EB病毒LMP1促鼻咽癌细胞生长与CD23、bcl-2表达和凋亡的关系

目的 :探讨EB病毒LMP1表达促鼻咽癌细胞系生长作用与CD2 3、bcl 2表达和细胞凋亡的关系。方法 :用免疫组化LSAB法检测LMP1、CD2 3和bcl 2蛋白的表达 ;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力 ;用DNA电泳法、流式细胞法和TUNEL法检测癌细胞凋亡 ;用CD2 3单抗阻断和MTT法观察CD2 3单抗对鼻咽癌细胞系生长的影响。结果 :表达LMP1的鼻咽癌细胞系 (L CNE1)的生长能力明显增强 ,并有CD2 3蛋白表达 ,而非表达LMP1的鼻咽癌细胞系 (V CNE1和CNE1)的CD2 3表达阴性 ;3种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生 ,而都仅有 2 %～ 3 %的细胞表达bcl 2蛋白 ;CD2 3单抗能明显地抑制L CNE1细胞系的生长 ,但对V CNE1和CNE1细胞系的生长无明显影响。结论 :提示LMP1促鼻咽癌细胞系生长可能是通过上调CD2 3所致 ,而与bcl 2的表达和细胞凋亡无关。

中药复方“冬夏丸”体外对6株人肿瘤细胞系作用的研究

目的 研究中药复方“冬夏丸”体外对６ 株人肿瘤细胞系的作用。方法 分别用微量板染色法和流式细胞术测定肿瘤细胞的生长和细胞周期分布。结果 中药复方“冬夏丸”对６ 株人肿瘤细胞均有显著的生长抑制效应，抑制率均随药物浓度的增加而增高；多数细胞系的半数抑制浓度（ＩＣ５０） 相近；药物使鼻咽癌细胞Ｇ２ 期增加并可诱导细胞凋亡。结论 中药复方“冬夏丸”体外对包括ＮＰＣ在内的多种肿瘤细胞均有显著的生长抑制作用。

鼻咽癌患者及其患病风险者若干免疫功能的观察

观察了ＮＰＣ患者和不同滴度ＩｇＡ／ＶＣＡ者的Ｔ淋巴细胞亚群、免疫球蛋白（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）和补体Ｃ３的变化。结果提示，鼻咽癌患者的Ｔ细胞亚群失调，细胞免疫功能明显降低而体液免疫功能明显增高；ＮＰＣ患病风险者──高滴度ＩｇＡ／ＶＣＡ者的免疫功能发生了与ＮＰＣ患者相似的变化；低滴度ＩｇＡ／ＶＣＡ者的细胞免疫功能也开始趋向于抑制状态。研究结果为ＮＰＣ发病的免疫机制和防治提供了重要的实验依据。

EB病毒LMP1表达对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期分布的影响

目的 :观察EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)表达对鼻咽癌细胞系增殖和细胞周期分布的作用。方法 :用免疫组化 (LSAB)法检测LMP1蛋白的表达 ;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的增殖能力 ;用流式细胞术检测细胞周期的分布。结果 :表达LMP1的鼻咽癌细胞系L -CNE1的OD值明显高于LMP1阴性的鼻咽癌细胞系V -CNE1和CNE1(P <0 .0 0 1)。L -CNE1细胞系的G1期细胞百分率明显减少和S期细胞百分率明显增加 ,与V -CNE1和CNE1细胞系比较均有非常显著性差异 (P <0 .0 0 1)。而V -CNE1与CNE1细胞系之间各期细胞百分率则无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :EBV -LMP1表达可使鼻咽癌细胞系细胞周期分布改变和增殖能力增强。

EB病毒感染对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的 :探讨EB病毒 (EBV)感染对鼻咽癌细胞系生长和细胞凋亡的影响。方法 :用EBV直接感染人鼻咽癌细胞系CNE1;用免疫组化 (LSAB)法检测EBV -LMP1和bcl- 2蛋白的表达 ;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力 ;用流式细胞术和TUNEL法检测癌细胞凋亡。结果 :感染EBV的鼻咽癌细胞系 (E -CNE1)的EBV -LMP1表达阳性 ,生长能力较未感染EBV的CNE1明显增强 (P <0 0 1) ,2种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生 ,而均仅有 2 %～ 3%的细胞表达bcl- 2蛋白。结论 :EBV感染和LMP1表达可促进鼻咽癌细胞生长 ,但对鼻咽癌细胞的bcl- 2表达和细胞凋亡无影响。

