LBP液基细胞学沉降式制片技术在痰脱落细胞诊断中的应用

目的探讨LBP液基细胞学薄层沉降技术在痰细胞学检查中的应用及肿瘤诊断价值。方法病人从肺部深处用力咳出晨痰至LBP细胞保存基液专用采样瓶内,加2～5ml1,4-二硫代苏糖醇化痰液,置振荡器上振荡20～30min,低速离心机上离心5～10min,沉渣用缓冲液稀释后入染色舱。结果全部105例标本均与传统涂片方法对比,LBP液基细胞学沉降法阳性率24.7%,传统涂片方法阳性率14.3%,LBP液基细胞学薄层沉降法较传统涂片法高出10.4%。结论LBP液基细胞学沉降法在痰液中的应用操作简便、成本低、制片非常清晰。对恶性肿瘤的检出率高。

骨组织甲酸脱钙浓度探讨

骨组织是一种坚硬的结缔组织，它由细胞、基质、纤维组成。基质中含有大量的固定无机酸盐，骨盐主要是羟基磷灰石的结晶．即磷酸钙和碳酸钙，其中大部分为水合磷酸钙^[1]，组织质硬，不能直接制片，必须经过脱钙处理后，才能进行常规苏木素-伊红（HE）制片、特殊染色及免疫组织化学检查。以往病理科常用的脱钙液有硝酸和盐酸的配方，但由于酸性过强，容易导致过度脱钙，组织结构被破坏而影响诊断；在病理技术实践中，发现甲酸可以作为一种温和的脱钙剂，但在我们的实践中发现，不同的甲酸浓度对制片及后续的染色均有影响。为保证制片的质量，本实验比较了不同浓度的甲酸溶液的脱钙效果，以确定既能完全脱钙又不影响病理诊断的甲酸脱钙液浓度，现报告如下。

甲酸脱钙液的浓度对骨组织脱钙后切片染色效果的研究

目的探讨骨组织经不同浓度的甲酸脱钙液24小时脱钙后切片染色效果，选择最佳甲酸脱钙工作液。方法350例骨组织标本每例取材3份，分别用40％、30％、20％的甲酸脱钙液常温下脱钙24小时，观察三种不同浓度的甲酸脱钙液脱钙后骨组织的切片和HE染色情况。结果骨组织经40％甲酸脱钙液脱钙后，切片完整，但HE染色核质偏浅，胞浆偏红；30％甲酸脱钙液脱钙后，切片完整，HE染色核质清晰，胞浆鲜艳；20％甲酸脱钙液脱钙后，切片不够完整，HE染色核质偏浅，胞浆偏浅。结论脱钙液脱钙后应保持组织切片完整，染色效果良好，且30％的甲酸脱钙液是较理想的工作液。

甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色效果比较

目的通过对甲状腺冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色效果进行对照观察,发现冰对蜡块与冰剩蜡块对免疫组织化学染色效果的差异,为选择冰对蜡块与冰剩蜡块做免疫组织化学提供理论实践依据。方法 3冰对蜡块与冰剩蜡块分别切片用EnVision法做TTF-1,CK19,Gal-3,HBME-1,TPO,TG免疫组织化学染色。结果对TTF-1,CK19,Gal-3,HBME-1,TPO,TG免疫组织化学染色结果的背景,定位进行分析,冰对蜡块与冰剩蜡块免疫组织化学染色各项指标阳性率完全一致。结论冰对蜡块与冰剩蜡块分别做免疫组织化学染色结果无明显差别,在没有冰剩蜡块或冰剩蜡块不符合要求时选择冰对蜡块做免疫组化,结果对诊断无影响。

510例股骨头标本常规脱水与超声波快速脱水对切片效果的比较研究

目的通过510例股骨头标本HE制片结果的分析，比较常规脱水与超声波快速脱水的效果。方法股骨头标本用锯锯成2cm×2cm×0.3cm的薄片二份，用30％的甲酸脱钙液进行脱钙16～18小时，分别用常规脱水的方法及超声波快速脱水的方法脱水处理后，经石蜡包埋、切片、染色制成HE切片，观察染色后的组织结构的清晰度及完整性。结果股骨头标本经二种脱水方法处理后制成的HE切片，阅片比较发现超声波快速脱水法优良率略高于常规脱水法，两种方法比较，P〉0．05，差异无统计学意义。但超声波组织处理仪能明显缩短病理制片工作时间。结论骨组织脱钙后采用超声波快速脱水的方法可以代替常规脱水，HE切片效果良好，缩短了病理检验报告时间，更好地满足了临床工作的需求。

