藏药日官孜玛通过NF-κB信号通路对小鼠乙醇性胃溃疡的胃保护作用

目的:通过灌胃无水乙醇建立小鼠乙醇性胃溃疡模型,研究日官孜玛总提物对小鼠乙醇性胃溃疡的保护作用。方法:随机将60只KM系小鼠分为空白对照组、模型组、奥美拉唑阳性组、日官孜玛总提物低、中、高剂量组,共6组每组10只。灌胃给药一周后,禁食不禁水24h,末次给药1.5h后,除空白对照组给同等体积的生理盐水外,其余五组按照体重灌胃0.1mL/10g的无水乙醇造模1h,建立小鼠乙醇性胃溃疡模型。造模1h后,取血取胃,计算乙醇性胃溃疡的损伤发生率及损伤抑制率,制备血清上层液和胃组织匀浆液,苏木精-伊红(HE)染色观察胃组织病理学变化;试剂盒检测血清中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和胃组织中丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃组织中p65、IKK-β、TNF-α和IL-1β的mRNA表达情况。结果:正常对照组小鼠胃黏膜光滑完整,无出血现象,其余各组小鼠均出现了黏膜出血、组织不同程度坏死。模型组小鼠胃损伤最为严重,表现为大块的出血面积,呈鲜红色。与正常组相比,模型对照组HE染色图表现为组织整体结构异常,黏膜层小面积坏死,黏膜下层结缔组织排列疏松,少见淋巴细胞浸润,血清中NO、胃组织中MDA、MPO及胃组织中p65、IKK-β、TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),血清中SOD水平降低(P<0.05);与模型组相比,阳性组和高、中、低剂量日官孜玛总提物给药组则表现为点状或条状出血,出血面积明显缩小、损伤发生率明显下降(P<0.05)、小鼠胃组织病理损伤有明显改善,血清、组织相关指标均出现不同程度的改善。结论:日官孜玛总提物能通过抑制NF-κB信号通路中关键基因p65、IKK-β、TNF-α和IL-1β的mRNA表达,抑制氧化应激和炎症反应,对小鼠乙醇性胃溃疡产生保护性作用。

基于网络药理学和分子对接探讨藏药唐古特乌头抗炎作用机制

目的基于网络药理学、分子对接技术及体外细胞实验验证,拟探讨唐古特乌头抗炎作用的潜在分子机制。方法文献调研并使用数据库检索并筛选得到唐古特乌头活性成分靶点和疾病靶点;交集得到共同靶点,构建protein protein interaction(PPI)网络,得出核心靶点,绘制成分-靶点-疾病网络;对共同靶点进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析;将唐古特乌头二萜类生物碱活性成分和部分核心靶点进行分子对接验证。最后基于RAW264.7细胞体外炎症模型,采用MTT法、Griess试剂盒和实时荧光定量RT-PCR等方法验证唐古特乌头醇提物的药效及机制。结果文献搜集得到唐古特乌头17种活性成分,交集得到284个共同靶点;KEGG富集得到PI3K-Akt、Ras、MAPK、HIF-1等108条通路;分子对接结果显示,唐古特乌头活性成分与对接的核心靶点均具有较高的亲和力;体外细胞炎症实验表明,唐古特乌头能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中NO的释放,减少iNOS的表达。实时荧光定量RT-PCR显示,唐古特乌头可以通过调节PI3K-Akt信号通路发挥抗炎作用。结论唐古特乌头可通过PI3K-Akt等通路发挥抗炎作用,为更好地推进其开发应用提供了科学根据。

