多杀性巴氏杆菌重组Dot蛋白对小鼠免疫保护效果研究

为评估猪多杀性巴氏杆菌(Pm)毒力蛋白Dot诱导小鼠产生的免疫保护效果,本研究根据GenBank登录的A型Pm CS株dot基因序列设计特异性引物,以CS株基因组DNA为模板经PCR扩增dot基因片段,PCR产物测序后利用生物信息学软件进行序列分析。结果显示,dot基因长729 bp,编码含242 aa的膜蛋白;该蛋白的N端有一个24 aa组成的信号肽,具有重复Sel 1结构功能域,属于四肽重复超家族;抗原表位分析显示,Pm Dot蛋白含有6个抗原表位;序列同源性分析显示,不同血清型Pm Dot蛋白氨基酸序列的同源性达99%以上。将dot基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中构建重组表达质粒pET-dot,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,采用His纯化柱纯化后,经SDS-PAGE检测并采用western blot鉴定。结果显示,重组Dot蛋白(rDot)正确表达,且纯化效果较好,具有较强的反应原性。取40只4周龄BALB/c小鼠随机均分为5组进行免疫保护实验,3个实验组分别于0、2周、4周对小鼠通过背部皮下多点注射弗氏不完全佐剂(IFA)+10μg rDot(低剂量组)、IFA+30μg rDot(中剂量组)、IFA+50μg rDot(高剂量组)。两个对照组分别注射等量生理盐水和IFA。共免疫3次,每次间隔2周,小鼠于免疫前和攻毒前,均经尾静脉采血并分离血清,采用ELISA检测血清中IgG抗体水平。第3次免疫后2周,通过腹腔注射10×LD_(50)的A型Pm CS株攻击小鼠,观察攻毒后小鼠的临床症状及死亡情况。结果显示,生理盐水和IFA组小鼠抗体水平无显著差异;实验组小鼠二免后2周和三免后2周IgG抗体水平均极显著高于两个对照组(P<0.01)。攻毒后3 d,对照组小鼠全部死亡,低剂量、中剂量、高剂量组小鼠存活率分别为12.5%(1/8)、50%(4/8)、62.5%(5/8)。攻毒后5 d存活小鼠逐渐恢复并正常采食。本研究表明,rDot具有很好的免疫原性,可诱导小鼠产生部分免疫保护力。该研究为Pm Dot亚单位疫苗的研究积累了基础资料。

檀香醇对金黄色葡萄球菌CS株抑菌活性和机制的研究

为了探讨檀香醇对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sa)的抑菌效果和机制,试验以Sa CS株为研究对象,采用倍比稀释法测定檀香醇对Sa CS株的50%最低抑菌浓度(50%minimum inhibitory concentration,MIC50);采用寇氏法计算Sa CS株对小鼠的半数致死量;将40只4周龄的昆明小鼠随机分为4组,先用半数致死量的细菌滴鼻攻毒,各组小鼠每只腹腔注射32,64,128μg/mL的檀香醇0.2 mL,以未经檀香醇处理的小鼠作为对照,正常饲喂4 d,观察小鼠存活情况,试验结束时处死全部小鼠,取肺部组织进行细菌计数,测定檀香醇的体内抑菌效果。以未经檀香醇处理的细菌作为对照,利用SDS-PAGE检测16,32,64,128μg/mL檀香醇对Sa CS株可溶性蛋白表达的影响;采用实时荧光定量PCR方法检测32μg/mL檀香醇对Sa CS株细胞分裂基因和核糖体基因表达的影响。结果表明:檀香醇对Sa CS株的MIC50为32μg/mL。对照小鼠4 d内全部死亡,经32,64,128μg/mL檀香醇处理的小鼠分别存活5,7,9只;檀香醇处理小鼠的肺部细菌数显著或极显著低于对照小鼠(P<0.05或P<0.01)。与对照相比,经64,128μg/mL檀香醇处理6 h后菌体的可溶性蛋白表达量降低。与对照相比,经檀香醇处理的Sa CS株细胞分裂基因ftsZ相对表达量极显著降低(P<0.01);核糖体基因rpsJ相对表达量显著下调(P<0.05),rplB和rpoE基因相对表达量极显著下调(P<0.01),rpsO、rpsA、rpsS和rpsI基因相对表达量极显著上调(P<0.01),rpsC、rpmJ和rplD基因相对表达量差异不显著(P>0.05)。说明檀香醇对Sa CS株具有体内体外抑菌活性,其抑菌机制可能是通过降低Sa CS株的细胞分裂基因、扰乱核糖体基因的表达影响蛋白质表达实现的。

