甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号传递系统的作用

为了探讨阿片肽与细胞表面受体结合后所产生的生物效应及其机制 ,用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽 ( MENK)及抗 δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞 ( NS- 1 ) ,然后测定蛋白激酶A( PKA) ,蛋白激酶 C( PKC)活性及三磷酸肌醇 ( IP3 )含量 .研究结果表明 ,NENK可升高细胞胞浆及胞膜 PKA的活性 ,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗 .MENK对 PKC影响呈双向反应 ,0 .1 μmol/L MENK可以升高胞浆 PKC活性 ,但却明显降低胞膜 PKC活性 ;在 MENK浓度为 1 0μmol/L时则情况刚好相反 .1 μmol/L的 MENK可明显降低胞浆及胞膜 PKC活性 ,抗体可拮抗这种下调作用 .MENK可降低细胞内 IP3 的含量 ,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗 .由此可以推论 :MENK在与 δ阿片受体结合后 ,可以经过多种信号传导系统来调节细胞功能 ,从而产生不同的生物效应 .

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的影响

目的:探讨甲硫氨酸脑啡肽对小鼠骨髓瘤细胞信号转导系统的作用及其机制。方法:用不同浓度甲硫氨酸脑啡肽(methionine enkep-halin,MENK)及抗δ阿片受体单克隆抗体处理小鼠的骨髓瘤细胞(NS-1),采用组蛋白磷酸化法测定NS-1细胞蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的活性,并采用放射免疫分析法测定其三磷酸肌醇(IP3)的含量。结果:MENK可升高细胞胞浆及胞膜 PKA的活性,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗。MENK对PKC影响呈双向反应,0．1μmol/ L MENK可以升高胞浆PKC活性,但却明显降低胞膜PKC活性;MENK浓度为10μmol/L时PKC 活性的改变则与此相反;1μmol/L的MENK可明显降低胞浆及胞膜PKC活性,抗体可拮抗这种下调作用。MENK可降低细胞内IP3的含量,且这一作用可被抗δ阿片受体抗体所拮抗。结论:MENK 在与δ阿片受体结合后,可以通过多种信号转导系统来调节细胞功能,从而产生不同的生物效应。

甲硫氨酸脑啡肽和抗δ阿片受体抗体对小鼠骨髓瘤细胞增殖的影响

目的:探讨甲硫氨酸脑啡肽(methionine-enkephalin,MENK)对体外培养的小鼠骨髓瘤细胞 (NS-1)增殖的作用及其机制。方法:用3H-TdR掺入法测定不同给药组细胞的增殖。结果:1μmol/ L MENK可促进NS-1细胞增殖,促进作用达109．5％,而0．1-10 nmol／L的抗δ阿片受体单克隆抗体可抑制MENK的作用。结论:抗δ阿片受体单克隆抗体能拮抗MENK促进细胞增殖的作用,提示MENK促进细胞增殖的作用可能是通过阿片受体机制所介导。

淋巴细胞存在有δ阿片肽受体的分子证据

以小鼠的成神经细胞瘤和大鼠神经胶质瘤的杂交细胞δ阿片肽受体的基因外显子Ⅲ序列为依据合成引物，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人外周血淋巴细胞ｍＲＮＡ的一片段ｃＤＮＡ，扩增产物经纯化后进行核苷酸序列测定．测序结果表明该片段与杂交瘤细胞的δ阿片肽受体基因序列相比有５个同源区，其中碱基的同源性达６３％．实验结果从分子水平表明了人淋巴细胞表面存在有阿片肽受体的可能性．

纳洛酮在细胞信号转导系统中对甲硫氨酸脑啡肽的拮抗作用

目的:探讨甲硫氨酸脑啡肽对细胞信号转导系统的影响及其机制。方法:用甲硫氨酸脑啡肽及不同浓度的纳洛酮处理小鼠的骨髓瘤细胞(NS-1),采用组蛋白磷酸化法测定NS-1细胞蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)的活性。结果:1×10-6mol／L的甲硫氨酸脑啡肽可以升高NS-1细胞胞浆PKA活性,却降低胞浆PKC活性,而且这2种作用均能被不同浓度的纳洛酮所拮抗。结论:甲硫氨酸脑啡肽通过传统的阿片受体机制参与了2条(cAMP-PKA途径及DG-PKC途径)胞外信号传递系统的信号传递。

纳洛酮在细胞信号传递系统中对蛋脑啡肽的拮抗作用

目的 :探讨蛋脑啡肽 (MENK)在细胞信号传递系统的作用及其方式。方法 :用蛋脑啡肽及纳洛酮处理小鼠的骨髓瘤细胞 (NS-1 ) ,之后测定蛋白激酶 A(PKA)和蛋白激酶 C(PKC)活性。结果 :表明蛋脑啡肽可以升高 NS-1细胞胞浆 PKA活性 ,却降低胞浆 PKC活性 ,而且这 2种作用均能被不同浓度的纳洛酮所拮抗。结论 :蛋脑啡肽通过传统的阿片受体机理参与了 2条 (c AMP-PKA途径及 DG-PKC途径 )细胞外信号传递系统的信号传递。