蒙药安神补心六味丸抗抑郁作用网络药理学机制研究

目的应用网络药理学、分子对接技术、体外实验技术,预测以及验证蒙药安神补心六味丸的抗抑郁药理作用机制。方法TCMSP数据库及文献挖掘获取安神补心六味丸的活性成分,SwissTargetPrediction预测成分相关靶点信息,Cytoscape构建药材-成分-靶点网络。通过GeneCards、Drugbank、OMIM等数据库检索抑郁症靶点。STRING数据库获取蛋白相互作用关系网络信息。DAVID数据库进行GO生物过程富集分析和KEGG信号通路富集分析。Autodock vina软件进行分子对接验证。BV2小胶质细胞建立体外损伤模型,CCK-8法检测细胞活力,qPCR法检测相关核心靶点mRNA表达量。结果筛选出安神补心六味丸活性成分34个,涉及140个潜在作用靶点,筛选核心靶点59个,共涉及99条信号通路;分子对接结果显示桦木酸、豆甾醇、β-谷固醇、槲皮素等10种活性成分与AKT1、APP、ALB、MAPK3、VEGFA、MAPK1靶点均拥有良好的结合能力。体外实验结果表明,经给药后,BV2细胞活力较模型组明显上升。安神补心六味丸可调节各核心靶点mRNA的表达。结论安神补心六味丸可能主要通过羟色胺突触等信号通路以及相关核心靶点来发挥抗抑郁作用。

黄秦艽对ANIT诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤保护研究

为了探讨黄秦艽水提物(WVBF)对ANIT诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤保护作用及机制研究,将雄性C57BL/6小鼠50只随机分为5组,即正常组(NC)、模型组(MC)、阳性对照熊去氧胆酸组(UDCA 45 mg/kg)、WVBF低剂量组(WVBF 25 mg/kg)和WVBF高剂量组(WVBF 50 mg/kg).灌胃给予WVBF,连续10 d,在第7天用ANIT油溶液(75 mg/kg)一次性灌胃造模,采集血液和肝脏样品测定血生化、肝脏病理以及FXR/SHP通路相关基因水平.结果显示:与模型组相比,WVBF给药组小鼠肝脏坏死情况明显好转,炎性细胞浸润减少,血清中ALT、AST、TBA、T-Bil-V和D-Bil-V明显下降,肝脏中Fxr、Shp、Mpr2和Bsep mRNA的水平显著上调,WVBF(50 mg/kg)组Ntcp的mRNA水平显著下调(P<0.05).这表明黄秦艽对ANIT诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤具有保护作用,其机制可能与调节胆汁酸的合成、分泌、转运和重吸收有关.

不同炮制方法对川乌毒性成分的影响及其质量评价

目的:探寻川乌不同方法炮制过程中的关键点及对毒性成分的影响,建立感官评价标准。方法:按照常压煮制、常压蒸制、高压煮制、高压蒸制、切片蒸制、切片煮制6种工艺对川乌进行炮制,采用高效液相色谱法(HPLC法)对炮制过程中样品内药典中规定的新乌头碱、乌头碱、次乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱6种生物碱含量进行检测,并结合斯科维尔指数法对炮制品麻度进行分级,综合形貌特征选择最佳工艺和质量控制点。结果:6种炮制方法中双酯型生物碱总量均符合药典规定的不超过0.040%限量要求,切片蒸制、切片煮制中的单酯型生物碱总含量分别为0.064%、0.031%,不符合药典规定范围0.070%~0.15%;常压煮制、常压蒸制、高压煮制、高压蒸制的单酯型生物碱含量达到峰值的时间分别为2 h、5 h、1 h、0.5 h。川乌切片内心为暗黄或黑色,麻度等级为1或2时符合药典规定“切开内无白心,口尝微有麻舌感”。结论:最佳工艺为川乌浸泡24 h后常压煮制2 h。与生物碱含量测定结果对比,炮制过程中质量控制关键点为川乌切片内心暗黄色、麻度等级为1。

雪上一枝蒿醇提物体外抗炎作用的研究

为探讨雪上一枝蒿醇提物(EABD)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞活性和细胞凋亡,分泌的一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的影响,经LPS诱导后以不同浓度雪上一枝蒿醇提物作用于小鼠腹腔巨噬细胞,用MTT法检测细胞活性,Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡,荧光探针DCFH-DA测定活性氧(ROS),Griess法检测NO.结果表明:EABD可显著抑制LPS造成的小鼠巨噬细胞损伤和细胞凋亡,20,100μg/mL EABD干预后使小鼠腹腔巨噬细胞内ROS水平降低,剂量依赖性减少NO表达(P<0.05),说明雪上一枝蒿通过抗氧化途径发挥体外抗炎作用.