重组日本血吸虫铁蛋白粘膜免疫诱导小鼠保护力的研究

目的 探讨重组日本血吸虫铁蛋白 (r Sj Fer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫的保护性免疫。 方法 实验鼠分为 8组 ,每组 10只 ,包括 r Sj Fer、霍乱毒素 B亚单位 (CTB)和 r Sj Fer+CTB灌胃免疫组 ,以及 r Sj Fer、CTB和r Sj Fer+CTB滴鼻免疫组 ,PBS灌胃及滴鼻对照组。在第 3次免疫后 2 wk,经腹部感染日本血吸虫尾蚴 4 0± 1条 ,4 5d后解剖观察减虫率和减卵率。在免疫前和感染前尾静脉采血和取粪样 ,EL ISA检测血清 Ig A、Ig G及粪内 s Ig A水平。 结果 灌胃及滴鼻各组减虫率依次为 3.98%、3.77%、2 5 .5 7%及 7.6 9%、4 .5 0 %、33.35 % ,每克肝减卵率依次为3.76 %、2 .4 6 %、34.75 %及 4 .4 0 %、0 .0 6 %、6 0 .10 %。 结论 r Sj Fer粘膜免疫能诱导小鼠产生抗血吸虫的保护性免疫。

核酸疫苗pcDNA3.1/SjTs-1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究

目的 探讨日本血吸虫核酸疫苗 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。方法 小鼠随机分为 5组 ,每组 12只 ,包括单磷脂 A(MPL)、pc DNA3.1、pc DNA3.1+MPL、pc DNA3.1/ Sj Ts- 1和 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1+MPL 组。滴鼻免疫。第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 (40± 1)条尾蚴。 4 5 d宰杀动物 ,以观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血和收集粪便 ,EL ISA检测血清内特异性 Ig A和 Ig G及粪内 s Ig A水平。结果 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1滴鼻免疫可诱导小鼠产生全身和粘膜免疫应答 ,且疫苗加佐剂组诱导小鼠产生的抗体水平高于不加佐剂组。 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1和 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1加 MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为2 4 .98%和 2 5 .5 7% ,减卵率分别为 6 1.4 4 %和 6 4 .5 9%。两者的减虫率和减卵率差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 pc DNA3.1/ Sj Ts- 1滴鼻免疫可诱导小鼠产生全身和粘膜免疫应答及部分抗攻击感染的保护力。

植物基因工程疫苗研究进展

植物基因工程疫苗是现代疫苗学研究中的一个热点,它具有价廉、安全、有效、易于运输与保存等优点.综述了国内外植物基因工程疫苗在临床应用、表位疫苗学研究和表达体系方面的研究进展.

