胰腺肿瘤细胞中音猬因子调控诱导巨噬细胞极化的机制研究

目的探讨胰腺肿瘤细胞中音猬因子(Shh)调控诱导巨噬细胞极化的作用机制。方法收集胰腺肿瘤组织和癌旁组织,免疫组化检测Shh表达水平;分析TCGA数据库中Shh表达差异与胰腺肿瘤患者预后的关系;体外共培养胰腺肿瘤细胞与巨噬细胞(RAW264.7),流式细胞术鉴定巨噬细胞极化,Western blot实验检测Shh蛋白达水平,RT-qPCR实验检测Shh、一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)mRNA相对表达量;将共培养细胞分为空白对照组、阴性对照组、Shh组和Shh-RNAi组,分别感染慢病毒载体调控Shh表达,检测上述相同项目,并采用Western blot和RT-qPCR实验分别检测干扰素调节因子(IRF)4、IRF5表达水平。结果免疫组化结果显示,胰腺癌组织Shh阳性细胞率显著高于癌旁组织(P<0.05);TCGA数据分析结果显示,胰腺癌患者Shh表达显著高于正常对照(P<0.05),Shh低表达与患者远期生存率提高相关(P<0.05);与正常RAW264.7细胞比较,胰腺肿瘤共培养RAW264.7细胞Shh蛋白表达量、Shh、iNOS、Arg-1mRNA相对表达量及巨噬细胞M2/M1比例均升高(均P<0.05);与空白对照组和阴性对照组比较,Shh组Shh、IRF4蛋白、mRNA相对表达量、Arg-1 mRNA相对表达量上调,M2/M1比率升高,IRF5蛋白、mRNA相对表达量、iNOS mRNA相对表达量下调(均P<0.05);与Shh组比较,Shh-RNAi组Shh、IRF4蛋白、mRNA相对表达量、Arg-1 mRNA相对表达量下调,M2/M1比率均降低(均P<0.05),IRF5蛋白、mRNA相对表达量、iNOS mRNA相对表达量上调(均P<0.05)。结论胰腺肿瘤细胞中Shh呈高表达,过表达Shh具有促进M2型巨噬细胞极化、抑制M1型巨噬细胞极化的作用,可能是通过调控IRF4、IRF5蛋白和基因表达实现。

泌尿生殖道炎症患者支原体培养及药敏结果分析

目的:对临床诊断为泌尿生殖道炎症的患者进行支原体培养鉴定并药敏分析,了解目前支原体感染耐药情况。方法:对662例泌尿生殖道炎症患者行泌尿生殖道分泌物拭子支原体培养并做12种抗生素药物敏感性鉴定。结果:662例泌尿生殖道炎症患者中支原体感染率为31.72%,其中解脲支原体、人型支原体及两者混合感染的感染率分别为27.19%、1.36%、3.17%。在感染率最高的解脲支原体中对交沙霉素、强力霉素、美满霉素敏感性较强,敏感率分别为88.33%、87.22%、81.67%,对环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星敏感性较差,敏感率分别为7.78%、11.67%、13.33%,对其余几种抗生素都有不同程度的耐药。结论:临床上泌尿生殖道炎症患者多伴有支原体的合并感染,支原体对多种抗生素出现耐药,有必要行支原体培养鉴定和药敏测定指导临床用药。

维生素D受体基因型、单体型与乳腺癌发病风险的相关性研究

目的探讨维生素D受体(VDR)基因型、单体型与乳腺癌发病风险关系。方法选取146例乳腺癌患者和320例非癌女性对照人群为研究对象,应用PCR-RFLP检测VDR基因rs1544410、rs7975232和rs731236点的多态性,采用ELISA检测血浆中1,25(OH)2D3含量,结果用SPSS 13.0软件进行分析。结果 3个位点中仅rs7975232基因型与乳腺癌发病相关。与纯合子GG相比,杂合子基因型TT具有较低的发病风险(P=0.001,OR=0.460,95%CI:0.286～0.740)。但不同的基因型之间1,25(OH)2D3含量并无差异。此外,单体型AGT在病例组分布频率为3.8%,显著高于对照组的分布频率(0.8%,P=0.002);而单体型GTT在病例组的分布则显著低于对照组(19.8%vs 26.7%,P=0.018)。结论 VDR基因与乳腺癌发病存在一定相关;携带单体型GTT的女性具有较低的患乳腺癌风险,而单体型AGT则发病风险较高。