P504s/P63/34βE12一次性标记在前列腺癌穿刺标本中的诊断价值

目的通过一次性标记的方法,探讨混合型抗体P504s/P63/34βE12在前列腺癌穿刺标本中的诊断价值。方法选择前列腺穿刺标本50例,包括前列腺癌40例,良性前列腺增生10例。同时采用双酶标记法检测混合型抗体P504s/P63/34βE12及单酶标记法分别检测单标抗体P504s、P63及34βE12,观察两种方法的标记结果。结果在40例前列腺癌中,用P504s/P63/34βE12双酶标记法有37例(92.50%)P504s阳性表达,P63、34βE12全部阴性表达;用单酶标记法有36例(90%)P504s阳性表达,P63、34βE12全部阴性表达;10例良性前列腺增生中,两种方法结果完全一致,P504s全部病例阴性表达,P63、34βE12全部病例阳性表达。两种方法在前列腺穿刺标本中表达的一致率为98%。结论通过对两种染色方法的比较,混合型抗体P504s/P63/34βE12双酶标记法较单标抗体单酶标记法更易于观察分辨,尤其对前列腺穿刺标本,前列腺癌的检出率更高,但差异无显著性。

电针对脑缺血再灌注大鼠脑皮层超微结构及Nogo-A表达的影响

目的探讨电针对脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)大鼠不同时间点皮层超微结构及轴突再生抑制因子Nogo-A表达的影响。方法 130只雄性SD大鼠随机数字表法分为电针组(30只)、假穴位组(30只)、模型组(30只)、假手术组(30只)和空白组(10只)。电针、假穴位、模型3组采用改良的ZeaLonga法制备左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。电针组术后选取督脉"大椎"、"百会"穴每天给予电针治疗。假穴位组术后选取督脉"大椎"、"百会"穴旁开1寸处给予电针治疗。模型组仅作MCAO缺血再灌注模型处理,假手术组仅做手术创伤,空白组不作任何处理。运用免疫组织化学染色法及透射电镜技术观察电针对IR后1、7、28d各组大鼠脑皮层缺血区细胞超微结构及Nogo-A表达的干预作用。结果电针组脑皮层缺血区神经元、胶质细胞及血脑屏障等超微结构的损伤均较假穴位组、模型组减轻。电针组大鼠脑缺血再灌注后第1、7、28d脑皮层缺血区Nogo-A的表达均低于同期假穴位组及模型组,差异有统计学意义(P<0.05),但假穴位组与模型组同期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,可能与其减轻脑细胞超微结构的损害、下调中枢神经轴突再生抑制因子Nogo-A的表达等机制密切相关。

乳腺纤维腺瘤雌、孕激素受体的表达

采用免疫组织化学SP法,对103例乳腺纤维腺瘤(FA)患者的乳腺肿物标本进行雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)检测,并收集患者的临床资料进行对比研究。发现ER阳性率为94.2%,PR阳性率为97.1%,ER、PR在不同年龄、生育哺乳史、肿瘤直径患者中的表达无统计学差异(P>0.05)。认为FA的ER、PR阳性率较高,ER、PR的表达与患者的年龄、生育哺乳史、肿瘤大小无明显相关性。对于ER和PR阳性的FA患者,术后进行及时、有效的内分泌治疗能降低其再发和多发的倾向。

MCAO大鼠梗死灶对侧皮层Nogo-A的动态变化及电针干预

目的观察脑缺血再灌注大鼠梗死灶对侧皮层不同时期轴突生长抑制因子Nogo-A的动态变化,并探讨电针对梗死灶对侧皮层Nogo-A的调节作用。方法采用改良Zea Longa法制备左侧大脑中动脉闭塞再灌注模型。采用免疫组织化学染色法及透射电镜技术观察电针对IR后1、7、28d各组大鼠脑梗死对侧皮层轴突再生抑制因子Nogo-A表达及神经元细胞形态、超微结构的影响。结果 (1)电针、假穴位、模型3组大鼠与假手术组大鼠相比,在IR后1d、7d梗死对侧皮层Nogo-A的表达均升高(P<0.05),7d最明显,第28天下降至基础水平(P>0.05);电针组大鼠IR后1d、7d脑梗死对侧皮层Nogo-A的表达均低于同期模型组和假穴位组,差异有统计学意义(P<0.05),但假穴位组与模型组同期对比差异无统计学意义(P>0.05)。(2)电针、假穴位、模型3组各时间点大鼠脑梗死对侧皮层出现神经元细胞胞体肿胀、细胞器水肿、核染色质轻度溶解、毛细血管内皮细胞肿胀、管腔狭窄等轻度病理改变,以缺血再灌注后第7天最明显,28d明显减轻。上述病理改变均较同期脑缺血区病变程度明显减轻,且不足以引起支配侧肢体神经功能缺失。电针组大鼠脑梗死对侧皮层神经元细胞、超微结构的改变均较同期模型组、假穴位组减轻。结论电针治疗脑梗死的有效机制可能与其减轻脑细胞超微结构的损害、下调中枢神经轴突生长抑制因子Nogo-A的表达、诱导神经轴突再生、减轻脑梗死后的远隔损害等密切相关。

