妊娠期甲状腺功能减退对大鼠子代认知功能的影响

目的通过实验性甲减妊娠大鼠模型的建立,初步探讨妊娠期甲减和药物干预对大鼠子代认知功能的影响。方法选取SD雌性大鼠20只随机分为对照组(CON组)和甲减组(PTU组),采用丙硫氧嘧啶(PTU)建立甲减模型,电化学发光免疫法检测雌鼠甲状腺激素水平,比较两组指标差异。造模成功后与雄鼠合笼交配,将甲减组孕鼠再随机分为孕期未干预组(Ⅰ组)、孕早期干预组(Ⅱ组)和孕中晚期干预组(Ⅲ组)。通过莫里斯水迷宫(MWM)实验测试仔鼠学习记忆能力。通过苏木精伊红染色(HE)、尼氏染色及免疫组化观察仔鼠海马神经元的形态结构、成熟神经元核蛋白(NeuN)和突触相关蛋白(SYN)的表达情况。结果①PTU组雌鼠较CON组TSH显著增高、FT4显著减低(P<0.05)。②在定位航行试验中,各组仔鼠到达平台的躲避潜伏期均表现逐渐缩短。第5天,Ⅰ组仔鼠到达平台的潜伏期较CON、Ⅱ、Ⅲ组明显延长(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ组与CON组变化不大(P>0.05)。③空间探索阶段Ⅱ组仔鼠的滞留时间与Ⅰ组相比有明显差异(P<0.05);I组的仔鼠穿越平台次数与CON、II、III组有明显差异(P<0.05)。④各组仔鼠海马组织HE染色和尼氏染色无明显差异。但与CON组相比,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组仔鼠海马组织NeuN、SYN蛋白的平均吸光度值均显著降低(P<0.05)。结论甲状腺功能减退对妊娠大鼠子代认知功能及海马神经元发育会产生不良影响,孕期不同阶段干预对子代认知功能的影响不同,干预越早,对认知功能的损伤越小。

靶向STAT3通过调控糖酵解及间皮间充质转分化改善腹膜透析相关腹膜纤维化

目的研究高糖对人腹膜间皮细胞系(HMrSV5)间皮-间充质转化(MMT)的影响及机制,以及药理阻断信号转导和转录激活因子(STAT3)对大鼠腹膜的保护作用。方法将动物分为3组:假手术组(Sham组)、模型组和STAT3抑制剂组。在大鼠背侧皮肤下手术植入微型腹膜透析导管,每日注射高糖透析液诱导大鼠腹膜纤维化模型。10周后,苏木精-伊红(HE)染色观察腹膜组织病理改变,免疫组化方法检测腹膜组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。模拟高糖微环境对HMrSV5进行细胞培养,转染si-STAT3,Western blot方法检测STAT3蛋白和磷酸化水平及糖酵解相关代谢酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶-3(PFKFB3)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达。结果HE染色显示STAT3抑制剂(BP-1-102)可抑制高糖透析大鼠的腹膜下组织增厚及血管增生。模型组大鼠腹膜组织TGF-β1蛋白表达显著高于假手术组,STAT3抑制剂组大鼠腹膜TGF-β1蛋白表达显著低于模型组(P<0.05)。与对照组相比,高糖诱导HMrSV5细胞STAT3激活,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的上调和E-钙黏蛋白(E-cadherin)下调(P<0.05)。此外,高糖处理导致间皮细胞糖酵解相关代谢酶(PFKFB3、LDHA)的表达增加(P<0.05)。si-STAT3能有效抑制高糖诱导的间皮细胞STAT3活化,降低高糖诱导的PFKFB3、LDHA和α-SMA高表达,同时升高E-cadherin水平(P<0.05)。结论STAT3信号通路参与高糖诱导的HMrSV5过度糖酵解和MMT的发生,靶向STAT3有助于减轻大鼠腹膜透析液诱导的腹膜纤维化和血管新生。