仙人掌多糖组分对大鼠脑片氧化应激损伤的保护作用

目的研究仙人掌多糖对H_2O_2所致大鼠大脑皮质和海马脑片氧化应激损伤是否有保护作用。方法大鼠离体皮质和海马脑片与2mmol·L-1H_2O_2共孵育30min造成脑片的氧化应激损伤,分别于加入H_2O_2前加入仙人掌多糖作用30min,与H2O2同时加入仙人掌多糖作用30min或在H2O2损伤之后加入仙人掌多糖作用2h。TTC染色法检测脑片活性,并检测脑片培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽(GSH)含量和总抗氧化能力(T-AOC)。结果H2O2孵育30min明显损伤大鼠海马和皮质脑片,TTC染色A490nm值下降,LDH释放增加,GSH含量和总抗氧化能力降低。加入H_2O_2前预先加入仙人掌多糖0.333和1.67mg·L-1作用30min显著抑制上述H2O2所致脑片损伤,使受损脑片孵育液中GSH含量增加,SOD活性和总抗氧化能力升高。结论仙人掌多糖能够减轻H2O2所致大鼠大脑皮质和海马脑片的氧化应激损伤,其机制可能与其增强机体的抗氧化能力有关。

蛇葡萄素对2型糖尿病大鼠NO／NOS水平及抗氧化能力的影响

目的研究蛇葡萄素对2型糖尿病大鼠的降糖作用及NO/NOS水平和抗氧化能力的影响。方法采用高糖高脂饲料饲养大鼠1个月,再一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素,建立2型糖尿病大鼠模型。观察高、低剂量蛇葡萄素对糖尿病大鼠的降糖作用,并检测各组动物血清NO/NOS及肾脏组织SOD,MDA,GSH-Px含量。结果高、低剂量蛇葡萄素均能降低2型糖尿病大鼠的血糖水平,抑制糖尿病大鼠血浆NO、iNOS水平,降低肾脏组织MDA含量,提高SOD,GSH-Px活性。与模型组比较差异显著(P<0.05或0.01)。结论蛇葡萄素能够降低2型糖尿病大鼠血糖,增强糖尿病大鼠机体抗氧化作用及抑制糖尿病大鼠血清NO/iNOS水平。

雪上一枝蒿体内外毒性研究

为观察雪上一枝蒿不同部位提取物的体内外毒性,以MTT法测定了药物在体外对Vero猴肾细胞的毒性作用,以小鼠急性毒性试验测定了药物对小鼠的口服半数致死量(LD50).结果表明:雪上一枝蒿各提取部位对Vero细胞有不同程度的毒性作用,药物浓度为500μg/mL时,氯仿、石油醚、正丁醇和乙酸乙酯提取物对体外培养24 h的细胞增殖抑制率分别为63.9%,69.7%,32.9%和18.2%.氯仿部位、石油醚部位、正丁醇部位对小鼠的经口LD50分别为37.991 mg/kg,6766.928 mg/kg和5492.337mg/kg.

维药野西瓜醇提物的镇痛作用研究

目的:研究野西瓜的镇痛作用,并探讨其作用机制.方法:体内建立福尔马林致小鼠神经性和炎症性双相疼痛、小鼠热板致痛、冰醋酸致小鼠扭体反应动物模型,观察不同实验组效果.体外以RAW264.7细胞为研究对象,探讨野西瓜醇提物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞释放一氧化氮(NO)的影响.结果:野西瓜醇提物对福尔马林所致小鼠双相疼痛反应呈剂量依赖性的抑制作用,使小鼠局部炎症组织前列腺素E2(PGE2)含量降低,延长小鼠热板痛阈值,减少醋酸致小鼠扭体次数,抑制RAW264.7细胞内NO的产生.结论:野西瓜醇提物有很好的抗炎镇痛效果,其作用机制之一可能是通过降低PGE2含量来发挥作用.

