草鱼Bcl-2基因的克隆、组织表达分析及DHA诱导下其在脂肪细胞中的表达变化

为获知草鱼B细胞淋巴瘤-2(B cell CLL/lymphoma-2,Bcl-2)基因序列及其在草鱼各组织和脂肪细胞中的表达情况,采用cDNA快速末端扩增技术获得了草鱼Bcl-2的全长cDNA序列,通过实时定量PCR研究了Bcl-2在草鱼不同组织中的表达水平及经二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)处理后,草鱼脂肪细胞Bcl-2的表达变化。结果显示,所获得草鱼Bcl-2基因全长cDNA序列长度为1 292 bp,包含133 bp的5'非翻译区和784 bp的3'非翻译区;开放阅读框为375 bp,编码124个氨基酸。草鱼Bcl-2与鲤、斑马鱼Bcl-2氨基酸同源性分别为89.5%和91.1%,与人、原鸡、小鼠、野猪、欧洲牛、褐家鼠、家猫和犬等其他动物的氨基酸同源性为57.7%～62.0%。其编码蛋白的分子量为14.14 ku,等电点为4.68。Bcl-2基因在草鱼心脏、肝胰脏、脾脏、鳃、肾脏、肌肉、腹腔脂肪组织、脑、肠和精巢10个组织中均有表达,其中在腹腔脂肪组织、肾脏和精巢中表达丰度最高,在肌肉中表达最低。DHA处理草鱼前体脂肪细胞后,Bcl-2基因表达在增殖阶段下调,而在分化阶段上调。研究表明,Bcl-2在草鱼各组织中广泛表达,且DHA对其在脂肪细胞中的表达具有调控作用。

草鱼HSP90基因cDNA序列克隆及其组织表达差异

根据斑马鱼HSP90(Heat shock protein)序列(NM_131328)设计并合成一对引物,提取草鱼肝脏组织总RNA,RT-PCR扩增获得草鱼HSP90基因cDNA部分序列596 bp,获得GenBank登陆号为FJ517554。将测序结果利用DNAman软件与其他几种已知序列的鱼进行比对,结果表明,草鱼HSP90与斑马鱼、鲤、鲋的同源性依次为90%、89%、92%。同时利用半定量(Semi-quantitative,SQ)RT-PCR技术检测HSP90在草鱼脂肪、肌肉、肠、脑、粘液、性腺、鳔、肝脏、心脏、脾脏、鳃、鳍12个组织的表达差异。结果表明,HSP90在草鱼除了鳍外的其他11个组织中均检测到表达,其中在心脏中表达最高,但与鳃、性腺、脑、脾脏中的表达无显著差异(P>0.05),在脂肪、粘液、鳔组织中的表达显著低于其他几种组织(P<0.05),在肝脏、肌肉与肠中的表达无显著差异(P>0.05)。

九龙牦牛CAST基因部分序列的克隆及其表达差异研究

根据牛钙蛋白酶抑制蛋白((Calpastatin,CAST)设计并合成一对引物,从九龙牦牛肌肉组织提取总RNA,利用RT-PCR扩增获得九龙牦牛CAST基因部分片段,利用SQRT-PCR技术检测九龙牦牛各组织中CASTmRNA的表达差异.结果,成功克隆九龙牦牛CAST部分cDNA序列485bp,获得GenBank登录号为FJ483833;用DNAman软件分析发现九龙牦牛CAST基因与普通牛的核苷酸同源性依次为99%;SQRT-PCR组织表达检测表明,CAST基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪中均表达,在心脏中表达最高,在脂肪组织中表达最低.

EPA对草鱼前体脂肪细胞增殖分化的影响

体外培养草鱼前体脂肪细胞,并用不同浓度(0—100μmol/L)二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)进行处理,噻唑兰比色法(Methyl thiazolte trazoliu,MTT)和油红O染色提取法检测EPA对细胞增殖及分化的影响,Real-time qPCR检测过氧化物酶增殖激活受体家族(Peroxidase proliferation activated receptor,PPARs)、脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipase,LPL)、过氧化物酶体增殖激活受体γ辅助活化因子1α(Peroxisome prolifera-toractivated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α)等基因的表达情况。结果显示,不同浓度EPA在2d内均显著促进草鱼前体脂肪细胞增殖(P<0.05);不同浓度EPA处理1d后均显著抑制草鱼前体脂肪细胞分化(P<0.05),且100μmol/L EPA处理细胞2d可显著促进LPL和PGC-1α基因的表达(P<0.05)。研究表明,EPA可促进草鱼前体脂肪细胞增殖,抑制其分化,该抑制作用与其调控PGC-1α、LPL等脂代谢基因的表达有关。