3个日本血吸虫新基因的克隆和分析

为获得新的可表达保护性抗原分子的编码基因 ,以重复感染兔血清为探针 ,筛选日本血吸虫成虫 c DNA文库 ,对获得的阳性克隆进行 PCR鉴定并测序后 ,通过互联网将测序结果进行同源性分析 ,并对新基因的编码阅读框及其编码蛋白质的结构及功能进行预测。 3个日本血吸虫新基因 IR1、IR2、IR3在 Gen Bank的登录号分别为 AY1 70 31 3、AY1 73930、AY2 5 1 4 81。 BL AST分析结果表明 ,它们与 Gen Bank中其他基因无显著的同源性。其中 IR3为全基因 ,含897个碱基 ,编码 2 99个氨基酸 ,推测等电点 ( p I)为 6 .0 9,相对分子质量约为 331

果子狸脊髓、小脑形态学的初步观察

本文通过对５ 只果子狸的脊髓、小脑的大体解剖及组织学研究，结果表明：果子狸脊髓小脑的形态结构与其他高等哺乳动物的基本相似，但由于对环境的适应及各种复杂的行为，某些结构出现了一些适应性的变化。

中华竹鼠肾上腺的组织学观察

对 9只成年中华竹鼠肾上腺的形态进行了组织学观察 ,结果表明 :肾上腺位于肾脏外缘前部 ,呈半月形 ,表面包有被膜 ,实质分为皮质和髓质部 .皮质部分 3个带 :多形带、束状带、网状带 .髓质部分为外区和内区 ,外区为肾上腺素细胞 ,内区为去甲肾上腺素细胞 ,并有少数交感神经节细胞分散在其中 .嗜银颗粒细胞在网状带内分布较多 。

日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆和分析

为筛选新的有潜在保护性的抗原分子编码基因 ,采用重复感染兔血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,将阳性克隆的插入序列进行了PCR扩增和序列分析。结果发现 ,所筛选的阳性克隆中有 2个为日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因 (SPI)。序列分析表明 ,它可编码分子质量为 4 .6ku ,等电点为 5 .76的蛋白 ,与GenBank中日本血吸虫SPI基因 (大陆株 )、曼氏血吸虫SPI基因和埃及血吸虫SPI基因编码的氨基酸序列的同源性分别为 98%、6 2 %和 6 2 %。TMpred分析表明 ,该蛋白具有 2个明显的跨膜区即 36～ 5 5和 35 6～ 372位氨基酸。

核酸疫苗SjCA/pc和SjMf1/pc在小鼠体内的表达

为了观察核酸疫苗 Sj CA / pc和 Sj Mf1/ pc在小鼠体内的表达 ,取昆明鼠 ,于其后腿外侧肌注免疫 Sj CA/ pc和 Sj Mf1/ pc,2 d后剖杀动物 .取注射部位肌肉作石蜡切片 ,免疫组化分析 ,荧光显微镜下镜检 .结果表明 ,Sj CA/ pc和 Sj Mf1/ pc在小鼠注射部位肌肉可见黄绿色荧光 ,而对照组无此现象 .可见 ,Sj CA/ pc和 Sj Mf1/ pc可在小鼠体内表达 .

日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3.1/SjMf1粘膜免疫小鼠的保护力研究

目的 探讨日本血吸虫核酸疫苗pcDNA3 1/SjMf1粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。 方法 按常规方法构建pcDNA3 1/SjMf1。粘膜免疫采用滴鼻方法。供试小鼠随机分为 5组 ,每组 12只 ,包括MPL、pcDNA3 1、pcDNA3 1+MPL、pcDNA3 1/SjMf1和pcDNA3 1/SjMf1+MPL组。第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 ( 4 0± 1)条尾蚴。45d宰杀小鼠 ,以观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血的收集粪便 ,ELISA检测血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平。 结果 pcDNA3 1/SjMf1滴鼻免疫可诱导小鼠血清内特异性IgA和IgG及粪内sIgA水平。pcDNA3 1/SjMf1和pcDNA3 1/SjMf1加MPL滴鼻免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为 2 7 97%和 3 4 75 % ,减卵率分别为 3 8 64 %和 43 3 7%。二者的减虫率和减卵率差异无显著性 (P >0 0 5 )。 结论 pcDNA3

