橡胶树甲基化过滤文库的构建

为高通量富集橡胶树基因编码序列,文章首次利用大肠杆菌McrBC限制修饰系统构建了巴西橡胶树基因组甲基化过滤文库。该文库未扩增和扩增后的滴度分别为2.6×106pfu/mL和9×109pfu/mL,阳性克隆率为86.4%,插入片段大小为1～2.5kb,平均长度为1.2kb。随机挑选100个克隆进行测序,共拼接出81个非冗余序列,其中包括6个重叠群(Contigs)和75个单一序列(Singlets),冗余度为17.35%。Blast分析发现,39.5%非冗余序列与Nr库中功能基因同源,14.81%与EST数据库中序列同源,32.1%序列为未知序列,且部分序列为开花调控、抗虫和抗病等功能相关的同源基因。橡胶树甲基化文库的建立为橡胶树重要功能基因发现和克隆提供一条重要途径。

橡胶树次生体胚发生及其再生植株遗传稳定性的分子检测

以热研7-33-97花药为材料,建立橡胶树次生体胚发生和植株再生体系,主要包括初生花药体胚诱导、次生体胚发生和次生胚植株再生三个步骤。结果表明,来自花药初生异常胚和初生子叶期胚的0.2～0.3cm胚块均能成功诱导次生体胚发生,并均能获得成熟子叶期胚。以初生异常胚为外植体,每个胚块获得子叶期胚数为0.64个。以初生子叶期胚为外植体连续3次诱导次生体胚发生,随诱导次数增加,体胚发生频率先上升,后保持稳定。2,4-D对次生体胚植株再生具有明显影响,添加4.5μmol/L和9μmol/L2,4-D植株再生培养基中植株再生频率达到85.0%。AFLP检测次生体胚植株遗传稳定结果显示:(1)来自初生异常胚的次生体胚植株60.0%植株DNA发生变异;(2)来自初生子叶期胚的次生体胚植株,随次生体胚发生次数增加,检测到DNA变异植株频率由30.0%升高到52.4%。AFLP聚类分析结果显示,次生体胚植株与热研7-33-97高度相似,相似系数大于0.904。

PTC_(3)和PPM抑菌剂对橡胶树组培中常见污染菌的抑菌效果及对橡胶树次生体胚发生效率影响

以热研7-33-97橡胶树组织培养材料为试验材料,通过分子鉴定的方法确认橡胶树组织培养中常见污染源是红青霉菌。研究不同浓度植物组织抗菌剂PTC_(3)(0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0mL/L)和PPM (0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95 mL/L)抑菌剂对红青霉菌的生长抑制率,及其对橡胶树次生体胚发生效率的影响,结果表明,当PTC_(3)抑菌剂浓度为1 mL/L时,对红青霉菌有一定的抑制作用,培养2 d时和培养5 d时,对真菌的生长抑制率最高分别为18.1%、22.3%。当PPM抑菌剂浓度为0.6、0.65、0.7、0.85、0.95 mL/L时,培养2 d,对真菌的生长抑制率分别为18.6%、17.4%、17.2%、19.2%、16.3%。培养5 d时,所有抑菌剂浓度处理对真菌均没有生长抑制作用。同时发现PTC_(3)和PPM对橡胶树次生体胚发生有一定的促进作用,PTC_(3)促进效果稍好一些。