人硫氧还蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及对内毒素血症小鼠的保护作用

为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现 ,TRX蛋白可明显促进去细胞因子诱导的NFS 6 0细胞增殖和撤血清后MCF 7细胞的增殖 ,并发现外源性TRX可明显对小鼠内毒素血症起保护作用 .

MTT法分析肺泡Mφ上清促纤维母细胞生长活性

本文对MTT比色法用于检测肺泡巨噬细胞上清对纤维母细胞的促生长活性的条件进行了探讨。结果表明:对于实验所选用的三种纤维母细胞,即NIH3T3细胞、人胚肺纤维母细胞、大鼠肺纤维母细胞,在细胞浓度为1×10~5-5×10~6/ml之间,和经低血清浓度(0.4％FCS)培养4—5天后,MTT比色法能较为敏感地反映出矽肺大鼠肺泡巨噬细胞上清对三种纤维母细胞的促生长效应。

BXSB小鼠外周B淋巴细胞凋亡的初步研究

外周Ｂ细胞异常增生是系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）突出的免疫学异常表现之一。近年来愈来愈多的研究表明淋巴细胞凋亡异常与包括ＳＬＥ在内的多种自身免疫病的发生有关。本文采用ＴＵＮＥＬ法结合流式细胞分析技术，对ＳＬＥ模型－ＢＸＳＢ小鼠脾脏中Ｂ细胞凋亡的情况进行了检测，发现该小鼠脾脏Ｂ细胞凋亡发生率明显高于正常对照小鼠。提示Ｂ细胞凋亡异常可能与ＳＬＥ小鼠Ｂ细胞的异常增生有关。

公共教学部举办健康饮食知识讲座

在2013年国际“三八”妇女节来临的前夕，北京大学医学部公共教学部工会邀请北京市肿瘤医院临床营养科的方玉老师为广大教职工带来了一场题为“舌尖上的健康：合理膳食，远离癌症”的健康饮食知识讲座。公共教学部党委书记吴玉杰，公共教学部党委副书记刘大川和来自公共教学部各工会小组的教职工兴趣盎然地聆听了讲座。这次健康知识讲座由公共教学部副主任、工会主席袁小平主持。

重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性

目的 :提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性。方法 :利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA ,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区 (HSA D3)的融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。分别对Klenow酶和Klenow HSA融合蛋白进行纯化 ,并进行活性及稳定性的研究。结果 :发现Klenow HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达。体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性 ,其稳定性明显提高。结论 :融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性 。

人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

目的 :为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法 :利用RT PCR技术从人外周血单核细胞系U937cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ (AnnexinⅤ )cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2AnnexinⅤ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化 ,可除去MS2细菌蛋白 ,再经离子交换层析纯化 ,可得成熟的AnnexinⅤ纯品 ,FITC标记后的AnnexinⅤ可用于细胞凋亡的检测。结果 :在大肠杆菌表达的人重组AnnexinⅤ占菌体蛋白的 5 6 % ,经纯化获得 99%纯度的非融合型AnnexinⅤ ,FITC标记的An nexinⅤ能有效地检测凋亡细胞。结论 :成功地建立了批量获取AnnexinⅤ的技术路线 。

脑室注射白细胞介素1受体拮抗剂对抗束缚应激免疫抑制因子的产生

我们以前的工作发现束缚应激小鼠血清里存在一种能抑制淋巴细胞转化的蛋白。本工作研究了脑内白细胞介素１（ＩＬ－１）对这种血清蛋白产生的作用。脑室注射白细胞介素１受体拮抗剂（ＩＬ－１Ｒａ）能抑制这种血清蛋白的产生，并呈量效关系。注射５．０μｇＩＬ－１Ｒａ时，几乎完全对抗此蛋白的产生。脑室注射１ｐｇＩＬ－１β则对此蛋白的产生有增强作用；腹腔注射ＩＬ－１β或ＩＬ－１Ｒａ，均无影响。以上结果表明脑内ＩＬ－１在束缚应激血清抑制蛋白的产生过程中起有很重要的作用。脑室注射ＩＬ－１β的剂量小至０．０６ｆｍｏｌ对血清抑制蛋白的产生有增强作用，表明脑内ＩＬ－１可能是中枢神经系统与免疫系统之间的一种重要调节物。

