花生根瘤菌类菌体氢酶的分离提纯及特性

花生根瘤菌类菌体经超声波破碎，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００溶解，正已烷－硫酸铵处理后，再经ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ凝胶柱层析等纯化步骤，获得凝胶电泳纯的膜结合态氢酶，比活为７１．４μｍｏｌＨ２ｍｇ－１Ｐｒｏｔｍｉｎ－１，为类菌体吸Ｈ２活性的２１１倍。纯化的氢酶分子量为１１０ｋＤ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，呈现两个蛋白带，分子量分利为６５ｋＤ和３５ｋＤ。纯酶的Ｎｉ含量为０．６２ｍｏｌＮｉ／ｍｏｌ氢酶。在磷酸缓冲液中其活性的最适ｐＨ为６．５。ＤＣＩＰ、亚甲蓝、铁氰化钾、细胞色素Ｃ均可作为氢酶的电子受体，其中以ＤＣＩＰ为最适。

花生根瘤菌类菌体氢氧化体系的研究

花生根瘤菌类菌体含有吸Ｈ２酶，以Ｏ２或亚甲蓝为电子受体均表现吸Ｈ２活性。类菌体还原减氧化的吸收差示光谱在４２４、５００、５２０、５５０、５６０、５８５及５９５ｎｍ处呈现吸收峰，表明细胞色素ｃ、ｂ、和ｏ参与Ｈ２的氧化过程。ＣＮ－明显影响５２０、５５０、５６０ｎｍ处的吸收峰，意味着有些细胞色素ｃ和ｂ对ＣＮ－敏感，在Ｈ２代谢中充当末端氧化酶的作用。抗霉素Ａ、ＨＯＮＯ、ＣＮ－、Ｎ３－和ＤＢＭＩＢ均强烈抑制吸Ｈ２活性，但鱼藤酮不抑制吸Ｈ２活性。说明细胞色素ｂ、ｃ、ａ和泛配参与Ｈ２氧化的电子传递，而ＮＡＤＨ脱氢酶不参与。花生根瘤菌类菌体的Ｈ２氧化系统是个复杂具分支的电子传递体系。