基于第二课堂的大学生创新能力培养途径的探索

第二课堂是提升大学生综合素质与实践能力的重要渠道,是高校科技创新人才培养不可缺少的育人课堂,也是全面落实素质教育的基本途径。本实验室为开展大学生第二课堂途径进行了多方位的积极探索,总结了第二课堂在大学生综合素质提升、能力培养和教学相长中的独特作用。

在校大学生创新实验项目的实践与管理

基于目前大学生实践操作能力以及创新思维薄弱的现状,通过创建开放实验平台,组建实验平台师资队伍,面向在校大学生开展创新性设计性实验项目。以期培养大学生实践动手能力、团队协作精神以及基本科研素养,同时推动实验室自身建设,促进教师科研能力的提升,深化实验教学改革,达到师生双赢的目的。

二次微波修复法和高压过修复法在免疫组织化学显色中的比较

免疫组织化学是免疫学和形态学的完美结合。因其既能确定抗原在组织和细胞中的位置，还可进行半定量分析，已成为临床病理诊断的重要工具。随着抗体产品的完善和抗原修复方法的改进，免疫组织化学也被广泛运用至科学研究中，是检测目的蛋白在组织和细胞中表达的有效方法之一。临床病理科和实验室中免疫组织化学显色多运用甲醛固定、石蜡包埋组织，然后进行抗原修复。抗原修复是免疫组织化学实验过程中最关键的步骤。

浅谈高校仪器共享平台实验技术人员综合素质培养和提升

大型仪器共享平台是高等院校提高教学、科研水平的重要实验场所,支撑相关学科的建设和人才培养,共享平台对外开放效益与平台技术人员的综合素质密不可分。为使平台运转良好,拥有一支具有优良的职业素养、扎实的专业技能、不竭的创新素质的实验队伍至关重要。该文通过提出并分析平台技术人员的现状与问题,结合实际,初步探索出提升其综合素质的方式方法,并归纳出切合实际的技术人员的激励措施,对于稳定实验技术人员队伍具有重要意义。

科研反哺教学在医学本科生教学中的探索及意义

2012年教育部《关于全面提高高等教育质量的若干意见》提出＂实施卓越医生教育培养计划，探索拔尖创新人才培养模式，促进科研与教学互动，及时把科研成果转化为教学内容＂。该意见为高校教师提出了更高的要求，即如何有效地将高校科研资源转化为教学资源？所谓科研反哺教学，指的是高校利用科研平台的优势转化为教学优势，从而促进教学质量的提高。众所周知，教学是科研的基础，可以指导和推进科研的发展；而科研是教学的目的，有助于完善教学内容，促进教学改革。因此如何探索科研反哺教学的新思路、新途径？如何将科研成果有机、合理地融人教学内容？是摆在每一位教师面前的重要课题。现就我们10来开展“科研反哺教学”的工作总结如下。

小鼠感染日本血吸虫肝脏损害的动态观察

目的动态观察和探讨小鼠感染日本血吸虫肝脏虫卵肉芽肿病变及纤维化与血清学改变的相关性。方法小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴,定期剖杀小鼠,观察肝脏大体变化并测定肝脏系数;HE染色及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度;ELISA检测血清谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT)含量。放免法检测血清透明质酸(HA),层粘连蛋白(LN),Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量。结果肉眼观察感染后24d肝脏表面开始出现出血点,29d开始出现粟白色肉芽肿;HE染色发现感染后21d肝脏可见灶性炎症,28d始见虫卵,但无肉芽肿反应,29d可见肉芽肿反应并于42d达到高峰;血清ALT/AST在28d明显升高,39d达到高峰,42d开始下降,70d接近正常水平;统计学分析血清转氨酶水平与肉芽肿面积具有相关性。Masson染色表明肝脏纤维化42d开始出现,以后逐渐加重;血清HA、LN随着纤维化的出现而升高,Ⅳ-C水平无明显改变,但统计分析胶原染色面积与血清纤维化指标无相关性。结论肝脏虫卵肉芽肿和纤维化均是导致小鼠血吸虫病肝脏损害的主要原因,血清转氨酶变化与肝脏的肉芽肿病变动态相一致,并呈显著正相关;血清纤维化指标与肝脏早期纤维化病变无相关性。