趋化因子新变异体MPIF-1β重组蛋白的纯化和活性分析

目的 为深入研究趋化因子新变异体MPIF 1β的结构与功能 ,利用pKPL3a MPIF 1β表达质粒进行原核表达、纯化工艺研究及活性检测。方法 MPIF 1β重组蛋白以包涵体形式存在 ,占总菌体蛋白的 15 % ,工程菌经超声破碎 ,包涵体洗涤 ,变性、复性、肝素SepharoseCL 6B亲和层析 ,CMSepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0层析分离获得目的蛋白。结果 还原SDS PAGE分析相对分子质量 15 0 0 0u ,纯度 99.0 % ,纯化倍数 6 .6倍 ,总回收率 9.0 7%。体外生物学活性检测证明MPIF 1β重组蛋白对小鼠骨髓集落形成具有抑制作用 ,对U937细胞具有趋化活性 ,且呈一定的剂量依赖关系。结论 建立了简便可行的MPIF 1β重组蛋白纯化路线 ,初步证明了MPIF

BXSB小鼠胸腺中B细胞和Ig分泌细胞的检测

采用反向溶血空斑技术和杂交瘤融合技术证明BXSB小鼠胸腺中Ig分泌细胞(IgSC)增多、并与鼠龄的增加呈正相关,而雄性BXSB小鼠胸腺中IgSC增多的趋势比雌性BXSB小鼠的显著。BXSB小鼠胸腺中IgSC和B细胞的动态变化基本平行。实验结果提示不同月龄与性别的BXSB小鼠胸腺中IgSC和B细胞的数量不同与发病程度相关。此外,采用杂交瘤技术从胸腺中分离出单克隆的IgSC,可对其所产生的Ig的性质和病理作用作进一步研究。

人血单核细胞IL-1的制备与活性单位测定

本文报告应用人血白细胞血小板悬液和静脉血(3—5ml)54份,分离单核细胞用于产生IL-1。用小鼠胸腺细胞增殖法测定IL-1活性及滴定其活性单位。结果用人血白细胞血小板悬液制备的IL-1测定其单位平均为1265U/ml,此含IL-1的细胞培养上清液用于进一步提纯IL-1。54份血标本测定IL-1活性单位平均为64.12±113.5U/ml,计算其正常范围是0-291U/ml。应用免疫点迹法测定培养上清液中IL-1的特异性,结果测定样品与标准IL-1在硝酸纤维膜上均呈现同样的斑点,说明它们有共同的特异性。

BXSB小鼠胸腺内单克隆免疫球蛋白分泌细胞的分离与鉴定

用杂交瘤技术从成年雄性BXSB小鼠胸腺细胞随机制备出1株分泌Ig的单克隆杂交瘤细胞,并对它们所产生的单克隆Ig类别及对自身抗原的反应性进行了鉴定。结果表明,杂交瘤细胞产生的单克隆Ig中,IgG类别的多于IgM类别,显示BXSB小鼠胸腺内产生各类Ig的浆细胞比例与正常小鼠胸腺内以产生IgM的浆细胞为主的情况不同。此外,BXSB小鼠胸腺内浆细胞产生的Ig仅少数为自身抗体。

重组凋亡相关蛋白PDCD5的纯化及稳定性

目的 :建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线 ,获得高纯度的PDCD5蛋白 ,并观察其稳定性。方法 :以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白 ,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAESepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0两步层析分离获得PDCD5蛋白。选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度 ,SDS -PAGE检定蛋白质的稳定性。结果 :经毛细管电泳方法检测PDCD5蛋白纯度为 10 0 % ,相对分子质量 15 80 0 ,等电点 5 .9。生物学活性分析PDCD5蛋白能够促进撤除细胞因子的HL 6 0细胞的凋亡 ,呈现一定的量效关系。稳定性研究发现储藏中的PDCD5蛋白不稳定 ,对温度敏感 ,4℃和 2 5℃极易降解 ,而 - 2 0℃和冻干保存则相对稳定。结论 :本研究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度PDCD5蛋白。稳定性实验提示PDCD5宜在 - 2 0℃以下或冻干保存。

