组细胞凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达.结果 (1)TCGA数据库中,胶质瘤组织中miR-125a-3p的表达低于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05).(2)临床收集的正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤标本中miR-125a-3p的表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)与HA1800细胞比较,U251、U373、U87、U138、T98G细胞中miR-125a-3p的表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中U251和U373细胞中miR-125a-3p表达下降得最明显.(4)与无义序列组比较,miR-125a-3p模拟物组U251和U373细胞中miR-125a-3p的表达增加,克隆形成率降低,凋亡率增加,凋亡相关蛋白活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-3、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-7的表达均增加,磷酸化(p)-P38/MAPK蛋白的表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-125a-3p在脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞中表达水平较低,过表达miR-125a-3p可以通过MAPK信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡,其有望为胶质瘤的治疗提供新的潜在靶点.

一期双侧颞叶病灶切除术治疗双侧严重放射性颞叶损伤的临床疗效分析

目的探讨一期双侧颞叶病灶切除术治疗鼻咽癌放疗后双侧严重放射性额叶损伤的疗效及安全性。方法中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2013年1月至2017年12月采用一期双侧额叶病灶切除术治疗鼻咽癌放疗后双侧严重放射性颞叶损伤患者12例,回顾性分析患者的临床资料,比较患者术前、术后2周Kamofsky功能状态评分(KPS)变化,记录手术相关并发症和死亡情况,比较患者术前、术后3个月头颅影像学图像以评估额叶病灶变化。结果12例(100%)患者术后KPS评分均得到改善,与术前KPS评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。2例患者术后出现肺部感染,1例患者出现切口愈合不良,1例患者出现颅内感染,对症处理后均康复出院。12例患者术后均无新发神经系统症状。随访期间12例患者术后头颅MRI检査显示病灶被完整切除,脑白质病变减轻或完全消退。结论一期双侧颞叶病灶切除术治疗鼻咽癌放疗后双侧严重放射性颞叶损伤是安全可行的。

Circ-ZEB1对胶质瘤细胞生物学特性的影响

目的探讨circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭以及迁移的影响。方法分别在30例胶质瘤组织和8例正常脑组织(均来源于中山大学孙逸仙纪念医院神经外科)、胶质瘤细胞株(A172和U251)以及正常胶质细胞株(HA1800)中采用实时荧光定量PCR法检测circ-ZEB1的表达。采用si-circ-ZEB1转染A172和U251细胞以敲低circ-ZEB1。按照si-circ-ZEB1的种类分为si-1组和si-2组(分别转染si-circ-ZEB1-1、si-circ-ZEB1-2),并设立对照组(siRNA-NC阴性组,转染siRNA-NC)。以CCK-8法检测circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖的影响。分别采用划痕实验和Transwell实验观察circ-ZEB1对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响。应用CircNet数据库分析评价circ-ZEB1的circRNA-miRNA的基因调控网络,以双荧光素酶报告基因实验验证circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p的互作关系。结果Circ-ZEB1在胶质瘤组织中的表达高于正常脑组织(12.16±1.31对比6.84±0.56,P=0.001);相对于低级别胶质瘤[世界卫生组织(WHO)分级为Ⅰ~Ⅱ级],高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级)组织中的circ-ZEB1表达更高(13.77±3.27对比7.50±1.82,P=0.001);且A172和U251的circ-ZEB1相对于HA1800的表达水平分别为2.91±0.30和3.32±0.20(均P<0.01)。CCK-8实验结果表明,与对照组相比,si-1组和si-2组的生长均明显受到抑制,A172细胞的增殖能力分别降低了40.0%和57.1%(均P<0.01),U251细胞的增殖能力分别降低了35.3%和48.5%(均P<0.01)。划痕实验中,si-1组和si-2组的迁移能力较对照组均明显受到抑制(均P<0.05);Transwell实验结果显示,si-1组和si-2组细胞的侵袭能力均低于对照组(均P<0.01)。CircRNA-miRNA的基因调控网络检测结果显示,circ-ZEB1可与多种miRNA相互作用,调节其表达并影响其下游蛋白的功能。双荧光素酶报告基因实验结果提示,circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p存在互作关系。结论Circ-ZEB1在胶质瘤组织和细胞株中呈高表达,下调circ-ZEB1能抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭以及迁移能力,circ-ZEB1能通过与多种miRNA相互作用而发挥其功能。

以颞叶囊性变为主的放射性脑病手术方式的探讨

目的探讨不同手术方式对以颞叶囊性变为主的放射性脑病的临床治疗效果。方法回顾性分析2010年1月至2016年12月中山大学孙逸仙纪念医院神经外科行手术治疗的56例以颞叶囊性变为主的放射性脑病患者的临床资料。其中,24例采用单纯病灶切除术(对照组);32例采用病灶切除及脑池解剖术(观察组)。根据患者的术后疗效、Karnofsky功能状态评分(KPS)、磁共振成像中病灶体积的大小及随访结果,比较两组患者的临床手术效果及预后。结果对照组中术后主诉症状完全缓解率为29.2%(7/24),观察组为71.9%(23/32),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组术后的KPS为(70.13±19.10)分,观察组为(84.16±13.47)分,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组术后的病灶体积为(32.35±20.85)cm^3,观察组为(13.31±6.44)cm^3,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者均随访1年,观察组的再次入院率低于对照组,分别为18.7%(6/32)、75.0%(18/24),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于以颞叶囊性为主的放射性脑病,手术方式除了单纯病灶切除之外,进一步解剖环池、脚间池,防止有占位效应的孤立囊腔形成,可达到更好的治疗效果。