EB病毒IgA/VCA和IgA/EA检测对鼻咽癌诊断价值的分析

目的：了解ＥＢ病毒ＩｇＡ／ＶＣＡ和ＩｇＡ／ＥＡ检测在鼻咽癌（ＮＰＣ）诊断中的价值。方法：ＩｇＡ／ＶＣＡ和ＩｇＡ／ＥＡ测定用间接免疫酶法，ＮＰＣ经活体组织检查确诊。结果：从１４８０例受检者中发现ＮＰＣ患者１２３例。ＮＰＣ患者的ＩｇＡ／ＶＣＡ阳性率为１００％，非ＮＰＣ者为２３．２１％，两者的几何平均滴度（ＧＭＴ）分别为１∶３９８．７和１∶１８．６，统计学差异非常显著（Ｐ＜０．００１）。ＮＰＣ患者的ＩｇＡ／ＥＡ阳性率为８１．３％，非ＮＰＣ者为０．８１％，两者的ＧＭＴ分别为１∶３３．６和１∶１２．１，统计学差异也非常显著（Ｐ＜０．００１）。９９．１％ＮＰＣ患者的ＩｇＡ／ＶＣＡ滴度在１∶４０以上，相反，７９．４％非ＮＰＣ者的ＩｇＡ／ＶＣＡ滴度在１∶２０以下。ＮＰＣ和非ＮＰＣ者的ＩｇＡ／ＥＡ、ＩｇＡ／ＶＣＡ的滴度分布构成Ｐ值分别为＜０．００１和０．０５，差异相似。

EB病毒抗原诱导CD_8细胞的特异性研究

本文进一步探讨了ＥＢＶ（ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒｖｉｒｕｓ）抗原诱导ＣＤ＿８细胞的特异性。结果表明，用ＥＢＶ抗原不能从ＥＢＶ血清学阴性者诱导出ＣＤ＿８细胞，而从ＥＢＶ血清学阳性者诱导的ＣＤ＿８细胞对ＥＢＶ活化自身Ｂ细胞呈明显的抑制作用，但无明显细胞毒作用，对美洲商陆（ｐｏｋｅｗｅｅｄｍｉｔｏｇｅｎ，ＰＷＭ）活化自身Ｂ细胞无明显作用，且与刀豆蛋白Ａ（ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ，ＣｏｎＡ）诱导的Ｔｓ细胞对ＥＢＶ活化自身Ｂ细胞的作用完全相反。提示这种ＣＤ＿８细胞在诱导和作用上都具有ＥＢＶ特异性，可能是一种ＥＢＶ特异性Ｔｓ细胞。

EB病毒体外感染外周血单个核细胞的早期变化和综合检测观察系统的建立

本文用细胞培养、抗补体免疫酶、液体闪烁计数和酶联免疫吸附试验等方法,建立了EB病毒体外感染外周血单个核细胞早期变化的综合检测观察系统.结果表明,本系统可综合观察EB病毒体外感染B细胞早期的激活、增殖和分化的动力学变化过程,从而可反映EB病毒体外感染外周血单个核细胞早期过程中,免疫因素对其影响.本系统的建立,对EB病毒感染与机体细胞免疫功能和有关疾病关系的研究提供了较好的实验基础.

鼻咽癌病人及其患病风险者EB病毒与机体细胞免疫反应关系的研究——Ⅲ.鼻咽癌病人与不同IgA/VCA抗体滴度者外周血单个核细胞对EB病毒感染的早期免疫反应变化

为探讨鼻咽癌(NPC)病人与不同IgA/VCA抗体滴度者对EB病毒(EBV)的免疫反应功能变化关系,本文用EBV体外感染人外周血单个核细胞(PBMC)早期反应综合检测观察系统,测定了NPC病人,IgA/VCA高滴度者、低滴度者和阴性者的PBMC体外感染EBV时的早期反应变化.结果发现。