胰腺癌细胞Sonic Hedgehog的分泌及对巨噬细胞极化的影响

目的探讨胰腺肿瘤细胞中Shh(Sonic Hedgehog)的分泌情况及对巨噬细胞极化的影响。方法应用GEPIA 2数据库分析Shh在胰腺癌组织与癌旁正常组织中的表达差异;体外培养正常导管上皮细胞株HPDE6-C7和胰腺癌细胞株PANC-1和CFPAC-1,通过酶联免疫吸附技术(ELISA)检测其上清液中Shh的含量,应用胰腺癌细胞上清液作用于巨噬细胞株RAW264.7,以及单纯性应用重组Shh蛋白作用于巨噬细胞,通过细胞免疫荧光染色检测M2型巨噬细胞标志物精氨酸酶-1(Arg-1)、干扰素调节因子4(IRF4)的表达水平。结果GEPIA 2数据库显示,与癌旁正常组织相比,Shh在胰腺癌组织中的表达明显升高(P<0.05);同时ELISA分析显示,与正常导管上皮细胞HPDE6-C7相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中Shh的表达水平明显增高(P<0.05)。应用胰腺癌细胞的上清液作用于巨噬细胞RAW264.7后,其Arg1的表达明显增加(P<0.05)。同样,应用重组Shh作用后可增加巨噬细胞中Arg-1的表达(P<0.05);胰腺癌细胞上清液或Shh处理巨噬细胞后,与M2型极化相关的转录因子IRF4的表达明显增加(P<0.05)。结论胰腺癌细胞通过释放Shh提高巨噬细胞中IRF4的表达,进而诱导巨噬细胞向M2型极化。

958例糖尿病住院患者医院感染的病原菌及耐药性分析

目的研究引起糖尿病住院患者医院感染病原菌的种类分布及耐药趋势。方法取2005-2006年确诊糖尿病且符合医院感染住院患者的尿、痰、脓、粪、血等做细菌培养,同一患者同一类型标本多次检出同一株细菌,仅录入首次菌株,分离阳性或优势生长的菌落采用"第二代15e系统"进行细菌鉴定,并做药敏试验。结果两年内1050份标本真菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等的检出率分别为12.8%、10.0%、4.3%;大肠埃希菌和洋葱伯克霍尔德菌、铜绿假单胞菌对常用抗菌药物耐药率较低,大肠埃希菌对氨苄西林、环丙沙星、头孢唑林耐药率较高,分别为93.3%、67.4%、48.5%,而后者非发酵菌对复方新诺明耐药率较高,>50.0%;革兰阳性菌对万古霉素和替考拉宁耐药率很低,葡萄球菌属对红霉素、复方新诺明耐药率均>50.0%,鸟肠球菌、粪肠球菌对环丙沙星的耐药率>30.0%。结论革兰阴性菌可采用加酶抑制剂复合药和阿米卡星等,非发酵菌可采用环丙沙星等喹诺酮类药,革兰阳性菌可采用替考拉宁、呋喃妥因、氨苄西林/舒巴坦等。