铁棒锤氯仿部位的毒-效关系研究

为探讨铁棒锤的毒效关系,提取分离其氯仿部位并采用HPLC分析其主成分,比较了该部位与铁棒锤其他活性部位的急性毒性,以热板法和扭体法考察了不同剂量铁棒锤氯仿部位对小鼠的镇痛作用.结果表明:铁棒锤不同部位对小鼠急性毒性强度差别较大,氯仿部位的毒性最强,正丁醇和石油醚部位次之,三者的LD50分别为37.514,6766.928,5492.337 mg/kg.不同剂量的铁棒锤氯仿部位均能提高小鼠热板痛阈值,呈剂量依赖性关系.20mg/kg铁棒锤60 min时的镇痛百分率为108.7%,远低于阳性对照10 mg/kg吗啡组(261.6%),但高于同剂量的铁棒锤总提物组(75.2%).不同剂量的铁棒锤氯仿部位均能有效抑制冰醋酸对所致小鼠扭体反应,呈剂量依赖性关系.20 mg/kg组的扭体抑制率为76.4%,明显高于200 mg/kg阿司匹林(50.5%)和20 mg/kg总提物组(51.0%).说明铁棒锤氯仿部位具有显著的毒性和镇痛活性呈剂量依赖性,推测其镇痛活性与毒性存在一定的关联.

莲心碱对家兔主动脉条收缩性能的影响

目的 观察莲心碱 (liensinine ,Lien)对氯化钾 (KCl) ,去甲肾上腺素 (NE)和组织胺 (Hist)所致家兔主动脉条收缩的作用。并研究其对血管条依内钙性收缩和依外钙性收缩的影响。方法 离体平滑肌实验方法。结果 不同剂量Lien及维拉帕米(Ver)对KCl,NE ,Hist诱导的主动脉条均呈抑制作用 ,并可非竞争性拮抗组胺的量效曲线 ,PD2 ′值分别为 4 31,6 89。Lien和Ver均能抑制组胺诱导的依内钙收缩 ,而对依外钙收缩作用较弱。结论 Lien可舒张兔主动脉条 ,该作用与钙离子拮抗有关 。

莲心碱对离体猪冠状动脉条收缩性能的影响

目的 :观察莲心碱 (Lien)拮抗氯化钾 (KCl) ,乙酰胆碱 (Ach)和组胺 (Hist)所致猪冠状动脉条收缩的作用。方法 :离体平滑肌实验方法。结果 :不同剂量莲心碱对KCl,Ach ,Hist量效曲线均呈非竞争性拮抗作用 ,pD′2 值分别为 4.78,3.85和4.2 5。莲心碱和维拉帕米 (Ver)均能抑制组胺诱导的依内钙收缩 ,而对氯化钙诱导的依外钙收缩作用较弱。结论 :莲心碱具有扩张冠脉的作用 。

基因芯片技术研究黄秦艽对雪上一枝蒿急性心脏毒性的作用机制

目的:利用芯片技术探讨黄秦艽对雪上一枝蒿所致小鼠心脏急性毒性基因表达的影响及分子机制.方法:25只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、雪上一枝蒿氯仿部位组(CFA)和黄秦艽水提物组(WVBF),通过表达谱对各组心脏差异表达基因进行生物信息学研究.结果:WVBF对CFA诱导的急性心脏毒性具有明显的解毒效果,染毒组与正常组相比,差异基因的功能主要涉及机体内物质的异常代谢,WVBF主要通过干扰CFA引起的内质网应激反应及线粒体功能紊乱过程,提高细胞存活率,使心肌恢复正常功能.结论:黄秦艽可以通过多条信号通路缓解雪上一枝蒿所致的小鼠心肌毒性作用.