趋化因子受体CXCR4在鼻咽癌细胞中的表达

背景与目的:研究表明,趋化因子受体CXCR4及其配体SDF-1(stromalcell-derivedfactor1)与肿瘤的增殖、分化和转移等恶性表现密切相关。本研究通过观察分化程度和增殖能力不同的鼻咽癌细胞中CXCR4的表达,初步了解CXCR4与鼻咽癌细胞恶性表现的关系。方法:分别以全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,RA)和端粒酶反义核酸处理鼻咽癌CNE1(高分化)和CNE2Z(低分化)细胞,原位杂交技术检测CXCR4mRNA表达,免疫组化法检测CXCR4蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,MTT法检测细胞增殖能力。结果:CXCR4mRNA和CXCR4蛋白在鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞均呈强阳性表达,且CNE2Z细胞表达强度显著高于CNE1细胞。经1×10-5mol/L和1×10-4mol/LRA作用后,与对照组比较,CNE1细胞G1期细胞明显增多,CNE2Z细胞S期细胞明显增多,同时两者的CXCR4mRNA表达水平均显著低于对照组(P<0.01),其中1×10-4mol/LRA作用较1×10-5mol/LRA作用强(P<0.01)。经端粒酶反义核酸作用后,CNE1和CNE2Z细胞增殖均明显受抑制,CXCR4蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。结论:CXCR4在鼻咽癌细胞高表达,其表达水平与鼻咽癌细胞的分化程度和增殖能力有关。

苦参碱对人卵巢癌细胞株HO-8910PM增殖及侵袭运动能力的影响

目的研究苦参碱对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM增殖及转移相关能力的影响及其作用机制。方法以MTT法和台盼蓝拒染法检测苦参碱对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖的影响;Transwell小室法检测其对HO-8910PM细胞侵袭运动能力的影响;考马斯亮蓝染色法检测不同质量浓度苦参碱对HO-8910PM细胞细胞骨架的改变及免疫细胞化学方法检测药物作用前后HO-8910PM细胞Ezrin蛋白的表达。结果苦参碱对HO-8910PM细胞增殖抑制呈明显剂量和时间效应;1.5g/L苦参碱能明显抑制细胞的增殖,作用6h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和运动能力,抑制率分别为(41.52±10.76)%和(39.73±10.67)%;1.0、1.5g/L苦参碱作用HO-8910PM细胞24h后使细胞骨架明显改变,并上调Ezrin蛋白的表达。结论苦参碱能抑制高转移性人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖能力和侵袭运动能力,其抗肿瘤侵袭运动的机制与细胞骨架和Ezrin蛋白表达的改变有关。

端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的影响

背景与目的:近年研究表明,端粒及端粒酶与肿瘤发生密切相关。端粒酶反义寡核苷酸直接作用于端粒酶或诱导肿瘤细胞分化均可使端粒酶活性下降,抑制肿瘤生长。而用端粒酶反义寡核苷酸直接抑制端粒酶活性是否可引起肿瘤细胞再分化,尚不清楚。由于端粒DNA重复序列是以端粒酶RNA为模板合成的,因此端粒DNA可以和端粒酶正义寡核苷酸互补结合。这种结合是否也能影响肿瘤细胞的生长,值得研究。本研究正是要探讨端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的作用。方法:脂质体介导正、反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测细胞角蛋白表达,同时观察细胞形态学变化。结果:端粒酶正义寡核苷酸与反义寡核苷酸一样可抑制CNE1和CNE2Z细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性。1.5、3.0、4.5、6.0μmol/L正义寡核苷酸处理CNE1细胞,6h抑制率分别为16.28%、19.38%、22.48%和23.26%,48h分别达26.26%、38.89%、39.90%和38.89%;CNE2Z细胞6h抑制率分别为7.69%、8.24%、18.13%和20.32%,48h分别为28.84%、28.88%、32.89%和31.54%。正、反义寡核苷酸组细胞角蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞形态趋向分化成熟。结论:端粒酶正、反义寡核苷酸均可抑制鼻咽癌细胞的生长,并促进细胞分化。

漆树黄酮逆转人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的实验研究

目的研究漆树黄酮对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的影响及其可能机制。方法用不同浓度的漆树黄酮(50、100、200μmol.L-1)处理HepG2细胞;MTT法检测漆树黄酮对HepG2细胞的细胞毒作用;用Transwell小室法检测漆树黄酮对HepG2细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响,RT-PCR法检测p38MAPK、E-cadherin和vimentin mRNA表达,Western blot检测p38MAPK、E-cadherin和vimentin蛋白表达。结果漆树黄酮作用细胞24 h后能抑制HepG2细胞体外趋化运动和侵袭能力。漆树黄酮能引起HepG2细胞形态学的变化,能降低p38 MAPK和vimentin mRNA和蛋白表达,但不能改变E-Cadherin的表达。结论漆树黄酮能逆转人肝癌细胞HepG2的上皮间质转化,其抗肿瘤侵袭运动的机制可能与抑制p38MAPK的表达有关。

