分层教学模式在检验医师规范化培训临床分子生物学教学中的应用

由于临床分子生物学内容抽象,操作步骤相对复杂,同时住院医师学历和临床工作背景不同,该院采用有针对性的培训计划和培养目标进行分层教学,并建立住院医师临床分子生物考核题库进行分层考核,采用多元化评价体系对培训效果进行评价。这一教学模式在检验医学科住院医师规范化培训中取得了较好的效果,为提高检验医师规范化培训质量提供了新思路。

LINC00511和LINC01133诊断老年胃癌的临床价值

目的探讨老年胃癌患者血清长基因间非蛋白编码RNA(LINC)00511和LINC01133的表达及与临床特征的关系,分析二者单项及与糖类抗原(CA)72-4联合检测对老年人胃癌的临床诊断价值。方法选取老年胃癌患者100例作为实验组,再选取同期老年健康体检者76例作为对照组,通过定量逆转录聚合酶链反应检测血清LINC00511和LINC01133的表达,分析二者血清表达水平的相关性及与肿瘤临床特征的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估其对胃癌的临床诊断效能;通过计算ROC曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值,评估单项及联合检测的临床应用价值。结果实验组LINC00511和LINC01133表达量显著高于对照组(均P<0.01),实验组二者表达水平呈显著正相关(r=0.304,P<0.01)。LINC01133血清水平与性别、TNM临床分期和淋巴结转移均无统计学差异(P>0.05),但与肿瘤合并远处转移呈正相关(P<0.01)。LINC00511、LINC01133及CA72-4诊断胃癌的AUC分别为0.659、0.807和0.764,其中LINC01133诊断的敏感度(81.0%)最高,CA72-4诊断的特异度(84.2%)最高。LINC00511与LINC01133具有显著诊断互补性(P<0.05)。而LINC00511和CA72-4、LINC01133和CA72-4之间均无显著互补性(P>0.05)。LINC00511和LINC01133联合可将诊断的敏感度提高至92.0%,二者与CA72-4联合可将敏感度和阴性预测值分别提高至94.0%和85.7%。结论LINC00511和LINC01133在老年胃癌患者血清中高表达,与临床进展显著相关,可能是老年胃癌辅助诊断的潜在血清学标志物。

长链非编码RNA调控胃癌转移的研究进展

胃癌是消化系统常见的癌症,致死率较高。肿瘤细胞发生远处转移是导致治疗失败和患者死亡的主要原因之一。寻找胃癌转移的治疗靶点,对于提高患者的生存率意义重大。最近大量研究表明长链非编码RNA(LncRNA)与胃癌的转移密切相关,它们参与了胃癌转移的多种生物学过程。该文对LncRNA调控胃癌转移的研究进展进行综述,旨在为理解胃癌转移的发生机制提供理论基础。

三阴性乳腺癌患者血清HOTAIR、GAS5、MALAT1表达变化及其意义

目的探讨三阴性乳腺癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)、生长停滞特异性RNA5(GAS5)、肺腺癌转移相关转录子1(MALAT1)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择35例三阴性乳腺癌患者为观察组、29例健康体检者为对照组,观察组患者入院时、对照组患者体检时收集血清,采用实时荧光PCR法检测HOTAIR、GAS5、MALAT1水平。分析血清HOTAIR、GAS5、MALAT1水平与患者临床病理参数的关系。结果两组血清HOTAIR相对表达量相比,P>0.05。观察组血清GAS5相对表达量低于对照组(P<0.05),MALAT1相对表达量高于对照组(P<0.05)。观察组患者血清GAS5相对表达量与患者TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄无关(P>0.05)。MALAT1与GAS5相同。结论三阴性乳腺癌患者血清GAS5表达量低于健康人,血清MALAT1表达量高于健康人,血清HOTAIR表达量与健康人无差异。检测三阴性乳腺癌患者血清GAS5、MALAT1表达量有助于三阴性乳腺癌的诊断和病情判断。

microRNA-21、microRNAlet-7a在三阴性乳腺癌与LuminalA型乳腺癌血清中的表达差异

目的:探讨micro RNA-21、micro RNAlet-7a在三阴性乳腺癌与Luminal A型乳腺癌中的差异及与临床参数间相关性,为三阴性乳腺癌的治疗提供分子靶点。方法:收集三阴性、Luminal A型乳腺癌各33例以及健康者血清29例,通过q PCR检测血清中micro RNA-21、let-7a的表达情况。结果:micro RNA-21在三阴组血清中表达高于Luminal A组(P<0.05)及正常组(P<0.05)。Let-7a在三阴组血清中表达低于正常组(P<0.05)。三阴组血清中micro RNA-21高表达与临床分期晚呈正相关(P>0.05)。结论:micro RNA-21在Luminal A型与三阴性乳腺癌中的表达差异可作为三阴性乳腺癌特异性治疗的候选靶点。