草鱼ATGL基因的表达及饲喂n-3 HUFAs对其的影响

实验获得了草鱼脂肪组织甘油三酯水解酶（ATGL）部分cDNA序列（GenBank登录号为HQ845211）,并进行了序列同源性分析;采用实时定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）方法,检测了ATGL基因在草鱼不同组织的表达状况;研究了投喂n-3高不饱和脂肪酸（n-3 HUFAs）对草鱼肝胰脏ATGL基因时序表达的影响。结果显示,所获得的草鱼ATGL基因部分cDNA序列长度为687 bp,与人、牛、小鼠、长腭泥虎鱼、大黄鱼等物种的同源性为65%~75%;该基因在草鱼心脏、肝胰脏、脾脏、鳃、肾脏、肌肉、腹腔脂肪组织、脑、小肠、精巢10个组织中均有表达,其中在腹腔脂肪组织中表达丰度最高,在肝胰脏和肌肉中表达丰度次之。处理组草鱼摄食n-3 HUFAs饲料后,ATGL基因的表达水平在第1周和第2周显著高于对照组,第3周后,该基因的表达水平在处理组与对照组间无显著差异。研究首次克隆得到草鱼ATGL基因部分cDNA序列,并发现该基因在草鱼脂质蓄积及代谢较旺盛的组织中表达水平较高,且其在肝胰脏中的表达受到n-3 HUFAs的影响,其规律为先被诱导升高,然后回复到正常水平。

草鱼成熟脂肪细胞总RNA提取方法研究

获得高质量的RNA是逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Northern blot以及转录组测序(RNA-Seq)等分子生物学研究的基础,由于草鱼脂肪细胞中油脂含量较高,从中提取高质量RNA存在困难。本研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)成熟脂肪细胞为材料,通过增加离心和抽提次数等方式对传统总RNA提取方法进行优化,采用琼脂糖凝胶电泳、核酸定量分析及基因扩增等方法验证所得RNA的完整性、纯度及质量。结果表明,经此方法提取的草鱼成熟脂肪细胞总RNA的A260 nm/A280 nm比值在1.95到2.00之间,28S和18S条带完整,草鱼LPL和β-actin基因扩增条带清晰。认为采用本方法获得的草鱼脂肪细胞RNA样品质量较高,能够用于后续分子生物学研究。

秦岭细鳞鲑生物学参数研究及其个体变化探讨

探究秦岭细鳞鲑(Brachymystax lenoktsinlingensis)个体生物学参数及个体小型化现象,为该鱼种的保护与开发利用提供基础资料。于1991年8月、1992年11月,对秦岭黑河流域秦岭细鳞鲑进行了两次调查,采集到样本178尾,对样本进行了生物学数据测量和分析。结果显示:秦岭细鳞鲑体长为48~290 mm,体重为3~475 g,50 g以下个体占比达75.84%。体长(L)-体重(W)关系式为:W=3×10^(-5)L^(2.9105),R^(2)=0.982,雌雄性比为1:1.44。独立样本t检验分析表明:雌、雄秦岭细鳞鲑的肥满度、比肠长、脏体比、腹腔脂肪指数等4个指标差异不显著(P>0.05)。与2014年相同流域的秦岭细鳞鲑数据比对后发现,平均体重和100 g以下个体所占百分比无明显差异。综合分析现有关于秦岭细鳞鲑个体小型化的报道,认为秦岭细鳞鲑个体小型化有待进一步研究。

秦岭细鳞鲑研究进展及其个体小型化现象的探讨

秦岭细鳞鲑(Brachymystax lenok tsinlingensis)是我国特有的冷水性鱼类,近年来面临种质资源下降和个体小型化问题。本文综述了近十年来秦岭细鳞鲑的研究进展,展望了今后的研究方向,以期为秦岭细鳞鲑的进一步研究及其资源保护与利用提供参考。分析秦岭细鳞鲑个体小型化的报道发现,由于缺乏历史数据的对比,其个体小型化的证据并不充分。本研究认为:秦岭细鳞鲑是否存在个体小型化现象还有待进一步研究。

弧唇裂腹鱼生物学特征研究

2017年9月,在西藏察隅县察隅河采集10尾弧唇裂腹鱼(Schizothorax curvilabiatus),其体长范围为136~230 mm,体质量范围为25.7~144.2 g,研究了其部分生物学特征,首次报道弧唇裂腹鱼3项生物学指标:肠体比(RGL)为2.82±0.54、肥满度(CF)为(1.16±0.13)、脏体比(VSI)为(13.55±4.70)%。

滤食性鱼类对淡水生态系统修复作用的研究进展

近年来以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Aristichthys nobilis)等滤食性鱼类为主要放养对象的非经典生物操纵方法在水体修复中的应用越来越多,效果明显,但在清除浮游藻类的同时也会带来其他问题。本文分析了非经典生物操纵方法中几种滤食性鱼类在淡水生态系统中的应用以及存在的问题,并从生物链和生态平衡角度分析,将滤食性鱼类与其他水生动、植物混养协同优化水体生态系统结构,增强对水体的修复效果,维护生态平衡。

国宝中的“国宝”——棕白色大熊猫的由来

你是否被大熊猫圆溜溜的眼睛、黑白分明的细毛以及憨态可掬的样子所吸引?但其实还有一种非常罕见的大熊猫,它们的毛色像巧克力一样。如今,全世界唯一一只圈养的“巧克力熊猫”,是生活在秦岭地区的“七仔”。“七仔”的毛色是如何形成的?这种特殊毛色的大熊猫为何只在秦岭地区存在?它的后代的毛是什么颜色的呢?