一类新的AP-2α转录共激活物Ku 70蛋白的鉴定

目的鉴定新的AP-2α转录共激活物,为乳腺癌的防治寻找新的靶点。方法以AP-2α为诱饵采用酵母双杂交技术寻找新的AP-2α结合蛋白,免疫共沉淀证实AP-2α与其结合蛋白的相互作用,免疫荧光技术检测AP-2α与其结合蛋白的亚细胞共定位。荧光素酶报导基因检测AP-2α结合蛋白对AP-2α转录活性的影响。结果酵母双杂交技术鉴定出Ku70蛋白为新的AP-2α结合蛋白。免疫共沉淀证实了AP-2α和Ku70蛋白在细胞内的相互作用。亚细胞共定位研究显示AP-2α和Ku70蛋白都定位于细胞核内。在功能上发现Ku70可以增强AP-2α的转录活性。结论本研究首次揭示Ku70可以结合AP-2α并促进其转录活性,证明Ku70是一类新的AP-2α的转录共激活物,提示Ku70有望成为治疗AP-2α高表达乳腺癌的新靶点。

癌基因DEK和转录因子AP-2α协同促进乳腺癌中HER2的高表达

目的探讨癌基因DEK与转录因子AP-2α在乳腺癌变中的相互作用及在HER2过量表达、乳腺癌变中的病理学意义。方法用Western blot检测组织中DEK、AP-2α和HER2蛋白水平之间的相关性;免疫共沉淀检测DEK和AP-2α在MDA-MB-453乳腺癌细胞中的相互作用;通过siRNA抑制MDA-MB-453细胞中DEK和AP-2α的表达,用半定量RT-PCR和Western blot检测HER2的表达。结果乳腺癌组织中DEK、AP-2α和HER2的蛋白水平之间显示一定的相关性,DEK和AP-2α在MDA-MB-453细胞内有相互作用,siRNA抑制DEK和AP-2α的表达可协同抑制MDA-MB-453细胞中HER2mRNA和蛋白的表达。结论癌基因DEK和转录因子AP-2α协同促进乳腺癌中HER2的高表达。

细菌鞭毛的运动性在生物膜形成中的双重作用

生物膜是细菌感染的重要方式,生物膜所致的高度耐药性已经越来越威胁到人类健康。鞭毛在生物膜形成中的重要性已经被医学界广泛接受,普遍认为鞭毛的运动性与生物膜的形成能力成正比。然而,近年来多项研究表明,并非所有细菌的鞭毛都促进生物膜的形成,在环二核苷酸等分子作用下抑制细菌鞭毛的合成和运动性后,细菌生物膜的合成和稳定性显著增强。

RNAi干扰AP-2α对人乳腺癌细胞HER2表达及细胞增殖的影响

目的探讨RNAi干扰转录因子AP-2α对乳腺癌细胞MDA-MB-453中HER2表达及细胞增殖的影响。方法通过siRNA抑制MDA-MB-453细胞中AP-2α的表达,采用半定量RT-PCR和Western blot法,检测其对HER2表达的影响,采用MTT法测定细胞增殖情况。结果siRNA抑制AP-2α表达后,HER2 mRNA及其蛋白水平显著下降,RNAi干扰组与对照组比较MDA-MB-453细胞生长明显受抑制(P<0.01)。结论AP-2αsiRNA可以下调乳腺癌细胞MDA-MB-453中HER2 mRNA及其蛋白的表达水平,抑制MDA-MB-453细胞的生长,提示AP-2α基因在乳腺癌细胞的发生、发展中具有重要作用,AP-2α可能是HER2过量表达乳腺癌的治疗靶点。

影响恶性疟原虫显微镜检查的因素

恶性疟疾现在依然是死亡率较高的一种疾病,由于其临床症状复杂多变,往往易被贻误诊断和治疗,显微镜检查仍然是目前最常用的诊断方法。采用调节常规Wrights染色的缓冲液pH,结合外周血BPC的改变,分步读片的方法,发现对恶性疟原虫检出率有较大提高。