EGCG对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及E2F-1表达的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用CCK-8法检测EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖的影响;AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测EGCG的凋亡诱导作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测核转录因子E2F-1及其上游调控蛋白CyclinD1和p21的表达水平。结果 EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖明显受到抑制,其细胞凋亡率亦显著增高,呈量效关系;随着EGCG浓度增高,E2F-1 mRNA和蛋白表达水平明显下降,其上游调控蛋白CyclinD1的表达亦明显下调,而p21的表达则明显上调。结论 EGCG可明显抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,可能与其直接或间接下调核转录因子E2F-1有关,CyclinD1和p21参与其调控。

海洋来源的口蛄虾生物碱的分离纯化和抗鼻咽癌作用研究

目的从海洋来源的口蛄虾中提取并纯化该生物碱,研究其抗鼻咽癌作用。方法系统溶剂法初步分离口蛄虾乙醇粗提物,大孔树脂HP20层析分离正丁醇洗脱的组分;对富含生物碱的组分合并后萃取总生物碱;自动层析仪纯化总生物碱,254 nm波长检测,手动收集洗脱液;质谱仪分析生物碱分子量;MTT方法检测药物对细胞的生长抑制率,绘制细胞生长曲线。结果大孔树脂HP20能非常有效地富集分离的生物碱,质谱分析纯化的生物碱D3分子量为234.33。分离纯化的生物碱对鼻咽癌细胞增殖具有明显的抑制作用。结论口蛄虾来源的生物碱分子量为234.33,对鼻咽癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈时间-剂量关系。

口虾蛄提取物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨口虾蛄提取物(EOS)对人鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立CNE-2Z裸鼠移植瘤模型,腹腔给药,然后观察不同剂量EOS对CNE-2Z裸鼠移植瘤生长的影响。结果对照组及400mg/kgEOS组裸鼠移植瘤成瘤率均为100%(8/8),而800mg/kg、1600mg/kgEOS组成瘤率分别为87.5%(7/8)及62.5%(5/8),成瘤率有随EOS剂量增高而下降的趋势;同时随EOS剂量的增高,裸鼠移植瘤生长速度减慢,平均瘤质量也有降低的趋势,其中800mg/kgEOS组抑瘤率达57.1%。结论EOS对CNE-2Z裸鼠移植瘤的生长可能具有一定的抑制作用。

EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞P53蛋白表达的影响

目的研究EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)对鼻咽癌细胞P53蛋白表达的影响。方法将LMP1基因真核表达质粒转染至鼻咽癌CNE1细胞,脂质体介导端粒酶反义核酸处理转染细胞,MTT法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测LMP1和P53蛋白表达,原位杂交技术检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达。结果对照组,转染并表达LMP1基因的细胞的增殖能力、P53蛋白和hTERTmRNA表达水平均显著高于未转染细胞和转染空载质粒的细胞。端粒酶反义核酸作用组,LMP1基因转染细胞的LMP1蛋白表达水平显著低于对照组(P<001);LMP1基因转染细胞与未转染细胞和转染空载质粒的细胞的增殖能力、P53蛋白和hTERTmRNA表达水平均显著低于对照组(P<001),但LMP1基因转染细胞的增殖能力和P53蛋白表达水平仍显著高于未转染细胞和转染空载质粒的细胞(P<001)。结论EB病毒LMP1可促进鼻咽癌细胞P53蛋白的表达。

漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2增殖、生长周期和细胞凋亡的影响

目的观察漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法研究漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布。结果 MTT实验结果表明较高浓度的漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,200μmol.L-1的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2细胞72 h后,对细胞生长的抑制率最高可达53.78%,同对照组相比(P<0.01);流式细胞术实验结果表明,不同浓度的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2 12 h后,可使G1期肿瘤细胞增多,引起G1期阻滞,作用时间为24 h、48 h时,则可引起S期阻滞;同时,不同浓度的漆树黄酮在不同的时间点都可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰。结论漆树黄酮具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,其机制可能与引起细胞周期阻滞和诱导凋亡有关。

苦参碱抑制大鼠肺成纤维细胞增殖及其机制

目的观察苦参碱(Mat)对大鼠肺成纤维细胞增殖及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响。方法体外培养新生Wistar大鼠的肺成纤维细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态;四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期;免疫荧光测定FN的蛋白含量。结果不同浓度苦参碱处理36h后,细胞MTT-OD值呈递减趋势,S期细胞百分率下降,G0/G1期百分率上升,FN的表达下降,且成剂量依赖性,与空白组相比,差异有显著性(P<0.01)。结论苦参碱可抑制大鼠肺成纤维细胞增殖,其作用与降低FN表达有关。