229例血培养阳性结果分析

目的研究血液感染的微生物种类分布及病因.方法5 ml血标本在优快双相血培养瓶内于恒温（35±1）℃培养箱孵育,分离阳性标本菌落,采用“第2代15e系统”进行细菌鉴定,并做药敏试验.结果2 310例血培养标本共分离出229株细菌,其中革兰阴性菌198株占86.46%,革兰阳性菌27株占11.79%,真菌4株占1.74%,阳性率从高到低为甲副伤寒菌、大肠埃希菌、洋葱假单胞菌、产碱杆菌属、金黄色葡萄球菌,分别是55.89%、6.55%、5.24%、3.93%、2.62%.沙门菌占65.06%,分离自感染内科及门、急诊科,大肠埃希菌主要见于感染内科及内分泌科,常见菌阳性标本在孵育＜24、24～48、48～76、≥76 h的阳性率依次为5.29%、46.47%、85.88%、99.40%.结论血液感染病原菌在沿海地区以沙门菌属尤其以甲副伤寒菌为主,其次为非发酵菌和葡萄球菌.快速血培养技术仍是血液感染病原学诊断的必要手段.

血清心肌肌钙蛋白Ⅰ、内皮素-1联合缺氧诱导因子-1α对射血分数保留型心力衰竭的预测价值

目的 探讨血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cT nI)、内皮素-1(ET-1)联合缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对射血分数保留型心力衰竭(HFp EF)的预测价值。方法 选择2018年3月至2020年2月温州市中医院收治的肺动脉高压患者103例,根据随访12个月期间患者是否发生HFp EF分为观察组(26例)和对照组(77例)。检测并比较两组患者的血清cT nI、ET-1、HIF-1α水平。采用多因素Cox比例风险回归分析法分析HFpE F的影响因素,采用ROC曲线评估血清cT nI、ET-1联合HIF-1α对HFp EF的预测价值。结果 观察组血清cT nI、ET-1、HIF-1α水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。肺动脉高压及血清cT nI、ET-1、HIF-1α水平升高均是HFpE F的危险因素(均P<0.05)。血清cT nI、ET-1、HIF-1α联合预测的特异度与AUC高于各指标单项预测(P<0.05)。结论 血清cT nI、ET-1联合HIF-1α有助于预测肺动脉高压患者发生HFp EF的风险。

甲状腺过氧化物酶和甲状腺球蛋白与PTC临床病理特征的相关性分析

目的探讨并分析甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase,TPO)和甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)患者中病理特征的相关性,旨为该类患者的临床诊治提供更合理的方案。方法回顾性分析温州市中医院肿瘤外科2019年6月至2022年6月行PTC手术切除的142例患者,根据纳入和排除标准选出115例,男25例(21.74%),女90例(78.26%),年龄(43.48±9.74)岁。回顾性分析患者的病史、病理报告及人口统计学特征,采用免疫组化染色法检测PTC组织中TPO和Tg的表达,分为阳性组和阴性组,然后采用多因素Logistic回归分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果本研究发现TPO表达阴性率为95.45%(105例),单因素分析显示肿瘤最大径(t=5.746)、淋巴结转移(lymph node metastasis,LNM)、PT1患者比例两组差异有统计学意义(P<0.05),TPO阴性组明显高于阳性组。多因素Logistic回归分析发现,肿瘤最大径、LNM、PT1患者比例是影响PTC患者表达TPO的独立因素(95%CI=2.367~5.365,1.101~2.738,1.103~2.589,P<0.05)。Tg阳性率为77.41%(89例),单因素分析显示身体质量指数(body mass index,BMI)≥25人数比例(χ^(2)=11.180),肿瘤最大径(t=2.117)、包膜内侵犯(χ^(2)=8.354)、甲状腺外侵犯、LNM(χ^(2)=27.740)、PT1患者比例两组差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现BMI≥25、包膜内侵犯、甲状腺外侵犯、LNM、PT1患者比例是影响PTC患者表达Tg的独立影响因素(95%CI=3.845~11.735,1.485~2.983,1.171~2.762,4.083~16.526,1.003~2.174,P<0.05)。TPO和Tg的表达具有负相关性(r=-0.498,P<0.001)。结论 TPO和Tg与PTC患者肿瘤LNM、病理分级、肿瘤最大径和肿瘤浸润范围高度相关,且两者表达呈负相关,可作为评估患者预后的有效指标。