乳腺纤维腺瘤中医辨证分型与激素受体表达相关性研究

目的:研究乳腺纤维腺瘤(FA)患者中医辨证分型与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的相关性。方法:收集156例FA患者的临床资料,按中医辨证分型分为:肝郁气滞型76例、痰瘀互结型80例,并采用免疫组织化学染色SP法对患者术后的FA标本进行ER、PR表达的检测,对其间的相关性进行对比分析。结果:FA中肝郁气滞型与痰凝血瘀型在发病年龄、肿瘤大小、肿瘤再发率及月经情况比较差异有统计学意义(P<0.05);两分型在病程、肿瘤单发、多发、伴发乳腺增生病、月经初潮年龄、人流、哺乳情况及ER、PR表达的强度及阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ER、PR高表达在FA的发生、发展中起重要的激活作用,可作为对FA进行内分泌治疗的依据,但不能作为FA中医辨证分型的依据;由于痰凝血瘀型FA的发病年龄小、肿瘤大、再发率较高,药物干预性治疗的疗程应适当延长。

新型超声组织处理仪在骨组织快速脱钙及制片技术中的应用

目的探讨新型超声组织处理仪（JYCL-2）在骨组织快速脱钙及快速石蜡制片技术中的应用。方法用10％～15％甲酸甲醛脱钙液配合该仪器的超声波技术结合水浴加温．加快骨组织脱钙；用BT生物组织处理剂和BT生物环保透明剂加快组织脱水、透明、浸蜡速度。结果本方法能够使骨组织快速脱钙并快速制出石蜡切片，用这些切片制作常规HE、免疫组化及组织化学染色，细胞组织结构完好，质量优良，与常规骨组织脱钙制作切片的质量无明显差别。结论用JYCL-2超声波对骨组织脱钙及脱水时间明显缩短，脱钙及染色效果良好、

乳腺良、恶性疾病的激素受体表达的对比分析

目的:检测乳腺癌(CA)、乳腺纤维腺瘤(FA)、乳腺增生病(HDB)的雌、孕激素受体(ER、PR)的表达,探讨它们之间的差异性。方法:采用SP法免疫组化染色对乳腺肿物标本进行ER、PR检测,并收集临床资料进行对比分析。结果:ER、PR表达的阳性率,CA组为67.5%和68.5%,与FA组的95.1%和97.6及HDB组的90.5%和97.6%比较,有显著性差异(P<0.001);FA组与HDB组ER、PR表达的阳性率比较,无显著性差异(P>0.05);CA组平均年龄和肿物大小分别与FA组和HDB组比较,有极显著性差异(P<0.001)。结论:FA组和HDB组ER、PR表达的阳性率明显高于CA组,提示CA中有雌激素依赖性和非雌激素依赖性的差异,而FA和HDB对雌激素的敏感性更明显;随患者年龄增大,或随着肿物增大,罹患乳腺癌的风险增高。因此,应重视乳腺良性疾病的治疗,对中、老年妇女乳腺肿物及时手术切除以降低罹患乳腺癌的风险;强调术后进行适当的药物干预性治疗以减少疾病再发或转变的倾向,这种寓防于治的策略是中医"既病防变"思想的充分体现。

促结缔组织增生性纤维母细胞瘤

目的探讨促结缔组织增生性纤维母细胞瘤(DF)的临床及病理学特征。方法对4例DF的临床特点、常规HE进行形态观察,同时应用免疫组织化学方法进行免疫表型的分析及复习相关文献。结果病变位于下肢皮下组织,以足部多见,肿瘤呈无痛性缓慢生长,呈良性经过,切除后无复发;镜下:肿瘤由稀疏的梭形或星状纤维母细胞和大量致密的胶原纤维构成,部分病例局灶性纤维黏液样变;瘤细胞核染色质细致,可见明显小核仁,细胞无异型性,也无核分裂象,未见肿瘤性坏死、钙化及骨化现象,部分病变局灶性血管增生;免疫组织化学标记显示瘤细胞弥漫性强表达波形蛋白,局灶性表达平滑肌肌动蛋白及肌特异性肌动蛋白。结论DF是一种具有独特临床病理学特征的良性纤维母细胞性或肌纤维母细胞性肿瘤,形态学与免疫表型存在肌纤维母细胞特征性的fibronexus junctions结构和纤维母细胞相关特征的超微结构表现;组织学上应与其他一些良性或具有局部复发潜能或低度恶性的纤维母细胞性或肌纤维母细胞性病变相鉴别。