多发性骨髓瘤干细胞移植术后伴异常蛋白带与疗效和预后的相关性

多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是B淋巴细胞恶性克隆性疾病,虽然传统的化疗可以使病情得到一定控制,但很少有患者能够取得完全缓解,更不能治愈。近年来,MM患者采用自体或异体基因造血干细胞移植治疗呈逐年增多趋势,并取得了显著的临床疗效,然而造血干细胞移植术后,患者常常出现不同于初诊类型的新的M蛋白或寡克隆蛋白带,或者初诊M蛋白的迁移率发生了变化。

雌激素膜受体-α信号通路与乳腺癌的相关性

雌激素受体α和β是一类转录因子，产生多种生理功能，雌激素受体α和β调控靶基因转录是配体依赖性的，然而，近来研究表明雌激素受体仅还存在另外一条信号途径，也称作非基因组或膜启动途径，能够快速地被雌激素激活，这种雌激素受体α位于细胞膜，因此也称作膜雌激素受体α，已经报道膜雌激素受体α与多种肿瘤的发生相关，本文阐述了近年来雌激素受体α的研究成果以及与乳腺癌的相关性。

乳腺癌细胞AP-2α表达上调机制

目的探讨乳腺癌中转录因子2α(AP-2α)蛋白高表达的机制。方法采用Western blot、Southern blot、RT-PCR方法,从蛋白水平、基因水平、mRNA水平等方面系统研究乳腺癌细胞中AP-2α的高表达。结果HER-2癌基因高表达的转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-453和SK-BR-3中AP-2α蛋白水平高,但未检测到AP-2α基因扩增,AP-2αmR-NA水平也没有显著上调。结论翻译后修饰水平的异常可能导致在转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-453和SK-BR-3中AP-2α蛋白水平高,AP-2α可能作为转录因子促进HER-2癌基因在这些细胞中的高表达而致癌。

血红素合成酶特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定

目的利用含红色荧光报告基因(DsRed)的pGCsi-U6/Neo/DsRed/质粒构建干扰人红系特异的γ-氨基-б-酮戊酸合成酶(eALAS)基因表达的短发夹RNA(shRNA)表达载体,并进行活性鉴定。方法根据GenBank中eALAS的序列,设计3条表达shRNA的互补DNA序列,分别克隆至质粒载体pGCsi-U6/Neo/DsRed中构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定eALAS基因的真核表达载体pEGFP-N1-eALAS;将3种pGCsi-U6/Neo/DsRed/eALAS-shRNA分别与pEGFP-N1-eALAS共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测pEGFP-N1-eALAS融合蛋白的荧光强度,选择最佳RNA干扰(RNAi)靶点,并在基因和蛋白水平检测eALAS的表达,进一步验证最佳RNAi靶点的敲减效率。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,最佳RNAi靶点敲减效率达72.45%,eALAS在基因和蛋白水平显著下降。结论成功构建了eALAS特异性RNAi表达载体,为下一步研究铁效应元件eALAS在铁代谢异常所致红系统疾病的机制奠定了基础。

联合诱导法对K562细胞红系分化及其相关基因和膜蛋白表达的影响

目的优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能。方法采用红系诱导联合培养法,优化丁酸钠、促红细胞生成素、氯化高铁血红素、枸橼酸铁等成分组合和剂量组合。鉴定指标选用红系血红素合成酶(eALAS)mRNA和粒系bcr/ablmRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数。红系分化进一步鉴定指标选用Real-timePCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物。结果K562细胞诱导120h后,联苯胺染色阳性率达100%;α、β收缩蛋白(spectrinα、β)、带3蛋白(band3)、eALAS、整合素相关蛋白(CD47)、RhD血型抗原(RhD)、锚蛋白(ankyrin)、红细胞膜带4.2蛋白(EPB4.2)的mRNA水平为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、2.71、1.94倍,而bcr/ablmRNA水平为对照组的39%;红系膜蛋白CD47、band3、RhD水平明显增高(P<0.01),血型糖蛋白A(GPA)无明显差异。结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分化,并且细胞状态良好,易于进行红系统疾病研究;CD47、band3、RhD这3种膜蛋白可以作为早期红系分化的敏感指标。