2008-2012年484株肺炎克雷伯菌耐药性分析及耐药机制的初步研究

目的回顾性分析近五年来医院住院及门诊病原菌感染患者中肺炎克雷伯菌的分离趋势,探讨其对常规抗菌药物的耐药性变迁和相关耐药机制。方法采用法国梅里埃公司的Vitek-2 Compact全自动微生物分析仪进行细菌鉴定及药敏试验,部分菌株采用微量生化管鉴定,部分药敏试验采用琼脂扩散法(KB),药敏结果判读按照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)制定的标准判读,纸片法表型确证试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,EDTA双纸片法检测金属酶表型。结果五年间484株肺炎克雷伯菌部分药物耐药率正逐年上升,其常见药物平均耐药率如下:阿米卡星(3.0%),复方新诺明(31.1%),头孢三嗪(14.5%),环丙沙星(18.7%),氯霉素(21.6%),特治星(6.3%),头孢他啶(22.0%),头孢噻肟(23.6%),舒普深(4.2%),呋喃妥英(26.9%),美罗培南(2.1%),ESBLs阳性99株(20.4%),改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型阳性5株,EDTA双纸片法检测金属酶表型阳性2株。结论部分药物耐药率逐年上升的有复方新诺明、环丙沙星、头孢他啶、头孢噻肟;耐药率较低的有美罗培南、阿米卡星、舒普深、特治星、头孢三嗪。应加强细菌耐药性监测,以及耐碳青霉烯酶筛查试验,为临床提供用药参考。

携带杀白细胞素基因金黄色葡萄球菌临床感染菌株的回顾性研究

目的研究临床分离的金黄色葡萄球菌携带杀白细胞素基因在社区与医院菌株分布流行的情况,及其携带mecA基因型的相关性分析。方法收集2010年1月-2014年12月医院临床分离的188株非重复金黄色葡萄球菌,进行菌株鉴定和药敏分析,用头孢西丁药敏纸片法初筛耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),用PCR法检测金黄色葡萄球菌的杀白细胞素基因(PVL)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因,并测序部分阳性基因PCR产物。结果头孢西丁药敏纸片法初筛试验与mecA基因PCR法结果差异有统计学意义;188株金黄色葡萄球菌中,76株为MRSA,阳性率为40.4%,其中64株MRSA为医院获得株,12株MRSA为社区获得株;112株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中99株为医院获得株,13株为社区获得株;共有14株PVL基因阳性,阳性率7.4%,社区检测到2株PVL(+)CA-MSSA(社区获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌),医院共检测到12株、阳性率6.4%,其中7株为PVL(+)HA-MRSA(医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)、5株为PVL(+)HA-MSSA(医院获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌),对该14株PVL基因阳性菌株进行MIC(最低抑菌浓度)分析,喹奴普汀/达福普汀、呋喃妥因、利福平、万古霉素、利奈唑胺、替加环素的耐药率为0,耐药率较低的有四环素(21.4%)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(14.3%)、左氧沙星(7.1%)、庆大霉素(7.1%),菌株大部分分离自皮肤软组织、脓等标本。结论携带PVL毒力基因的MRSA在医院的检出率比在社区的明显高,提示含PVL高毒力与多重耐药基因的医院获得株-金黄色葡萄球菌PVL(+)MRSA已经从社区转移到医院感染,应引起院感与临床部门的高度重视。

ESRα和VDR基因多态性与乳腺癌易感性关系

目的探讨雌激素受体α（ESRα）、维生素D受体（VDR）基因多态性与乳腺癌发病风险关系。方法选取189例乳腺癌患者和374名非癌女性对照人群为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）和测序检测ESRα基因rs2234693和rs9340799位点、VDR基因rs10735810位点的多态性。结果 ESRα基因rs9340799位点等位基因G在病例组的分布频率（15.08%）明显低于对照组（22.46%）（P=0.002）,与等位基因A相比,经年龄校准的OR=0.580（95%CI=0.413~0.815）;ESRα基因单体型CG在病例组的分布频率（13.7%）明显低于对照组（20.6%）（P=0.005）,复合基因型CCGG在病例组的分布频率（1.59%）也明显低于对照组（5.61%）（P=0.025）,其OR值分别为0.614（95%CI=0.436~0.864）和0.271（95%CI=0.080~0.921）。结论 ESRα基因rs9340799位点多态性与乳腺癌发病紧密相关,携带有等位基因G,单体型CG或复合基因型CCGG的个体患乳腺癌的风险较低。