非小细胞肺癌组织中MMP-9、TIMP-1表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达及其生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测76例NSCLC和癌旁正常组织中MMP-9、TIMP-1的表达,并分析其表达与肺癌组织类型、肿瘤大小、TNM分期、分化程度、淋巴结转移的相关性。结果 MMP-9、TIMP-1在肺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。NSCLC中MMP-9、TIMP-1表达与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移有相关性(P<0.05),与肿瘤病理分型无关(P>0.05)。结论检测NSCLC中组织的MMP-9、TIMP-1的表达对判断肿瘤的恶性程度和预后评估有一定的意义。

衰老对大鼠视网膜全层及各层厚度影响的体视学研究

目的应用体视学方法探讨衰老对大鼠视网膜总厚度及各层厚度的影响。方法选择健康青年(3月龄)和老年(24月龄)Long-Evans大鼠各6只,每只大鼠行右侧眼球矢状位连续切片,在视网膜全部组织切片中进行系统随机抽样,HE染色,采用显微成像系统进行视网膜总厚度及各层厚度测量。结果与青年组大鼠比较,系统随机抽样法测量结果显示,老年组大鼠视网膜总厚度及多层厚度均明显变薄,视网膜各层厚度占视网膜总厚度的构成比基本不变。外丛状层厚度减少幅度最显著,达46.2%。结论衰老引起大鼠视网膜总厚度及各层厚度不同程度的变薄,尤以外丛状层变薄最明显,系统随机抽样法更能准确地反映衰老对视网膜各层厚度的影响情况。

外源性Leptin减轻大鼠肺缺血再灌注损伤及其保护作用机制

目的研究大鼠肺缺血再灌注损伤后血清炎症因子及肺组织相关酶活性的变化,并探讨外源性瘦素(Leptin)在肺缺血损伤中的作用及可能机制。方法建立大鼠肺缺血再灌注损伤模型,并用外源性Leptin干预治疗,对各组术后肺组织匀浆中丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、血清C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和核因子-κB(NF-κB)浓度进行分析和比较,并观察各组肺组织病理学改变。结果缺血再灌注组血清炎症指标CRP、TNF-α、NF-κB浓度较假手术组明显升高,用外源性Leptin预处理后的炎症指标浓度较缺血再灌注组有显著下降(P<0.05)。肺组织匀浆MPO、MDA水平测定结果同样显示Leptin预处理组的肺组织匀浆酶学指标较缺血再灌注组有显著下降(P<0.05)。组织学病理显示缺血再灌注组肺损伤严重;Leptin预处理组肺泡结构较完整,炎症改变相对较轻,水肿及出血较再灌注组明显减少。结论运用外源性Leptin后肺缺血再灌注损伤明显减轻;外源性Leptin对肺缺血再灌注损伤有保护作用,可能与减轻脂质过氧化反应及炎性细胞浸润有关。

曲张大隐静脉平滑肌细胞形态学改变

目的探讨大隐静脉曲张与平滑肌细胞(SMC)形态学改变之间的关系。方法临床术中收集正常及曲张大隐静脉标本,制作石蜡切片进行HE染色观察SMC一般组织学变化;制作超薄切片置透射电镜下观察SMC超微结构变化。结果光镜下曲张大隐静脉内膜增厚,SMC数量增多;中膜增厚,SMC形态异常,排列紊乱;电镜下SMC形态不规则,胞浆中粗面内质网、核糖体和线粒体丰富,肌丝少。结论大隐静脉曲张的发生和发展与SMC细胞形态学改变密不可分。