军团菌感染误诊急性重症肝炎1例报道

自1977年美国疾病控制中心(CDC)首次分离出军团菌以来,目前已发现了34个血清种及54个血清型,以LP1、LP4、LP6引起的感染常见。军团菌好发于夏末秋初,可经污染的水引起“爆发流行”,散发病以“机会感染”和“院内感染”多见,常经呼吸道传播。易感人群为老人。

军团菌感染误诊为急性重型肝炎一例报道

患者女,72岁。因发热、咳嗽、咳痰、恶心、呕吐、伴腹部剧痛及尿黄2天,以急腹症于1998年3月2日入普通外科。检查:皮肤、巩膜深度黄染,胸、腹部可见瘀点、瘀斑,右肺底可闻及湿罗音,肝脾肋缘下未触及。胸部摄片示右下肺炎。腹部B超检查无异常。肝功能示TB436μmol/L,DB178μmol/L,ALT1167u/L,AST3602u/

hAP-2α转录因子酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测

目的构建hAP-2α转录因子酵母双杂交诱饵载体,检测hAP-2α转录因子在酵母双杂交中的表达及对报告基因有无激活作用,为进一步研究乳腺癌中hAP-2α转录因子相互作用蛋白的作用机制奠定基础。方法通过RT-PCR方法从Hela细胞克隆hAP-2α基因,SalI和EcoRI双酶切后连接诱饵载体pGBKT7,获得诱饵质粒pGBKT7-hAP2α,经测序鉴定后与酵母双杂交空质粒pGBKT7转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-hAP2α的自激活作用,同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达。结果成功扩增人乳腺癌hAP-2α基因,并准确克隆入pGBKT7中,诱饵载体pGBKT7-hAP2α成功转化到酵母菌株AH109中,经表型筛选检测无自激活作用,蛋白印迹法检测证实pGBKT7-hAP2α在酵母细胞中表达诱饵蛋白hAP2α。结论成功构建酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-hAP2α,诱饵质粒pGBKT7-hAP2α无自激活活性,可用于研究乳腺癌或其他疾病中与hAP-2α蛋白的相互作用分子。

激活蛋白-2转录因子在乳腺癌中的作用

激活蛋白-2(AP-2)转录因子家族包括AP-2α、β、γ、δ和ε5个成员,在调节细胞增殖、分化和凋亡以及哺乳动物的胚胎发育中起到重要作用;近年研究发现激活蛋白-2与乳腺癌的发生相关,至少3个AP-2家族成员AP-2α、AP-2β和A P-2γ在乳腺癌中表达;抑制癌基因P53和WWox、转录共激活物、癌基因HER2的表达、以及AP-2蛋白质的翻译后修饰都参与调控AP-2在乳腺癌中的作用。

鲍曼不动杆菌在住院患者感染标本中的分布及耐药性分析

目的了解鲍曼不动杆菌在住院患者感染标本中的分布及近5年的耐药性变迁情况。方法回顾性分析近5年该院临床分离的鲍曼不动杆菌的标本来源、临床分布及耐药性变化。结果 2006～2010年共分离鉴定鲍曼不动杆菌2046株,其中82.40%检自于痰液标本,76.20%的标本来自于ICU/EICU病区患者,检出该菌的总数呈逐年上升趋势,分离出的鲍曼不动杆菌对14种临床常用抗菌剂的耐药性呈逐年上升趋势,除对头孢哌酮/舒巴坦(14.10%)和多黏菌素B(5.80%)一直保持较低的耐药性外,对其他常用的12种抗菌剂的耐药率均大于30.00%,且多(泛)耐药菌株检出越来越多。结论鲍曼不动杆菌在临床感染标本中检出率越来越高,主要来自于ICU/EICU患者,动态监测该菌的分布及耐药性变迁,有助于指导临床合理用药,有效控制该菌在医院内的定植和播散,同时减少多(泛)耐药菌株的产生。

抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿性关节炎诊断中的应用

目的 探讨抗环瓜氨酸肽 (CCP)抗体检测在类风湿性关节炎 (RA)诊断中的意义。方法 根据cDNA序列人工合成的CCP为抗原 ,用ELISA方法检测 2 18例 (RA 112例 ,非RA 76例及正常人 30例 )血清中的抗CCP抗体 ,并比较抗CCP抗体与类风湿因子 (RF)的相关性。结果 抗CCP抗体在RA组患者血清中的阳性率 4 9.1% ,明显高于非RA组 ( 3.94 % )和正常对照组 ( 0 .0 % ) ,经 χ2 检验P <0 .0 5。抗CCP抗体对诊断RA的敏感性和特异性分别为 4 9.1%、96 .1% ,阳性预测值和阴性预测值为 94 .8%、4 3.8%。在 112例确诊为RA患者的血清中抗CCP抗体与RF重叠阳性率为 85 .4 % ,两者含量呈正相关。结论 抗CCP抗体对RA具有很高的特异性 。

丙型肝炎患者自身抗体检出率、丙肝病毒载量及肝功能间的相关性

目的研究丙型肝炎患者自身抗体检出率、丙肝病毒（HCV）载量及肝功能三者之间的相关性。方法检测168例丙肝患者自身抗体、丙肝病毒载量以及肝功能结果，并选取和检测129例健康对照者的自身抗体，其中计数资料采用卡方检验、计量资料采用t检验或者非参数秩和检验，统计分析丙肝患者与健康对照组自身抗体检出率差异，分析丙肝患者中自身抗体、病毒载量以及肝功能三者间的相关性，并分析自身抗体检出率与患者年龄、性别的关系。结果丙肝患者自身抗体阳性检出率为35.12％（59／168），各抗体阳性率分别为：抗核抗体（ANA）33.93％，抗平滑肌抗体（SMA）2.98％，抗线粒体 M2抗体（AMA-M2）1.80％，抗肝肾微粒体抗体（anti-LKM1）1.20％。抗胞浆抗体和抗可溶性肝抗原抗体未检出阳性。丙肝患者自身抗体总检出率及抗核抗体检出率较健康对照组高（χ2＝23.179，P＝0.000；χ2＝21.360，P＝0.000）。丙肝患者中，自身抗体阳性组与阴性组间丙肝病毒载量、总胆红素、谷氨酸氨基转移酶以及天冬氨酸氨基转移酶水平差异无统计学意义（χ2＝0.113，P＝0.945；Z＝－1.087，P＝0.277；Z＝－1.356，P＝0.175；Z＝－0.153，P＝0.878）；自身抗体检出率与性别无关（χ2＝2.897，P＝0.089），而与年龄相关（t＝3.274，P＝0.001）。HCV RNA阴性组与阳性组间谷氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平以及年龄的差异具有统计学意义（Z＝－6.430，P＝0.000；Z＝－6.123，P＝0.000；t＝－3.152，P＝0.002），HCV RNA阴性组年龄低于阳性组（44.17岁 vs 55.27岁）。结论丙肝患者容易发生自身免疫，自身抗体的产生与年龄有关，而与体内丙肝病毒载量的高低无关，也不能预测患者的肝功能损伤情况。HCV载量与患者年龄及肝损伤相关，高龄组病毒载量较高，肝损伤较严重。

荧光定量PCR检测解脲脲原体不同生物群的临床应用

目的探讨解脲脲原体(Uu)的感染状态及生物分群。方法采用荧光定量PCR技术对皮肤科和泌尿外科患者157例尿道/宫颈分泌物进行Uu分群;分析Uu不同生物群与不同性别患者泌尿生殖道感染的临床症状和体征的相关性。结果 157例标本中96例Uu呈阳性,其中生物1群57例(阳性率59.38%),生物2群39例(阳性率40.62%),男性患者临床症状和体征的阳性率与Uu分群无关(P>0.05),而女性生物1群感染者的临床症状和体征阳性率高于生物2群(P<0.05)。结论我院患者Uu以生物1群为主,生物1群可能是女性Uu感染的主要病原体,Uu对男性致病性与分群无关。