ubiquilin 4相互作用蛋白的鉴定

目的筛选、鉴定与ubiquilin 4相互作用的蛋白,探讨ubiquilin 4在肿瘤发生、发展中的作用机制。方法利用细胞免疫荧光技术,确定外源及内源ubiquilin 4在MKN45细胞中的定位;构建含有UBQLN4和GST标签的原核表达载体p GEX-UBQLN4,将其转化至大肠杆菌中,6 h后收集蛋白。运用标签纯化ubiquilin 4,利用GST-pull down技术寻找差异条带,再进一步应用蛋白质谱技术鉴定蛋白,并通过免疫共沉淀法进行验证。结果免疫荧光显微镜显示,外源及内源ubiquilin 4均主要定位于细胞核和细胞质。通过纯化及蛋白质谱分析技术鉴定发现,MYH9蛋白与ubiquilin 4存在相互作用。结论 MYH9蛋白与ubiquilin 4存在相互作用,可能为阐明ubiquilin 4在肿瘤发生、发展中的作用机制提供重要的依据。

恶性肿瘤患者出现单纯凝血酶时间明显延长的原因探讨

恶性肿瘤通常伴有机体的高凝状态，是血栓形成的高危因素，而血栓形成也是恶性肿瘤严重的并发症之一[1]。但凝血指标中与凝固时间相关的指标，如凝血酶时间（thrombin time，TT）、凝血酶原时间（prothrombin time，PT）和活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）在肿瘤患者中多表现为正常或缩短，TT明显延长或“不凝固”报警的病例较为罕见。本研究报道1例肺下叶癌伴淋巴结肿大并且进行了放疗、化疗的患者凝血功能检验结果中出现单纯TT延长的情况。

过表达长非编码RNA SLC25A25-AS1可抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭

长非编码RNA SLC25A25-AS1在结直肠癌的发展中具有肿瘤抑制作用,然而,其在宫颈癌中作用机制有待深入研究。本文研究了宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)病人血清中SLC25A25-AS1的异常表达,并探讨了SLC25A25-AS1在宫颈癌发展中可能的作用机制。采用RT-qPCR检测正常对照组,宫颈癌病人和CIN病人血清中SLC25A25-AS1的表达水平。在体外和体内研究中分析了SLC25A25-AS1在宫颈癌系HeLa细胞中的重要作用。与健康对照组相比,宫颈癌病人血清中的SLC25A25-AS1含量降低。在体外,SLC25A25-AS1的过表达抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭。体内裸鼠成瘤实验表明,注射过SLC25A25-AS1过表达的HeLa细胞的裸鼠皮下肿瘤的重量和体积明显小于注射对照细胞的裸鼠(P<0.05)。SLC25A25-AS1在宫颈癌的发生发展中可能发挥重要作用,有望成为宫颈癌的新治疗靶点。

NAIF1对胃癌细胞中IFIT家族蛋白的影响

目的探讨核诱导凋亡因子NAIF1在胃癌细胞系MKN45中的功能。方法构建带有Tet-on系统的质粒pLVX-Tight-Flag-NAIF1-puro,在胃癌细胞系MKN45中,加入四环素衍生物强力霉素(Dox)诱导NAIF1表达,分别在加入Dox之后0、6、12、24 h收取细胞进行基因表达谱芯片检测,对差异表达的基因进行生物学分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot技术验证筛选的目的差异基因在mRNA和蛋白水平上的变化。结果基因芯片测定结果显示干扰素诱导蛋白(IFIT)家族基因分子IFIT1、IFIT2和IFIT3在第24 h表达量明显增加,qRT-PCR同样表现出该变化,Western blot在蛋白水平进一步验证了该变化。IFIT家族另一成员IFIT5在mRNA和蛋白水平表达量的变化趋势并不明显。结论胃癌细胞中过表达NAIF1能够促进免疫系统相关的部分干扰素诱导蛋白(IFIT)家族蛋白的表达。

千万富姐“包养”千亩荒山的背后

她7岁丧父，只读了小学二年级。上世纪90年代，她组团卖水果，被当时的媒体称为新时期的“红色娘子军”。挣到第一桶金后，她又开起了宾馆，挣了上千万元。身家千万的她在4年前做了一个惊人的决定：找了一片荒山，花巨资租了下来，她准备干什么？又将会发生什么事？

注重发展养殖业 加快新农村建设

恭城县以养殖为龙头,沼气为纽带,种植为重点的"三位一体"生态农业闻名区内外。多年来,恭城县高度重视养殖业的发展,坚持常抓养殖业促进农民增收不放松,有效地促进了恭城农村经济建设,为社会主义新农村建设打下了良好基础。