大学生科技创新活动中实施研究性学习的策略与实践

开展大学生科技创新活动,对于培养大学生的科技创新意识,提高大学生的科技创新能力都具有极其重要的意义。大学二年级和三年级学生是大学生科技创新项目的主要参与者,根据参与人员的特点,为了更好地发挥大学生科技创新项目在大学生科技创新培养中的作用,作者提出:(1)大学生科技创新项目实施过程中教师应注意通过引导学生研究性学习进行创新性教育;(2)在学生研究性学习过程中明确创新教育的培养目标和重点;(3)本科科技创新项目实施过程中应注意创造一个创新性教育和研究性学习的良好环境。

山羊肝片吸虫病致胆管病变的病理形态学研究

为了进一步了解肝片吸虫病致羊胆管的病变，眼观及组织病理学研究结果表明，肝片吸虫所致胆管病变可分为4类：单纯慢性增生性胆管炎、腺体增生性胆管炎、腺体瘤样增生性胆管炎以及管壁的机械损伤。胆管的病变类型与肝片吸虫病的病程似无明显的对应关系。此外，在胆管的病变中还可见玻璃滴细胞。并讨论了胆管病变发生的机理。

山羊肝片吸虫致肝脏病变的病理形态学研究

为了明确肝片吸虫致山羊肝脏病变的发病机理，本文对112例肝片吸虫感染的浏阳黑山羊肝脏的自然病例进行了眼观及组织病理学研究。结果表明，肝片吸虫致肝脏的病变可分为：肝细胞的脂肪变性、出血性肝炎、化脓性肝炎、慢性间质性肝炎和肝硬变5种类型。它们的发生率分别为75．9％、14．3％、27．7％、41．1％和9．6％。讨论了病变产生的原因。

山羊肝片吸虫病所致肝淋巴结病变病理形态学研究

为揭示肝片吸虫的致病作用，对１１２例自然感染肝片吸虫病山羊的肝淋巴结进行了眼观及组织病理学研究．结果表明，肝片吸虫病所致山羊肝淋巴结的病变分为３种类型，即浆液性淋巴结炎、慢性增生性淋巴结炎和纤维性淋巴结炎．少数病例表现为混合型．３种类型病变的检出率分别为４４％，２１％和８％．

浏阳黑山羊胰吸虫病和血矛线虫病病理形态学研究

为探讨浏阳黑山羊胰阔盘吸虫病和捻转血矛线虫病的致病规律，进行了这两种寄生虫病的病理形态学研究．结果表明，浏阳黑山羊胰阔盘吸虫所致胰导管的病变分为３种类型：慢性增生性炎、腺体增生性炎以及由于虫体大量寄生时所致的胰导管壁的萎缩．捻转血矛线虫所致真胃的病变分为腺体增生性胃炎、腺体瘤样增生性胃炎和化脓性胃炎３种类型，这３种病变与寄生虫寄生的多少似无明显的对应关系．在胰阔盘吸虫致胰导管的病变及捻转血矛线虫致真胃的病变中。

重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究

目的 探讨重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。 方法 实验小鼠分成 4组 ,每组 11只 ,包括CTB、rSjGST2 6+CTB、rSjGST -CA +CTB滴鼻免疫组和PBS滴鼻免疫为对照组。在第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 (4 0± 1)条尾蚴。 45d宰杀动物 ,观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前采集唾液和尾静脉采血 ,ELISA检测血清及唾液内特异抗体水平。 结果 血清特异IgA和IgG及唾液内sIgA水平升高。rSjGST -CA +CTB和rSjGST2 6+CTB滴鼻免疫组减虫率分别为 2 9 62 %和 3 1 5 5 %。每克肝减卵率分别为 45 0 0 %和63 3 4%。

日本血吸虫候选疫苗免疫保护力研究进展

血吸虫病是危害严重的寄生虫病之一,其疫苗的研究是血吸虫病防治的一项工作重点也是一大难题。本文综述了日本血吸虫疫苗侯选分子筛选、模拟表位疫苗和多价疫苗的研究现状,并对血吸虫疫苗的深入研究进行了分析。