僵蚕醇溶蛋白质的优化提取及其指纹图谱研究

为优化僵蚕醇溶蛋白质的提取工艺,并建立相应的SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)、HPLC(高效液相色谱)、FTIR(傅里叶变换红外光谱)指纹图谱。在单因素试验的基础上,利用响应面法,以提取率为响应值建立数学模型,获得最佳工艺,用SDS-PAGE、HPLC、FTIR建立僵蚕醇溶蛋白质指纹图谱。通过单因素试验考察乙醇浓度、料液比、温度、提取时间对僵蚕醇溶蛋白质提取率的影响,进而用Box-Behnken法设计4因素3水平试验,进行响应面回归分析。结果表明,僵蚕醇溶蛋白质的最佳提取工艺条件为料液比1g∶24.22mL,乙醇浓度38.73%,温度35℃,提取时间3.94 h,此时的提取率为0.5402%。用SDS-PAGE、HPLC、FTIR法建立僵蚕醇溶蛋白质指纹图谱,SDS-PAGE分析结果表明,僵蚕醇溶蛋白质分子量集中在16.7~36.2 ku;HPLC分析结果表明,主要僵蚕醇溶蛋白质的保留时间为2.048 min与3.354 min,其含量分别占总蛋白量的31.23%与32.93%;FTIR分析结果表明,僵蚕醇溶蛋白质在2927.71、1631.71、1457.24、1310.71 cm-1处有主要吸收峰。研究并建立了僵蚕醇溶蛋白质的优化提取条件,并获得了蛋白质的SDS-PAGE、HPLC、FTIR指纹图谱。

僵蚕碱溶性蛋白质的提取工艺优化及指纹图谱分析

建立稀碱法提取僵蚕蛋白质的最佳工艺,并对其进行相应SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)指纹图谱分析。单因素考察缓冲液pH值、液料比、提取时间和提取温度对僵蚕碱溶性蛋白质提取率的影响,随后以Box-Behnken组合设计响应面优化,对试验结果进行回归拟合分析,获得上述因素对碱溶性蛋白质提取率的量化关系,确定最佳提取条件,并对提取的碱溶性蛋白质进行SDS-PAGE指纹图谱分析。结果表明最佳提取工艺条件为:Tris-HCl(三羟甲基氨基甲烷盐酸盐)缓冲液pH值8.0、液料比58mL∶1g,提取温度为40℃,提取时间为205min,此时碱溶性蛋白质提取率可达2.29%。SDS-PAGE指纹图谱结果表明僵蚕碱溶性蛋白质含有29.85、27.28ku2条迁移率相近的高丰度特征性条带,分别占总蛋白量的36.37%、32.65%,同时还有78.8、69ku较高丰度特征性条带,该指纹图谱具有种属特异性。本研究建立了僵蚕碱溶性蛋白质的最佳提取工艺条件,所得SDS-PAGE指纹图谱可为僵蚕药材的分子鉴定提供参考依据。

中药材资源质量评价方法的研究进展

中药材资源是中医药的物质基础,其质量事关临床用药的安全性与有效性,其科学评价是中药产业现代化、标准化以及国际化的前提条件。中药材的性状特征、药效成分以及分子标记为迄今三类质量评价方法的主要依据。近年来,微性状鉴定及仿生识别技术的应用显著提高了基于性状特征评价中药材质量的准确性与客观性;中药指纹图谱、代谢组学技术与化学计量学的应用极大地促进了基于药效成分评价中药材质量的科学性及相应有效成分群的发现;基因组学及蛋白质组学的进展推动了分子标记的挖掘及相应分子鉴定技术的建立。上述方法学进展为中药材质量标准体系的建设和中药材资源的开发利用提供思路与借鉴。

僵蚕药材酸溶性蛋白质的分离提取及鉴定

以Box⁃Behnken组合设计进行僵蚕药材酸法提取工艺的响应面优化,并对提取物中蛋白质进行定性定量分析。结果表明:酸法工艺获取僵蚕蛋白质的最佳条件为提取温度31.8℃、提取时间3.0 h、液料比49.6∶1(V∶m)、醋酸钠缓冲液浓度0.12 mol/L,此时蛋白质提取率为5.34%。十二烷基硫酸钠⁃聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS⁃PAGE)指纹图谱结果表明,僵蚕酸溶性蛋白质主要分布于26390~31570和59130~81790区间,其中31570与27870蛋白约占总蛋白的59.9%,71700与81790蛋白约占总蛋白的24.3%。傅里叶变换红外吸收光谱(FTIR)结果表明,僵蚕酸溶性蛋白质具有特征性指纹图谱。上述结果有望用做僵蚕药材分子鉴定的依据,有助于僵蚕资源的开发利用。