透明质酸促进撞击性膝关节软骨损伤修复的生物学机理研究

直接或间接撞击是引起膝关节软骨损伤的常见诱因,关节软骨本身没有血供,基质陷窝中的软骨细胞代谢活性低,损伤后难以自我修复.透明质酸是软骨基质和关节液的重要组成成分,是促进软骨修复的一个有希望的载体与支架.本实验通过手术建立兔膝关节股骨內髁撞击损伤模型,术后每周关节内注射透明质酸0.5ml,伤后8 周收集标本,关节液用ELISA 法做Ⅱ型胶原、粘多糖和肿瘤坏死因子TNF-α含量测定.用组织学和免疫组织化学观察股骨內髁软骨中细胞层次结构、形态和Ⅱ型胶原表达,并用Tunel 法观察了软骨及软骨下骨中凋亡细胞的发生率.结果直接撞击可引起股骨內髁软骨面的损伤,组织学上表现为从浅表层到软骨下骨深浅不一的微裂纹、塌陷或缺损.ELISA 分析显示撞击后8 周关节液中Ⅱ型胶原和粘多糖含量减少,肿瘤坏死因子TNF-α含量增加.透明质酸可增加关节液中Ⅱ型胶原和粘多糖含量并降低TNF-α含量.免疫组化显示透明质酸治疗组关节软骨中Ⅱ型胶原阳性细胞数量增加;软骨下骨层凋亡细胞数减少.透明质酸诱导软骨细胞集簇性增生,但增生的软骨细胞未能按正常组织结构排列,未能向损伤处趋化;从而影响软骨损伤的直接修复能力,裂纹和缺损的软骨层未见明显的修复.结论：关节内注射透明质酸可增加Ⅱ型胶原和粘多糖的分泌;降低凋亡细胞数量,显示有稳定软骨的作用.但增生的软骨细胞未能向损伤处趋化, 从而未能直接修复损伤的软骨;如何联合利用透明质酸,干细胞和骨髓刺激促进软骨的修复需进一步研究.

幽门螺旋菌感染部位、菌量及形态与慢性活动性胃炎关系的病理组织学观察

对350例胃粘膜活检标本进行病理组织学观察及计算机图象分析，幽门螺旋菌（HP）的检出率为70．85％，胃内HP感染的菌量，尤其是HP侵入组织的深度及HP的形态与慢性胃炎的活动性有密切关系。观察结果提示侵入胃粘膜组织深部可能是HP引致活动性胃炎的重要条件，HP的形态与其侵入组织的能力有一定关系。

多参数流式细胞术鉴别诊断淋巴结良恶性病变的价值

目的探讨多参数流式细胞术对淋巴结良恶性病变鉴别的价值。方法病理诊断恶性淋巴瘤(肿瘤组)20例,无病变淋巴结(非肿瘤组)20例,将40例淋巴结石蜡标本制成单细胞悬液,流式细胞术检测FSC和SSC坐标系中较一致细胞群是否存在,并用PI染色对特征性细胞群的DNA倍体进行检测。结果1)特征性细胞群检测:肿瘤组与非肿瘤组出现率分别为85.0%和25.0%,两组阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。2)DNA倍体检测:肿瘤组出现特征性细胞群17例中非整倍体DNA 13例;非肿瘤组出现特征性细胞群5例中均为整倍体DNA,两组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。联合使用两种方法灵敏度为(76.5±10.3)%,特异度为100%。结论多参数流式细胞术有助于鉴别诊断淋巴结良恶性病变,可作为常规病理诊断的辅助检测。