健力生机本草菁萃安全性及补肾壮阳功效研究

目的:评价健力生机本草菁萃(JLSJ)的安全性和壮阳功效,初步探讨其作用机制。方法:安全性评价:将JLSJ按5、2.5、1.25 g/kg BW剂量(相当于人摄入量的100倍、50倍、25倍)对SD大鼠连续灌胃30天,观察各剂量组大鼠体质量、摄食量、食物利用率、血液学指标、血液生化学指标、脏器重量和脏/体比值等指标,以此判定JLSJ对大鼠有无明显毒性作用;壮阳功效实验:将SD大鼠分为正常组、阳性对照组和JLSJ低中高剂量组(0.05~0.3 g/mL),观察各组大鼠体质量、脏器指数、PEI值、阴茎勃起潜伏期、血清睾酮水平及精子活力等指标。结果:各剂量组大鼠体质量、摄食量、食物利用率、血液学指标、血液生化学指标、脏器质量和脏/体比值与阴性对照组比较,差异均无显著性意义;JLSJ各剂量组和阳性对照组与正常组相比,体质量和脏器系数增加,PEI值升高,阴茎勃起潜伏期缩短,血清睾酮水平与精子活力均升高。结论:JLSJ对大鼠无明显毒性,其壮阳功效与阳性对照药东革阿里相当甚至更好。

欣乐本草菁萃对胃黏膜损伤和肠道菌群的影响

目的:探讨欣乐本草菁萃(Xinle herb extract,以下简称XL)对无水乙醇所致大鼠胃黏膜损伤的保护作用和小鼠肠道菌群的调节作用。方法:①以SD大鼠为实验对象,随机分为正常组、模型组,低剂量组(0.033 g/mL)、中剂量组(0.067 g/mL)和高剂量组(0.2 g/mL),各给药组分别灌胃给予受试物,再用无水乙醇诱导大鼠急性胃黏膜损伤,通过解剖观察大鼠胃组织形态学及病理结构,评价XL对大鼠胃黏膜组织的保护作用;②以健康BALB/C小鼠为实验对象,随机分为对照组、低剂量组(0.033 g/mL)、中剂量组(0.067 g/mL)、高剂量组(0.2 g/mL),各给药组分别灌胃给予受试物,三周后,分组收集小鼠新鲜粪便,连续6 d,进行肠道菌群检测计数。结果:在胃黏膜损伤实验中,与模型组相比,低、中、高剂量给药组对无水乙醇所致胃黏膜损伤均有明显的减轻;在肠道菌群实验中,与正常组相比,各剂量给药组除肠杆菌数量无统计学差异外,益生菌如双歧杆菌(低、中剂量给药组)、乳杆菌(高剂量给药组)及拟杆菌(中、高剂量给药组)数量均上升,而非益生菌如肠球菌(中、高剂量给药组)则出现明显下降,梭杆菌(低、高剂量给药组)及梭菌(低剂量给药组)略有下降。结论:XL可保护无水乙醇所致大鼠胃黏膜损伤,并调节BALB/C小鼠肠道菌群。

健糖保本草菁萃辅助降血糖血脂功效研究

目的:评价保健食品健糖保本草菁萃(JTB)降糖降脂功效,初步探讨其作用机制。方法:降血糖功效评价:建立四氧嘧啶诱导的小鼠糖尿病模型,测定糖尿病模型小鼠的空腹血糖值、糖耐量、血糖曲线下面积等指标,以此来判断JTB的降血糖功效。降血脂功效评价:建立混合型大鼠高血脂模型,不禁食采血测定高血脂模型大鼠的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化型高密度脂蛋白胆固醇(Ox-HDL)、氧化型低密度脂蛋白胆固醇(OX-LDL)、载脂蛋白A1(Apo-A1)、载脂蛋白β(Apo-β)水平等指标,以此来判断JTB降血脂功效。结果:JTB对正常小鼠血糖无影响,高剂量长期给予JTB能改善糖尿病模型小鼠的血糖水平;JTB能明显提高高血脂模型大鼠血清的HDL-C、Apo-A1含量,对TC、TG、LDL-C、OX-HDL、OX-LDL、Apo-β水平无明显影响。结论:健糖保本草菁萃有一定的辅助降血糖血脂功效。