白藜芦醇对H2O2处理的佐剂性关节炎大鼠软骨细胞增生的影响及与自噬的关系

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对H2O2处理的佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠软骨细胞增生的影响及其与自噬的关系。方法采取弗氏完全佐剂注射SD大鼠左侧足趾皮下制作AA动物模型。第15天时,动物处死,取股动脉血,检测AA大鼠氧化应激状态。酶消化法体外培养和鉴定AA大鼠原代软骨细胞,给予低浓度H2O2(5μmol/L)处理原代软骨细胞,模拟体内氧化应激状态。给予不同浓度Res处理,MTT法检测软骨细胞增生活性,激光共聚焦检测软骨细胞中自噬相关基因5(Atg5)的表达,Western blot法检测软骨细胞中p62、Beclin-1自噬相关蛋白的表达。结果组织染色结果显示:AA大鼠踝关节滑膜组织增生,滑膜中炎细胞明显浸润,软骨膜的连续性被破坏,排列紊乱。AA模型中血清丙二醛含量(11.65±1.06)μmol/L增加,谷胱甘肽过氧化物酶含量(140.18±8.65)μmol/L、超氧化物歧化酶活性(133.72±8.36)U/mL均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞组织化学染色示原代软骨细胞胞质Ⅱ型胶原表达阳性。不同浓度Res(1、3、5、10、20、40、80、160 mg/L)可抑制H2O2处理的软骨细胞增生,抑制率分别为(2.2±0.4)%、(5.3±0.6)%、(12.1±1.3)%、(26.6±2.4)%、(40.3±3.1)%、(52.7±4.2)%、(69.2±4.5)%、(72.5±5.1)%,呈剂量依赖性(P<0.05);半数致死量值为37.2 mg/L。软骨细胞质中Atg5绿色荧光呈剂量依赖性增加;软骨细胞中p62蛋白表达呈剂量依赖性降低,Beclin-1蛋白表达呈剂量依赖性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Res可抑制氧化应激状态下AA大鼠软骨细胞增生,其作用机制可能与Res诱导的软骨细胞自噬改变有关。

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞parkin表达及线粒体自噬形成

目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法:无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞;200 ng/ml LPS作用巨噬细胞,JC-1标记线粒体,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;RT-PCR检测巨噬细胞parkin mRNA水平;Western blot检测parkin及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平;激光共聚焦显微镜分别检测巨噬细胞在LPS处理前后parkin在细胞内的分布及与LC3和线粒体三者的共定位情况。结果:JC-1染色流式细胞仪检测结果显示,LPS处理后,巨噬细胞线粒体膜电位降低,并随LPS作用时间延长呈持续下降趋势;parkin mRNA在LPS处理6 h内仅有少量的增加,但parkin蛋白水平在LPS刺激6 h后增加明显;parkin在巨噬细胞定位结果表明,未受LPS处理时parkin呈弥散均匀分布,而LPS刺激后parkin呈明显的点状聚集;Western blot检测结果显示巨噬细胞在LPS刺激后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增大,表明巨噬细胞发生明显的自噬;激光共聚焦显微镜结果显示,巨噬细胞在LPS刺激后,parkin、LC3和线粒体三者存在共定位关系。结论:巨噬细胞在LPS刺激后,parkin表达增加并介导线粒体自噬形成,参与对损伤线粒体的清除,可能在巨噬细胞参与的炎症反应中发挥一定的调控作用。

被动吸烟对子鼠海马神经元内钙／钙调蛋白激酶的影响

本文通过建立实验组孕鼠被动吸烟模型,21d后剖腹产,取子鼠脑组织,采用HE染色、Nissl染色、免疫组化染色和计算机图像分析等方法,探讨子鼠海马神经元内钙/钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化。结果显示:CaMKⅡ免疫阳性产物分布于子鼠大脑海马神经元胞质内,胞核呈阴性。对照组和实验组子鼠海马神经元内CaMKⅡ平均光密度分别为0.310±0.057和0.192±0.029(P<0.05)。上述结果证实:孕鼠妊娠期被动吸烟使子鼠海马神经元内CaMKⅡ表达减少,可能对子鼠学习记忆能力有一定影响。

超声医学科住院医师规范化培训方法的探讨

参加住院医师规范化培训的学生普遍存在基础知识薄弱、水平参次不齐、动手和科研能力差,同时也存在考核体系不完善等问题。为提高教学质量,通过强化基础知识训练、强化超声动手能力培养、加强科研能力培养,并完善评估制度、健全考核体系等,以期能为各级医疗机构培养具有良好职业道德、丰富理论知识、熟练操作技能、能独立和规范地承担诊疗工作的超声医学人才。