抗delta阿片受体单克隆抗体对蛋脑啡肽的拮抗作用

目的 :探讨蛋脑啡肽 (MENK)对体外培养的小鼠的骨髓瘤细胞 (NS-1 )增殖的作用及抗阿片受体单克隆抗体对该作用的影响。方法 :用3H-Td R掺入法测定不同给药组细胞的增殖。结果 :1 μmol/ L MENK可促进 NS-1细胞增殖 ,促进作用达 1 0 9.5 % ,而 0 .1～ 1 0 nmo1 / L的抗体可抑制MENK的作用。结论 :抗 delta阿片受体单克隆抗体能拮抗 MENK促进细胞增殖的作用 ,提示MENK促进细胞增殖作用可能是通过阿片受体机理所介导。

95例黎族的β—地中海贫血基因类型分析

本文对海南岛黎族学生1726人进行普查,采用红细胞脆性试验阳性和血红蛋白A_2增高两项指标,筛选出β—地中海贫血对象149人,占调查总人数8.6％。随机对其中95例采用PCR扩增技术与ASO探针杂交法,应用7对寡核苷酸探针B—地中海盆血CD41/42.CD17.—28.—29CD43.CD71/72和ⅣS—Ⅱ654)分析突变基因类型。其结果:β—地贫CD41/42(—TCTT)基因型杂合子90例,占基因分析总例数94.7％,—28(A→G)基因型杂合子1例,其余4例尚未清楚。根据上述分析结果,笔者认为海南岛纯系黎族人群中β—地中海贫血病的基因类型为β—地贫CD41/42(—TCTT)。这一研究结果能为黎族优生和开展β—地贫产前基因诊断提供了依据。

β—地中海贫血人群普查和基因分析方法探讨

本文探讨β—地中海贫血人群普查和基因分析的方法。采一次未梢血,完成β—地中海贫血对象调查和基因类型分析:检查项目:红细胞脆性试验(0.32％Nacl溶液,一管法),Hb微量CAM电泳、目测Hb电泳图判断HbA_2是否增高,DEAE微量柱层析法测定HbA_2含量;白细胞部分供提取DNA进行PCR扩增及ASO探针杂交基因分析。红细胞脆性试验阳性及HbA_2含量超过3.5％(疟疾高发区>4％)者为β—地中海贫血对象。将这些对象的末梢血提取DNA,做PCR扩增及ASO探针杂交法基因分析。普查军田乡黎族小学生730人,筛出β—地贫对象49人。随机用PCR—ASO法检测28例β—地贫对象,检出β—地CD41/d2(—TCTT)基因型杂合子27例,未查明1例,符合率达96％以上。非β—地中海贫血6例经PCR—ASO法检测均非β—地贫基因变异。本文对β—地中海贫血普查结合PCR—ASO基因诊断的方法进行了详细讨论。

性病淋球菌PCR基因扩增检测方法及应用

本文介绍性病淋球菌ＰＣＲ基因检测方法的研究过程．笔者设计一对对淋球菌隐蔽性质粒ｃｐｐＢ基因有专一性的引物，应用该引物进行ＰＣＲ体外基因扩增．对淋病患者的泌尿生殖道标本可检出３８０ｂＰ特异片段应用该试剂盒检测１２５例性混乱患者与细菌培养法比较，前者检出率２５．６％（３２／１２５），后者仅６．４％（８／１２５）．

受体介导甲胎蛋白促肿瘤细胞增生分子机制

甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的功能一直是个谜.由于其在胎儿体内含量很高,过去国内外学者多认为AFP的主要生理功能是参与血液的物质运输和免疫调节.但是近期研究发现AFP能抑制细胞凋亡、促进肿瘤细胞增生和具有调节新生细胞生长作用.高浓度AFP伴随胎儿的整个发育过程.人出生后AFP表达量非常低(＜20ng/L),但是当人发生肝癌及一些生殖系统肿瘤时,AFP表达量又大大升高.本项目以人肝癌Bel7402细胞、人子宫颈癌HeLa细胞等为研究对象,从以下几个方面系统地研究甲胎蛋白促肿瘤细胞增生的分子机制.