香连片抗细菌性痢疾相关疾病的网络药理学研究

通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选香连片的主要活性成分;通过TCMSP及Swiss Target Prediction数据库查找筛选其活性成分的对应靶点.收集有关细菌性痢疾相关疾病的靶点,映射至香连片活性成分靶点基因,构建活性成分-靶点网络及共同靶点蛋白相互作用网络(PPI).将共同靶基因进行GO功能富集与KEGG通路富集分析.从香连片中筛选出42个活性成分,19个与细菌性痢疾相关疾病的作用靶点;GO功能富集筛选得到生物学过程相关条目12条、分子功能相关条目5条及细胞组分相关条目6条;KEGG通路富集筛选得到8条相关通路,涉及钙信号通路、癌症通路、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路等.这表明香连片可能通过钙信号通路、癌症通路、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号等,对细胞增殖、凋亡、炎症反应等过程产生影响从而拥有抗细菌性痢疾相关疾病功能,此外预测中表明其作用还涉及多条癌症通路,可为其预防癌症研究提供一定依据.

蒙药扎冲十三味丸抗风湿炎症性疾病的网络药理学研究

目的:基于网络药理学方法探讨扎冲十三味丸中8种植物药抗风湿的作用机制.方法:通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)获取草乌、沉香、木香、甘草、丁香、诃子、肉豆蔻以及石菖蒲的化学成分,以口服生物利用度(OB)大于30%及药物相似度(DL)大于0.18为条件,结合文献研究筛选出以上8种植物药的主要活性成分;通过TCMSP及Swiss Target Prediction数据库查找筛选其活性成分的靶点.通过检索OMIM等疾病靶点数据库,收集有关风湿炎症性疾病的靶点,映射至扎冲十三味丸活性成分靶点基因,构建活性成分-靶点网络,利用STRING网站构建共同靶点蛋白相互作用网络(PPI).将共同靶基因通过DAVID数据库进行GO功能富集与KEGG通路富集分析.结果:从扎冲十三味丸的8种植物药中筛选出93个活性成分,61个与抗风湿炎症性疾病相关的作用靶点;GO功能富集筛选得到生物学过程相关条目8条、分子功能相关条目3条及细胞组分相关条目6条;KEGG通路富集筛选得到18条相关通路,涉及癌症通路、破骨细胞分化信号通路等.结论:扎冲十三味丸通过TNF、破骨细胞分化等信号通路对细胞增殖、凋亡、炎症反应和机体的免疫调节等过程产生影响而发挥治疗风湿炎症性疾病的作用.

蛇葡萄素对家兔离体回肠收缩性能的影响

目的:观察蛇葡萄素(ampelosin,AP)对多种物质诱导的家兔离体回肠平滑肌收缩的影响。方法:离体平滑肌实验方法。结果:AP和维拉帕米(verapamil,Ver)能够显著抑制回肠平滑肌自律性及,组织胺(histamine,Hist)诱导的家兔离体回肠平滑肌收缩反应,上述作用呈剂量依赖性。AP和Ver均能够抑制Hist诱导的回肠收缩反应,且其抑制作用呈剂量与时间依赖性。高、低剂量的AP及Ver能非竞争性抑制乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)所致回肠平滑肌收缩的量效曲线,PD2’值分别为2.19,6.01;低剂量的AP抑制Ach所致肠肌的依内钙收缩,但对CaCl2引起的依外钙收缩无明显影响;高剂量AP对Ach所致肠肌的依内钙收缩及CaCl2引起的依外钙收缩均有抑制作用。对照品Ver对Ach所致肠肌的依内钙收缩及CaCl2引起的依外钙收缩均有明显抑制作用,且对依内钙收缩抑制作用更为明显。结论:AP对家兔离体回肠平滑肌有较好的松弛作用。