鸡NRG4基因组及转录本结构分析

神经调节蛋白4(neuregulin 4,NRG4)是一个重要的脂肪细胞因子,在维持哺乳动物能量平衡、调节糖脂代谢和预防非酒精性脂肪性肝病中起着非常重要的作用。目前,人NRG4基因的基因组结构、转录异构体和蛋白异构体等已有深入的研究。本实验室前期研究显示,鸡脂肪组织也表达NRG4,但是目前有关鸡NRG4(chicken NRG4,cNRG4)基因的基因组结构、转录异构体和蛋白异构体尚不清楚。为此,本研究采用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)和RT-PCR(reverse transcription-PCR)等技术,系统开展了cNRG4基因的基因组和转录本的结构分析。结果发现,cNRG4基因编码区很小,但该基因却非常复杂,存在选择性转录起始位点、选择性拼接、内含子滞留、隐匿外显子和选择性多聚腺苷酸化,这导致cNRG4基因产生4种不同的5ʹUTR异构体(cNRG4 A、cNRG4 B、cNRG4 C和cNRG4 D)和6种不同的3ʹUTR异构体(cNRG4 a、cNRG4 b、cNRG4 c、cNRG4 d、cNRG4 e和cNRG4 f)。基因组结构分析发现,cNRG4基因跨越基因组21,969 bp(Chr.10:3,490,314~3,512,282),由11个外显子和10个内含子构成。与NCBI数据库中的cNRG4基因mRNA序列(NM_001030544.4)相比,本研究发现了cNRG4基因的2个新外显子和1个隐匿外显子。生物信息学分析、RT-PCR、克隆和测序分析发现,cNRG4基因能编码3种蛋白异构体(cNRG4-1、cNRG4-2和cNRG4-3)。本研究为进一步开展cNRG4基因的功能和调控研究奠定了基础。

鸡PPARγ基因转录本5的两个上游开放阅读框功能分析

前期研究发现,鸡PPARγ基因转录本5(c PPARγ5)的5’非翻译区(5’untranslated region,5’UTR)存在两个上游开放阅读框(uORF1和uORF2)。为揭示这两个uORFs在鸡PPARγ基因表达转录后调控作用,试验使用报告基因、定点突变、q RT-PCR和Western blot等技术,分析两个uORFs对报告基因活性及PPARγmRNA和蛋白表达的影响。结果表明,与野生型相比,uORF1和uORF2分别突变和同时突变均显著促进报告基因活性及PPARγm RNA和蛋白表达(P<0.05)。mRNA稳定性分析发现,两个uORFs突变对报告基因mRNA稳定性无显著影响。启动子活性分析发现,c PPARγ的5’UTR区具有启动子活性。研究结果表明,cPPARγ5的两个u ORFs抑制其翻译。

鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区启动子活性鉴定与分析

文章采用基因定点突变和报告基因技术作A/T富集区启动子鉴定和转录调控分析,研究鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区是否具有启动子活性。PromPredict预测分析提示miR-17-92基因簇上游-388^-444 bp处可能是启动子区域。转录因子结合位点分析发现,A/T富集区存在3个E2F1潜在结合位点,分别位于miR-17-92基因簇上游-1 273 bp(结合位点1)、-1 186 bp(结合位点2)和-753 bp(结合位点3)处。报告基因活性分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区具有启动子活性,其中miR-17-92基因簇上游-440/-1区域启动子活性最强。共转染分析显示,转录因子E2F1极显著抑制该A/T富集区启动子活性(P<0.01);进一步定点突变分析表明E2F1通过E2F1结合位点1和2抑制A/T富集区启动子活性。报告基因分析发现,与对A/T富集区启动子作用不同,E2F1促进miR-17-92基因簇宿主基因(MIR17HG)启动子活性。文章首次发现鸡miR-17-92基因簇上游存在一个新的转录调控区,对揭示鸡miR-17-92基因簇转录调控具有重要意义。

鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的甲基化及其功能分析

为研究鸡脂肪组织miR-17-92基因簇宿主基因(MIR17HG)启动子的甲基化情况,实验以东北农业大学高、低腹脂双向选择品系肉鸡为实验材料,采用Sequenom MassARRAY法检测鸡腹部脂肪组织MIR17HG启动子区CpG岛的甲基化;利用CpG甲基转移酶处理MIR17HG启动子片段,采用报告基因技术检测DNA甲基化对MIR17HG启动子活性的影响。结果表明:高、低脂鸡脂肪组织中MIR17HG启动子区都存在一定程度的甲基化,其中2周龄低脂鸡脂肪组织MIR17HG启动子区的整体甲基化程度显著高于高脂鸡(P<0.05),4个CpG位点(25、26、27、28)的甲基化在高、低脂鸡脂肪组织间差异均显著(P<0.05);3周龄高、低脂鸡脂肪组织中MIR17HG启动子区的甲基化程度无显著差异(P>0.05);7周龄低脂鸡脂肪组织MIR17HG启动子的2个CpG位点(41和42)的甲基化程度显著低于高脂鸡(P<0.05)。总体看,高、低脂鸡脂肪组织MIR17HG的启动子甲基化随年龄增长呈下降趋势;体外甲基化分析发现,DNA甲基化抑制MIR17HG启动子活性。