温州地区事业单位女职工子宫颈HPV感染的基因型分析

目的了解浙江省温州地区事业单位女职工子宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染情况与基因型的分布,为该地区HPV分子流行病学研究与子宫颈癌的预防提供一定的科学数据基础。方法 2013年1月至2014年3月,采集来医院做体检的温州地区事业单位女职工5194人的宫颈脱落细胞标本,用导流杂交聚合酶链式反应（PCR）检测HPV基因型的23种亚型,统计分析各高危型、低危型的感染状况,分析不同年龄组间感染率的差异。结果温州地区事业单位女职工子宫颈HPV总感染率为20.91%（1086/5194）,高危型感染率为19.23%（999/5194）,低危型感染率1.68%（87/5194）。18种高危型均能检测到,感染率居前5位的分别为16型（2.54%）、58型（2.31%）、52型（2.15%）、53型（1.17%）、68型（1.15%）;低危型中检出6型、11型、42型,其中感染率最高的是42型（0.69%）。21~30岁、31~40岁、41~50岁、51~60岁年龄段女职工HPV感染率分别为17.30%、13.42%、33.82%、19.71%,41~50岁年龄段感染率显著高于其他年龄段（χ^2=9.62,P〈0.001）。结论温州地区事业单位女职工宫颈HPV感染具有该人群异质性的流行分布特征,应加强该人群中40~50年龄段HPV感染的预防与监测。

女性雌激素受体α基因多态性分布特征及血脂关系研究

目的:调查女性雌激素受体α(ESRα)基因多态性的分布特征,并探讨其与血脂水平的关系。方法:收集605例浙江地区健康女性人群作为研究对象,提取其外周血DNA,应用PCR-RFLP和测序技术分析ESRα基因rs2234693和rs9340799位点的单核苷酸变异,计算其基因型和等位基因频率。同时检测其血清中血脂含量,以评价基因型与血脂水平之间的相关性。结果:ESRα基因rs2234693位点以"T"基因型(CT或TT)为主,而rs9340799位点则以"A"基因型(AA或AG)为主;ESRα基因两个位点各自的基因型分布与血脂水平差异无统计学意义(P>0.05);但携带有复合基因型"CTGG"(P=0.004,TG:0.60±0.21 mmol/L)或"TTAG"(P=0.014,TG:0.78±0.29 mmol/L)的女性人群甘油三脂水平均低于平均值(TG:1.14±0.93 mmol/L)。结论:ESRα基因复合基因型"CTGG"或"TTAG"与低甘油三脂水平明显相关,这可为女性血脂水平异常提供一些分子遗传学证据。

女性维生素D受体基因FokI遗传多态性对维生素D受体蛋白的影响

目的:探讨女性人群维生素D受体(VDR)基因5'端转录起始位点FokI多态性对VDR蛋白水平的影响。方法:以229例女性人群作为研究对象,采用PCR-RFLP检测其VDR基因FokI位点多态性,ELISA检测血浆VDR蛋白水平。结果:FokI位点基因型符合H-W平衡检验;基因型以杂合子Ff为主,占50.26%;FF基因型女性的血浆VDR水平为82.67±34.14 pmol/ml,显著低于Ff(103.78±17.48 pmol/ml)或ff基因型(114.73±53.00 pmol/ml);VDR水平与年龄明显相关。结论:女性人群VDR基因FokI多态性与血浆VDR蛋白水平相关,FF基因型具有较低的VDR水平。