血清miR-378和miR-21联合检测对胃癌的诊断价值

目的探讨血清miR-378和miR-21联合检测对胃癌的临床诊断价值。方法选择中国医学科学院肿瘤医院经病理确诊的胃癌患者87例，结直肠癌患者78例，健康体检者83例，采用实时荧光定量PCR法检测血清样本中miR-378和miR-21的表达水平（以log2对结果进行转换）。结果miR-378在健康对照者、胃癌患者和结直肠癌患者血清中的相对表达水平分别为－1.24、－3.25和－2.73，miR-378在胃癌和结直肠癌患者血清中的相对表达水平明显低于健康对照者（均P〈0.05）。miR-21在健康对照者、胃癌患者和结直肠癌患者血清中的相对表达水平分别为0.11、2.34和2.47，miR-21在胃癌和结直肠癌患者血清中的相对表达水平明显高于健康对照者（均P〈0.05）。胃癌患者血清中miR-378的低表达与肿瘤的临床分期有关（P〈0.05），分期越晚，下降程度越大；而miR-21在胃癌患者血清中的升高程度与患者的临床病理特征无关（均P〉0.05）。血清miR-378诊断胃癌的曲线下面积（AUC）为0.770，灵敏度为82.0%，特异度为66.0%；miR-21诊断胃癌的AUC为0.900，灵敏度为85.0%，特异度为88.0%；miR-378＋miR-21诊断胃癌的AUC为0.930，灵敏度为92.0%，特异度为87.0%。CEA＋CA-199诊断胃癌的AUC为0.767，CEA＋CA-199＋miR-378＋miR-21诊断胃癌的AUC为0.946。结论联合检测血清中miR-378和miR-21的表达对胃癌具有一定的诊断效能。

微小RNA-4491在胃癌血清中的表达及其临床意义

目的检测微小RNA-4491(miR-4491)在胃癌患者血清中的表达水平,分析其与胃癌临床病理特征的相关性,探讨其单独检测及其与CA72-4联合检测在胃癌诊断中的临床价值。方法实时荧光定量聚合酶链反应检测胃癌患者和健康受试者血清中miR-4491的表达水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线、曲线下面积(AUC)、危险分数分析法评估miR-4491对胃癌的诊断效能,计算灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV),探讨miR-4491独立及与CA72-4联合检测在胃癌诊断中的应用价值。结果胃癌组和健康对照组血清miR-4491的相对表达水平分别为3.65±4.04和1.29±1.21,二者比较,差异有统计学意义(P<0.01),miR-4491的表达量与胃癌临床分期、淋巴结及远处转移均不相关(P>0.05),但与其病理分化程度呈负相关(P<0.05)。miR-4491独立检测诊断胃癌的AUC为0.78,敏感度、特异度、PPV、NPV分别为84.5%,59.4%,74.0%和72.9%,而CA72-4诊断胃癌的AUC为0.71,敏感度、特异度、PPV和NPV分别为20.9%,78.3%,51.9%和47.0%。MiR-4491与CA72-4联合诊断的AUC为0.83,PPV和NPV分别提高至87.1%和89.7%。结论miR-4491在胃癌血清中高表达,是胃癌临床筛查的潜在血清学标志物。

组织蛋白酶D增强胃癌细胞对顺铂敏感性的研究

[目的]探讨组织蛋白酶D（CTSD）能否增强胃癌细胞对顺铂的敏感性及其机理,从而为临床胃癌的化疗开辟一条新路径。[方法]通过慢病毒将CTSD及其酶活性失活突变体231N稳定整合到胃癌细胞株MKN45中,运用MTT法、流式细胞术、Western blot等技术,观察转染前后各组肿瘤细胞的存活率、凋亡、凋亡蛋白表达的改变。[结果]与相同浓度作用下的对照组相比,CTSD、231N联合顺铂对细胞存活率的抑制更明显;与对照组相比,CTSD、231N联合顺铂诱导细胞凋亡能力明显增加;Western blot结果显示,CTSD、231N联合顺铂组cleaved caspase 3、cleaved caspase 9表达增加,而代表死亡受体途径的procaspase 8无变化。[结论 ]与单一顺铂作用相比,CTSD、231N联合顺铂抑制MKN45细胞存活率、诱导细胞凋亡能力更强,这一作用是通过线粒体途径发挥作用的。