晚期糖化终产物受体在小鼠急性肝损伤中的表达及意义

目的探讨晚期糖化终产物受体(RAGE)在刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤中的表达及意义。方法将72只昆明种小鼠随机分为对照(NS)组、ConA组,分别于注射后2、6、12、18、24、48 h眼球取血并留取肝脏标本,用赖氏法检测血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力;HE染色法检查肝组织病理学改变;RT-PCR技术检测肝组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)、RAGE、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-lβ)mRNA的表达;免疫组化法检测肝组织HMGB1蛋白的表达;Westernblot法检测肝组织RAGE蛋白的表达;ELISA法检测血清中TNF-α、IL-lβ含量。结果成功构建ConA诱导小鼠肝损伤模型;注射ConA 2 h肝组织中HMGB1 mRNA表达即增加,至18 h达峰值(P<0.01);HMGB1蛋白表达明显聚集于坏死区域;肝组织RAGE mRNA于12 h表达上调;RAGE蛋白的表达于24 h达到峰值,与NS组相比差异有统计学意义(P<0.01);肝组织TNF-αmRNA表达分别在6、24 h出现2个峰值,血清TNF-α含量在注射ConA 2 h达峰值(455.25 ng/L),随后逐渐减低,至48 h与NS组相比无明显差异;注射ConA各时间点小鼠肝组织与血清中IL-1β水平均显著高于NS组(P<0.01)。结论在ConA诱导小鼠急性肝损伤模型中,损伤肝组织RAGE的表达显著增加,这可能与诱导肝组织损伤中炎症因子的进一步产生有关。

高脂血症大鼠下颌下腺内AQP1和AQP5表达及意义

目的观察高脂血症大鼠下颌下腺内AQP1和AQP5表达的变化。方法雄性S D大鼠20只,随机分为2组,对照组(C组)给予全价颗粒饲料喂养;高脂饮食组(H组)给予高脂饮食(饲料成分为胆固醇2%、猪油10%、基础饲料88%)连续喂养2个月,各组动物均不限制饮水。2个月成模后,取血检测血脂;取大鼠下颌下腺组织,进行免疫组织化学染色(SP法)和计算机图像分析。结果①血脂检测结果:C组TG与H组TG比较有显著性差异(P<0.05);C组TC和H组TC比较有显著性差异(P<0.05)。②免疫组化结果:C组大鼠下颌下腺AQP1平均光密度值与H组AQP1平均光密度值比较有差异性(P<0.05);C组大鼠下颌下腺AQP5平均光密度值与H组AQP5平均光密度值比较有差异性(P<0.05)。结论高脂血症大鼠下颌下腺导管上皮细胞内AQP1和AQP5的表达减少,为探讨高脂血症导致下颌下腺分泌功能降低的病理机制提供了形态学依据。

饥饿和再进食对小鼠下丘脑中obestatin表达的影响

目的观察饥饿和再进食对小鼠下丘脑弓状核中obestatin表达的影响,探讨下丘脑弓状核中obestatin在摄食调节中的作用。方法 50只♂昆明小鼠随机分为5组:A组为饥饿0h,B组为饥饿24h,C组为饥饿48h,D组为饥饿72h,E组为饥饿72h后再进食4h。采用免疫组化法检测饥饿不同时段和再进食后下丘脑弓状核中obestatin表达的变化。结果 B、C、D、E组弓状核obestatin表达水平均明显低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。与D组比较,E组弓状核obestatin表达略升高,差异无统计学意义(P>0.05),A、B、C、D组弓状核obestatin表达呈逐渐降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 obestatin在弓状核中高表达,饥饿可减少obestatin在弓状核中的表达,再进食后无明显变化。提示弓状核中obestatin可能通过其表达的减少参与饥饿状态时摄食行为的调节,而对短期再进食状态时的摄食行为无调节作用。