GC联合GC-MS测定果蔬汁中11种有机磷农药的残留量

建立了气相色谱仪(GC)与气相色谱质谱联用仪(GC-MS)结合测定果蔬汁中11种有机磷农药残留量的分析方法。优化了样品前处理方法,同时优化了GC与GC-MS分析条件。样品以乙酸乙酯提取,添加氯化钠与无水硫酸镁优化萃取条件,以GCB/PSA小柱净化后供GC和GC-MS分析。该方法简便、快速、准确,11种有机磷农药在0.05~0.4 mg/L范围内,显示了良好的线性关系,相关系数均大于0.995,平均加标回收为81.29%~111.74%,回收实验的相对标准偏差(RSD,n=6)在1.9%~8.6%之间。

配制酒中甲醇含量检测方法及色谱条件优化

为了提高配制酒中甲醇含量测定的精密度和准确度,减少分析过程对仪器的损耗,降低分析成本,提高测试效率。文章通过比较不同前处理手段对检测结果的影响,优化色谱条件,采用毛细管色谱柱法、内标法对甲醇进行定性定量,发现蒸馏法有效减少了杂质峰的出现,能有效减少仪器损耗。本方法方法精密度高,RSD为0.0032,甲醇于79.2~1584 mg/L之间有良好的线性关系,相关系数为0.99996,回收率在89%~92%之间,适用于配置酒中甲醇含量检测。

浅谈民航通信网架构及运用

由民航局牵头,计划采用成熟而先进的技术构建一个能覆盖整个民航系统的(包括空管、各航空公司、各地方机场)、支持各类综合业务应用的,可靠、安全的高效宽带通信网络。民航局指定由民航局空管局负责网络设计,以及网络建成后的运维、管理和监控。2014年,最终批复同意项目的立项,并把新的网络正式命名为“民航通信网”。

Oracle 1g在航空电报和信息交换系统中的应用与维护

随着国民经济的持续增长,我国民航业目前处于一个快速增长的时期。保证民航业安全快速增长,同时提高工作效率和减轻工作负担是所有从业人员共同的目标。对于航空信息交换而言,如何提高航空电报的处理和存储的及时性、准确性和可靠性成为这项工作中亟待解决的问题。随着机场航班流量的增加和航空电报数量的增加,航空电报和信息交换系统越来越复杂,数据存储由以往的文件方式发展到如今的数据库方式,这对我们的工作提出了新的要求。为此,本文就北京航管科技有限公司的DMHS-H航空电报和信息交换系统中Oracle 11g数据库的应用和维护做一些浅显探讨。

丹参药材中丹参酮ⅡA的提取工艺优化及研究分析

建立了乙醇-乙醚浸提法提取丹参药材中丹参酮ⅡA的工艺,并采用液-液分配法对提取液进行纯化,高效液相色谱测定丹参酮ⅡA的含量。通过单因素实验研究了不同因素对丹参酮ⅡA提取率的影响,并进行正交试验。优化后得出最佳工艺条件为:料液比1:25,乙醚比例20%,提取温度50℃,提取时间50 min。在此工艺条件下进行试验,丹参酮ⅡA的提取率为0.187%。优化后的方法成本低,毒性低,重复性好,操作简便,适合应用于工业化生产。

蔬菜中农药残留数据的合规分析

本文调研了部分基地种植蔬菜的农药残留数据是否符合国家相关规定,随机抽取粤港澳大湾区拓展基地送检广州海关技术中心蔬菜150份,统计蔬菜的农药残留检测数据,按照标准限量要求对检测结果进行合规分析。蔬菜中检出有残留的农药类型主要是杀虫剂和杀菌剂,包括噻虫嗪、啶虫脒、灭蝇胺、吡虫啉、虫螨腈、灭幼脲、阿维菌素、六六六、氧乐果、联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、马拉硫磷、多菌灵、腐霉利、烯酰吗啉、霜霉威、甲霜灵、丙环唑、吡唑嘧菌酯、苯醚甲环唑和哒螨灵,数据分析得知合格率达96%,仅有6例不合格。国家制定了严格的农药残留限量要求,种植基地需掌握科学正确的农药施用方法,蔬菜食用安全性总体放心。