甲硫氨酸脑啡肽对猴免疫缺陷病毒早期感染引起CEM x1 74细胞凋亡的可能作用(英文)

探讨短期甲硫氨酸脑啡肽作用对SIV感染CEMx174细胞凋亡的可能作用 .用MTS法测定甲硫氨酸脑啡肽对感染CEMx174细胞存活率的影响 ,流式细胞仪分析SIV诱导细胞凋亡及其甲硫氨酸脑啡肽的作用 ,并测定了cAMP含量、PKA活性和组蛋白磷酸化的水平 .SIV能够显著减少CEMx174细胞数 ,甲硫氨酸脑啡肽可以提高感染细胞的存活率 .AnnexinⅤ结合实验显示 ,1μmol L甲硫氨酸脑啡肽可以增加存活细胞的比率 ,减少凋亡细胞数 .甲硫氨酸脑啡肽降低正常细胞和感染细胞cAMP的含量和PKA活性 ,但是在感染组较为明显 .在感染的情况下 ,磷酸化的组蛋白增加 ,甲硫氨酸脑啡肽可以减少其含量 .甲硫氨酸脑啡肽的作用可以被纳酪酮所拮抗 .研究结果提示 ,甲硫氨酸脑啡肽对SIV感染引起早期细胞凋亡的作用涉及cAMP

杭州市393名汉族献血员Tf亚型基因频率的调查

我们采用超薄层等电聚焦电泳方法对杭州市393名汉族献血员的血清转铁蛋白(Tf)的多态性进行了分析.结果表明Tf亚型的分布,C_1/C_1型占50.89%,C_1/C_2型占1.53%,C_1/C_3型占39,95%,C_2/C_2型为0,C_2/C_3型占1,27%,C_3/C_3型占6.36%.基因频率为TfC_1=0.7163,TfC_2=0.0140,TfC_3=0.2697.群体基因表型的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,经X^2检验表明,观察值与预期值极为符合(X^2=2.561,df=5,P>0.75),因此上述遗传表型的分布规律可作为杭州地区人群(汉族)的代表.

海南省71例黎、汉族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者的基因突变型分析

目的分析海南省29例汉族和42例黎族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症患者的G6PD基因突变类型。方法采用突变特异性扩增系统法筛查海南省人群中G6PD缺乏症的G1376T、G1388A和A95G三种常见突变位点；运用DNA测序技术鉴定未知突变标本G6PD基因外显子2至外显子13的基因突变类型。结果在29例汉族G6PD缺乏症患者中，发现G1376T 11例（37．9％）、G1388A 2例（6．9％）、G1376T复合G1388A突变1例（3．4％）和G1376T复合A95G突变1例（3．4％），G1376T、G1388A、A95G三种常见突变及其复合突变共占汉族G6PD缺乏症患者的51．7％；在42例黎族G6PD缺乏症患者中，发现G1376T 25例（59．5％）、G1388A 6例（14．3％）、A95G 2例（4．8％）、G1376T复合G1388A突变4例（9．5％）和G1376T复合A95G突变1例（2．4％），G1376T、G1388A、A95G三种常见突变及其复合突变共占黎族G6PD缺乏症患者的90．5％；18例（汉族14例，黎族4例）未发现G1376T、G1388A、A95G。对这18例标本的测序发现：1例G6PD内含子5第636或637位核苷酸T缺失（IVS-5 636或637 T del）突变；2例C1311T复合IVS-11 T93C突变，其余标本未发现突变。结论G1376T和G1388A是海南省人群中最常见的基因突变型；在我国人群中存在IVS-5636或637 T del突变型；在海南省黎族人群中首次报道G1376T／A95G复合突变型。

HbJWenchang－Wuming突变位点的论证

ＨｂＪＷｅｎｃｈａｎｇ－Ｗｕｍｉｎｇ突变位点的论证黄冬爱李刚陈洛夫陈历昌ＨｂＪＷｅｎｃｈａｎｇ－Ｗｕｍｉｎｇ是一种α链变异的血红蛋白。１９６４年首次发现于广西武鸣县；１９７９年再次在海南岛文昌县发现。１９８０年完成其化学结构分析证实为α链第１１位的赖...

乳糖酶在大肠杆菌中的高效表达与纯化

目的克隆并分析乳酸菌LacZ基因,构建其原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达,并纯化得到纯度较高的目的蛋白。方法采用PCR方法从乳酸菌中扩增出LacZ基因,测序和序列分析。将其克隆至克隆载体pGM-Tvector中,筛选阳性克隆后回收目的片段,将其克隆入原核表达质粒pGEX-6p-1,构建其重组表达质粒pGEX-6p-1/LacZ。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot分析鉴定,最后通过纯化得到单一的目的蛋白。结果 PCR扩增获得3024bp的LacZ基因,测序得知序列与GeneBank报道的序列一致,序列分析表明,该序列开放读码框有3024bp,推测肽链具有1008个氨基酸,蛋白分子量为114KDa,等电点为4.9。构建了重组表达质粒pGEX-6p-1/LacZ,IPTG诱导其高效表达出融合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot分析鉴定出所表达蛋白的分子量为140KD,与融合蛋白的分子量一致。最后利用Glutathione Sepharose 4B对表达产物进行纯化,得到单一的目的蛋白。结论成功地构建了乳酸菌LacZ基因的原核表达质粒,通过序列分析并诱导表达,最后纯化得到单一的目的蛋白,为进一步生产低乳糖奶奠定基础。