巨大型尖锐湿疣与鳞状细胞癌及癌前病变关系的研究

目的观察女性生殖道普通尖锐湿疣、巨大型尖锐湿疣、上皮不典型增生及鳞状细胞癌的细胞增殖活性和人类乳头状瘤病毒感染的主要亚型分布,探讨这4种病变之间的内在联系。方法采用核仁组成区嗜银蛋白染色(AgNOR)、免疫组化染色(SP法)以及原位分子杂交(ISH)和聚合酶链反应(PCR)检测这4种病变中PCNA、P53、C-erbB-2的表达以及HPV6/11和HPV16/18亚型的分布。结果巨大型尖锐湿疣和上皮不典型增生在AgNOR颗粒面积/核面积比,以及PCNA的阳性指数(PI)和平均吸光度这些反映细胞增生活性的指标上差异无显著性。但与普通尖锐湿疣和鳞状细胞癌两组相比较,其差异有非常显著性(P<0.01)。在癌基因蛋白P53的表达上,此4组病变之间均有不同。C-erbB-2在鳞状细胞癌组中阳性率较高,而其余3组病变之间阳性率差异无显著性。普通尖锐湿疣感染的HPV亚型主要是低危型的6/11型(16/22例),鳞状细胞癌和上皮不典型增生主要感染的HPV亚型为高危型的16/18型(9/14例和3/6例)。巨大型尖锐湿疣感染的HPV亚型中两者均高:HPV6/11为66.67%(8/12例),HPV16/18为41.67%(5/12例)。结论巨大型尖锐湿疣是一类无论在组织形态、生物学特征和病原学基础等方面均有异于普通尖锐湿疣的特殊类型。

透明质酸促进关节软骨缺损修复的实验研究

[目的]观察透明质酸对关节软骨损伤修复的作用,并探讨其机制。[方法]经手术建立兔股骨内髁软骨2.5 mm圆形缺损模型,术中于缺损处局部注射、术后每周关节内注射透明质酸0.5 m1。4周后组织学和免疫组织化学分析缺损处软骨修复情况及凋亡细胞发生率;并分析关节液中Ⅱ型胶原、粘多糖和肿瘤坏死因子含量。[结果]透明质酸对关节软骨缺损的修复有明显的促进作用,4周时组织学上可见纤维软骨修复为主,其间散在少量Ⅱ型胶原阳性细胞,部分纤维软骨向透明软骨转化。并且关节液中Ⅱ型胶原和粘多糖增多,TNF-α含量减少,同时软骨和软骨下骨中凋亡细胞发生率降低。[结论]局部注射透明质酸可能通过影响骨髓干细胞增殖与分化,自骨髓和软骨下骨向缺损处诱发新生软骨组织的形成,从而促进软骨损伤的修复。

荧光原位杂交及TLE1免疫组织化学在小细胞低分化型滑膜肉瘤诊断中的应用

滑膜肉瘤（synovial sarcoma）占软组织肉瘤的5％～10％，以青壮年多见，主要发生于四肢大关节附近，多数生长缓慢。根据组织学形态及分化程度，滑膜肉瘤分可为5种类型：单相纤维型、单相上皮型、双相型、低分化梭形细胞型和小细胞低分化型（small cell variant of poorly differentiated synovial sarcoma）.

透明质酸促进撞击性膝关节软骨损伤修复的实验研究

目的 探讨关节内注射透明质酸（HA）促进撞击性膝关节软骨损伤修复的作用和机理.方法 选取20只新西兰兔,通过手术建立双侧膝关节股骨内髁撞击损伤模型,左膝关节术后每周关节内注射HA 0.5 mL（治疗组）,右膝关节术后注射等量生理盐水（对照组）.伤后8周采用组织学和免疫组织化学染色方法观察软骨中细胞层次结构、形态和Ⅱ型胶原的表达,并用Tunel法观察软骨及软骨下骨中细胞凋亡的发生情况.应用酶联免疫吸附试验法测定关节液中Ⅱ型胶原、黏多糖（GAG）和肿瘤坏死因子-α的含量.结果 术后8周,光学显微镜下对照组浅层局部可见少量增殖成簇群状的软骨细胞;治疗组浅层簇群状增殖的软骨细胞数量增加,但增殖细胞未按正常浅层软骨细胞方向排列,没有向损伤处趋化、移动.术后8周,对照组和治疗组关节软骨中Ⅱ型胶原阳性细胞数平均分别为（26±8）、（183 ±37）个/mm^2,凋亡细胞数平均分别为（137 ±26）、（14±6）个/mm^2,两组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.术后8周,治疗组关节液中Ⅱ型胶原和GAG含量较对照组增加,肿瘤坏死因子-α含量较对照组减少,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 关节内注射HA可以增加Ⅱ型胶原和GAG的分泌,减少细胞凋亡,具有稳定软骨的作用.增生的软骨细胞向损伤处趋化能力有限,影响软骨损伤的直接修复.