DACT2对H9C2心肌细胞心力衰竭标志物的影响

目的探讨β-连环蛋白抑制基因2(DACT2)过表达对H9C2心肌细胞心力衰竭标志物的调控作用及其分子机制.方法以Ad-DACT2-绿色荧光蛋白(GFP)及其对照空载体Ad-CON177-GFP腺病毒液感染H9C2心肌细胞后,利用荧光显微镜观察H9C2心肌细胞的感染效率;利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测DACT2过表达效率;RT-qPCR检测DACT2过表达后心力衰竭标志物α-肌球蛋白重链(α-MHC)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)和心钠素(ANF)的表达改变;Western blot检测DACT2过表达后Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)和转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路关键蛋白表达变化.两组间比较采用独立样本t检验.结果绿色荧光显示细胞感染成功;与空载组比较,DACT2过表达组的mRNA和蛋白水平均明显增加(t=11.291,t=31.469,P<0.01),提示过表达模型构建成功;心力衰竭标志物oα-MHC(t=3.922,P< 0.05)、ANP(t=5.895,P<0.01)、BNP(t=30.195,P <0.01)和ANF(t=8.074,P<0.01)的表达水平明显降低,β-MHC(t=1.553,P>0.05)的表达水平无明显变化;DACT2过表达后Smad4的表达(=9.510,P<0.05)明显上调,其他因子的表达无显著改变.结论 DACT2通过上调Smad4抑制心力衰竭标志物的表达.