CD133在直肠癌组织中的表达及与临床病理参数的相关性

目的通过检测直肠癌组织CD133的表达并分析其与临床病理参数的相关性,探讨其在临床应用中的价值。方法免疫组化法检测116例直肠癌与癌旁切缘正常组织中CD133蛋白的表达,分析两组间的差异以及癌组织中CD133与临床病理参数性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、浸润深度、淋巴结转移与否、p TNM分期的相关性。结果直肠癌组织与癌旁组织中CD133的阳性表达率分别为66.4%、8.6%,两者差异有统计学意义(P<0.05),癌组织中CD133高表达阳性率为33.6%,低表达阳性率为32.8%;癌组织CD133高表达与组织分化程度、淋巴结转移与否呈正相关,相关系数分别为0.453、0.408,与肿瘤直径、肿瘤浸润深度、临床分期无显著相关。结论直肠癌组织中CD133阳性表达率在一定程度上体现直肠癌生物学行为,可作为直肠癌恶性程度判断的新的分子指标应用于病情的评估。

自建生化检测系统稳定校准品的建立

目的:建立自建生化检测系统的长期稳定校准品。方法:利用由日立7600生化分析仪、罗氏试剂及测定程序、cfas校准品及罗氏质控品组成的原检测系统,将cfas校准品的标示值通过量值传递而赋值给新鲜患者混合血清,以此混合血清校正自建检测系统"雅培C8000生化分析仪/上海科华试剂及测定程序、cfas校准品";然后以此自建检测系统给其自身校准品多次测定获得实测值,再以此具有实测值的cfas校准品再次校正自建检测系统。同时,参照(NCCLS)批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差评估EP-9A2指南文件》,用病人新鲜血清分别两次对量值传递而校正前、后的自建检测系统与原检测系统各作七项常见血清酶的比对试验,并对测定结果进行统计分析和偏倚评估。结果:量值传递前各项目在两检测系统上的相关系数r≥0.975,项目ALT、GGT在两检测系统上的相对偏差SE%>1/4 CLIA′88,临床不能接受;量值传递后各项目在两检测系统上检测结果经线性回归分析,其相关系数(r)和线性方程斜率(a)、截距(b)均有不同程度的改善,所有项目的SE%≤1/4 CLIA′88,临床全部可接受。结论:利用量值传递后的病人定值血清来校正自建检测系统,进而对自建检测系统和原检测系统的偏倚评估和校正可建立自建检测系统长期稳定校准品。

糖尿病病原菌及耐药性趋势的分析

取2005～2006年糖尿病患者的尿、痰、脓、粪、血等做病原菌培养，同一患者同一类型标本多次检出同一株细菌，仅录入首次菌株，分离阳性或优势生长的菌落采用“第2代15e系统”进行细菌鉴定，并做药敏试验。结果2005年516例，2006年534例标本病原菌检出率为真菌（11．8％、13．7％）、大肠埃希氏菌（9．4％、10．7％）、金黄色葡萄球菌（4．1％、4．5％）、凝固酶阴性的葡萄球菌（3．9％、3．2％）、铜绿假单胞菌（2．3％、1．1％）、洋葱伯克霍德菌（1．7％、3．6％）、鸟肠球菌（3．1％、2．8％）、粪肠球菌（2．1％、4．1％）等。2005年与2006年大肠埃希氏菌的药物耐药率，如阿米卡星（15．9％、7．1％）、呋喃妥因（9．8％、3．5％）、氯霉素（45．9％、21．2％），三种药耐药率有所下降，加酶抑制制的头孢类及半合成青霉素类的耐药率较低，其余的头孢类和喹诺酮类药物耐药率均略有上升。洋葱伯克霍德菌和铜绿假单胞菌对阿米卡星，头孢哌酮／舒巴坦的耐药率较低，且有降低的趋势，其余的略有上升。金黄色葡萄球菌、鸟肠球菌、粪肠球菌对替考拉宁、万古霉素、呋喃妥因的耐药率较低且有下降趋势，其余的耐药率有所上升，而对氨苄西林／舒巴坦耐药率较低，但有上升的趋势。