化学发光微粒子免疫分析法在梅毒感染筛查中的效能分析

目的探讨化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测梅毒抗体用于梅毒感染筛查的效能。方法用1份低值血清和1份高值血清对CMIA检测血清梅毒抗体进行精密度评价;将梅毒抗体标准品稀释至临界值附近,对CMIA法检出限进行验证;阴性、阳性样本以不同比例混合,对cut-off值附近的重复性进行验证。对CMIA法检测阳性标本进行TP-PA确证,同时进行RPR试验,此外对CMIA法检测阴性的384例标本进行TP-PA检测,评价CMIA检测梅毒抗体的检测效能。结果CMIA检测梅毒抗体的批内和批间精密度CV均<8%,检出限为4NCU/ml,cut-off值附近样本重复性结果显示低于cut-off值20%的20份样本均为阴性,高于cut-off值20%的20份样本均为阳性。38902例血清样本经CMIA检测615例梅毒抗体阳性,其中TP-PA阳性为401例,RPR阳性为110例。384例CMIA检测阴性样本经TP-PA验证后均为阴性。结论CMIA法可用于有效筛查梅毒感染,但对于弱阳性结果应进一步验证。

NAIF1对肝癌细胞HepG2增殖与迁移能力的影响

目的:在肝癌细胞Hep G2中过表达外源NAIF1(核凋亡诱导因子1),探讨NAIF1的亚细胞定位以及对Hep G2增殖和迁移能力的影响。方法:以真核表达质粒p EGFP-N1为对照组,p EGFP-N1-NAIF1为实验组,瞬时转染肝癌细胞Hep G2,利用免疫印迹方法检测NAIF1蛋白表达效率;以DAPI染核,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白定位,确定NAIF1的亚细胞定位;通过MTT方法绘制细胞增殖曲线;通过transwell小室法检测NAIF1对Hep G2迁移能力的影响。结果:在肝癌细胞Hep G2中,外源表达NAIF1主要定位于细胞核;与对照组Hep G2/p EGFP-N1相比,Hep G2/p EGFP-N1-NAIF1的细胞增殖、迁移能力下降(P<0.05)。结论:外源表达NAIF1蛋白定位于Hep G2细胞核,过表达NAIF1抑制Hep G2的细胞增殖与迁移能力,NAIF1可能作为肝癌治疗的潜在靶点。

粪便多靶点DNA与粪便潜血联合检测技术对结直肠癌早诊早筛的诊断价值分析

目的探讨多靶点粪便DNA与粪便潜血(FIT-DNA)联合检测技术对结直肠癌及进展期腺瘤的临床诊断价值。方法纳入中国医学科学院肿瘤医院2021年4月至2022年1月拟行肠镜检查的门诊筛查患者及结直肠外科待手术的肠癌患者235例,其中男141例,女94例,年龄22~86(55±13)岁。包括初诊未治疗组215例(结直肠癌患者86例、进展期腺瘤患者12例、非进展期腺瘤患者25例、一般性息肉患者8例、表观健康人84名)和干扰组20例(既往行结直肠癌根治术患者2例、既往行内镜黏膜剥离术患者6例、非肠癌的特殊疾病患者4例以及行新辅助放化疗的肠癌患者8例)。取肠道准备前的新鲜粪便样本进行FIT-DNA联合检测,样本处理和核酸纯化采用FIT-DNA检测试剂盒;采用荧光探针法检测KRAS突变和BMP3、NDRG4基因甲基化;采用免疫法检测便潜血。以结直肠镜或病理活检结果为金标准,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估FIT-DNA联合检测技术对结直肠癌及进展期腺瘤的筛查及诊断效能。结果FIT-DNA联合检测技术对早期结直肠癌和进展期腺瘤的筛查灵敏度分别为7/7和8/12,阴性预测值分别为98.1%(104/106)和93.7%(104/111);对早期结直肠癌和进展期腺瘤的总体筛查灵敏度为15/19,阴性预测值为96.3%(104/108);曲线下面积(AUC)分别为0.982(95%CI:0.960~1.000,P<0.05)、0.758(95%CI:0.592~0.924,P<0.05)和0.841(95%CI:0.724~0.957,P<0.05)。FIT-DNA联合检测技术对结直肠癌的诊断灵敏度为98.8%(85/86),对进展期腺瘤的诊断灵敏度为8/12,对结直肠癌和进展期腺瘤的总体诊断灵敏度为94.9%(93/98),特异度为88.9%(104/117);AUC分别为0.968(95%CI:0.937~0.997,P<0.05)、0.758(95%CI:0.592~0.924,P<0.05)和0.942(95%CI:0.905~0.979,P<0.05)。纳入干扰组后,FIT-DNA联合检测技术的总体诊断灵敏度为91.6%(98/107),特异度为89.1%(114/128)。结论FIT-DNA联合检测技术对结直肠癌具有较高的早期筛查效能和诊断效能。