小檗碱与维奈托克联用协同诱导获得性维奈托克耐药的人急性淋巴细胞白血病细胞凋亡

目的研究小檗碱(BBR)与维奈托克(VEN)联用诱导获得性VEN耐药的人急性淋巴细胞白血病RS4;11细胞(RS4;11-VENR)凋亡的作用及相关机制。方法通过将人急性淋巴细胞白血病RS4;11细胞长期暴露在VEN中获得RS4;11-VENR。基于ZIP模型评估BBR与VEN处理RS4;11-VENR的联用效果。通过流式细胞法检测两者联用对细胞凋亡率的影响。采用qRT-PCR法检测BBR与VEN处理后细胞抗凋亡蛋白基因表达水平的变化。Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达水平以及Caspase-3的剪切情况。结果细胞凋亡诱导和增殖抑制实验证明VEN对RS4;11-VENR不敏感(IC_(50)>10μmol·L^(-1)),Western blot结果表明RS4;11-VENR对比野生型RS4;11细胞存在MCL-1上调;基于ZIP模型的联用评价表明12~50μmol·L^(-1)BBR与0.1~10μmol·L^(-1)VEN协同杀伤RS4;11-VENR,流式结果显示25μmol·L^(-1)BBR与1μmol·L^(-1)VEN联用协同诱导细胞凋亡;qRT-PCR实验结果显示25~30μmol·L^(-1)BBR单独处理细胞致MCL-1、BCL-XL基因表达水平降低,Western blot结果显示BBR单独处理降低细胞MCL-1、BCL-XL蛋白水平。结论BBR与VEN联用协同杀伤RS4;11-VENR,BBR可能通过降低RS4;11-VENR的MCL-1、BCL-XL蛋白水平,增加细胞对VEN敏感性从而诱导凋亡发生。

“汗渍法”炮制对了哥王中芫花素含量及其抗氧化能力的影响

目的:比较"汗渍法"炮制前后了哥王乙醇提取物中活性/毒性成分芫花素的含量变化,以及炮制对其抗氧化能力的影响。方法:采用高效液相色谱法测定"汗渍法"炮制前后了哥王药材中芫花素的含量。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为0.2%磷酸水溶液-甲醇(梯度洗脱),流速为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长为346 nm,进样量为20μL。将SD大鼠随机分为空白组、了哥王生品乙醇提取物组(317.52 mg/kg,简称"生品组")和了哥王炮制品乙醇提取物组(317.52 mg/kg,简称"炮制品组"),每组6只。空白组大鼠灌胃等体积1.0%羧甲基纤维素钠溶液,各给药组灌胃相应药物混悬液,灌胃体积均为20 mL/kg,每日1次,连续14 d。采用酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清氧化应激指标[丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)]的含量。结果:芫花素进样检测量的线性范围为0.147~27.360μg(r=0.999 9);精密度、重复性、稳定性试验的RSD均小于3%;平均加样回收率为98.64%~98.92%(RSD<1%,n=3)。"汗渍法"炮制前后,了哥王药材中芫花素的平均含量分别为0.377 6、0.234 0mg/g。与空白组比较,生品组大鼠血清中SOD含量显著升高,CAT含量显著降低(P<0.05或P<0.01);炮制品组大鼠血清中MDA含量显著降低,SOD含量显著升高(P<0.05或P<0.01);且炮制品组MDA含量显著低于生品组,SOD含量显著高于生品组(P<0.05)。结论:经"汗渍法"炮制后,了哥王药材中芫花素的含量有所降低,且抗氧化活性增强;"汗渍法"具有一定的"减毒增效"效果。

黔产民族药骨碎补药材HPLC指纹图谱研究

目的:建立黔产骨碎补药材的HPLC指纹图谱分析方法,为完善黔产骨碎补药材质量控制评价体系提供依据。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Diamonsil-C 18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.5%醋酸水溶液,梯度洗脱;柱温为30℃;流速为1.0 mL/min;检测波长为260 nm。采用相似度分析、聚类分析和主成分分析对12批样品的指纹图谱进行分析。结果:建立黔产骨碎补药材的HPLC指纹图谱测定方法,确定了10个共有峰,12批黔产骨碎补药材指纹图谱相似度范围在0.551~0.957;聚类分析的判别距离为20时可聚为三类;主成分分析与相似度分析、聚类分析结果基本一致。结论:所构建的黔产骨碎补HPLC对照指纹图谱及其测定方法,可为骨碎补药材综合质量控制和质量评价提供科学依据。

UPLC-MS/MS分析京尼平苷酸在大鼠体内的组织分布研究

目的探讨京尼平苷酸口服给药后在大鼠各组织的分布情况。方法选取健康SD大鼠,口服给药后分别于0.5、1.5、3 h取大鼠心、肝、脾、肺、肾、胃组织,预处理后保存于-20℃。采用UPLC-MS/MS,Phexnomonex F5色谱柱(3.0 mm×50 mm,2.6μm),流动相:0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B),梯度洗脱,流速0.5 mL/min,进样量3μL。以多反应监测模式(MRM)进行负离子模式扫描,用于测定京尼平苷酸在大鼠各组织中的含量。结果口服给药后,京尼平苷酸在大鼠肝、脾、肾组织中0.5 h时药物质量分数达最大值,肺、心、胃中1.5 h时药物质量分数达最大值。在胃中药物分布较多,脾、肾中分布速度最快,肝脏中分布较低,3 h时各组织中药物质量分数明显降低。结论大鼠口服给药后,京尼平苷酸在大鼠各组织分布有较大差异,胃中分布的浓度最高,心、肝、脾、肺、肾分布浓度相对较低,这可能与该成分本身的理化性质及与药物转运体的亲和性有关。

UPLC-MS/MS法分析太子参环肽B在大鼠体内的药物代谢动力学

目的:探讨太子参环肽B静脉注射后在大鼠体内的药物代谢动力学特征。方法:建立大鼠血浆中太子参环肽B UPLC-MS/MS定量分析方法,测定太子参环肽B给药后的血药浓度,用药动学软件分析其药代动力学参数。结果:太子参环肽B在0.1~100 ng/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y=196.66X+0.6283,R=0.9993;血浆中内源性物质不影响太子参环肽B的测定,精密度、稳定性、回收率、基质效应试验的RSD均小于10%;药动学参数:C_(max)为(4082.76±892.20)μg/L,T_(max)为(0.05±0.03)h,T_(1/2)、MRT(0-1)、MRT(0-∞)分别为(9.57±2.67)、(0.90±0.27)、(1.54±0.43)h,AUC(0-1)、AUC(0-∞)分别为(701.67±19.44)、(718.02±19.77)μg/(L·h),V_(d)为(383460.70±1003.09)L/kg,CL为(27868.71±779.63)(L·h)/kg。结论:建立的UPLC-MS/MS定量分析方法准确、重复性好、简便、专属性强,可用于太子参环肽B的药物代谢动力学研究.