矽肺大鼠肺泡MΦ上清中生长因子的分离纯化

本文对经ＳｉＯ＿２体内暴露４～５周的矽肺大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ）上清中促纤维母细胞（ＦＢ）生长的物质进行了分离纯化。由高压液相层析（ＨＰＬｃ）分析结果表明，与正常对照大鼠ＡＭ相比。矽肺大鼠ＡＭ在经体外６ｈ的无血清培养后，上清中含有两个组分的促ＦＢ生长的活性组分。第一组分位于分子量约３５～６０ＫＤａ区间，保留时间为７～９ｍｉｎ，有轻度的促ＦＢ生长活性和ＩＬ－１及ＴＮＦ活性；第二组分位于分子量６～９ＫＤａ区间，保留时间为１２～１４ｍｉｎ，有明显的促ＦＢ生长活性。但不具有任何可检测的ＩＬ－１和ＴＮＦ活性，提示矽肺状态下ＡＭ可能主要通过这种非ＩＬ－１和ＴＮＦ样物质的大量释放而促进ＦＢ的增生，并进而导致肺间质的广泛纤维化。

大鼠肾脏白细胞介素1受体mRNA表达的研究

利用分子杂交原理，我们采用斑点杂交和原位杂交实验，证明了在正常大鼠肾脏有白细胞介素－１Ｉ型受体特异ｍＲＮＡ表达，分布于肾脏皮质和髓质。用兔抗大鼠肾皮质血清诱导产生的大鼠肾炎模型肾组织，其白细胞介素－１Ｉ型受体特异ｍＲＮＡ表达量明显高于正常肾组织，尤其髓质部分较为显著。肾脏固有细胞如上皮细胞及肾小球中某些细胞（可能为系膜细胞）在正常情况下有少量介素－１Ｉ型受体ｍＲＮＡ表达，随着炎症的产生表达量明显增高。我们的实验结果为白细胞介素－１在肾脏中的功能通过结合白细胞介素－１特异受体的作用机制，白细胞介素－１在肾脏中的自泌与旁泌作用方式，在分子水平上提供了实验依据。

中国生理学会成立85周年庆典大会在京召开

生理学应势回归迎来共赢发展的春天1926年,北京协和医学院生理学系主任林可胜教授发起并联合生化学系主任吴宪教授与药理学系主任伊博恩(B.E.Read)教授共同创建中国生理学会,至今已走过85年辉煌岁月。诺贝尔生理学/医学奖获得者伊万.彼得罗维奇.巴甫洛夫和弗雷德里克.哥兰.霍普金斯等8位享誉世界的生理学家都是中国生理学会的名誉会员。学会肩负历史重任,在曲折中昂首奋进,多年来培养出国家杰出青年基金获得者47人,

SLE动物模型自身免疫状况的观察——抗核抗体和B细胞功能的测定

本文采用间接免疫荧光法(IIF)和反向溶血空斑法(RPFC),对BXSB、NZW两种鼠的自身免疫状况做了较系统的观察。结果表明:BXSB、NZW的抗核抗体(ANA)滴度以BXSB雄民最高,且随着月龄的增加而增高。NZW鼠的ANA水平接近BXSB雌鼠,其雌鼠的滴度高于雄鼠。BXSB鼠脾中和骨髓中的免疫球蛋白分泌细胞(IgSC)在发病中所起的作用可能不同。

BXSB小鼠外周B淋巴细胞异常增生的研究

系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）突出的免疫学异常表现是Ｂ淋巴细胞的异常增生与活化，其发生机制至今不明，本文以遗传性自发性ＳＬＥ模型ＢＸＳＢ小鼠为对象，采用体内ＢｒｄＵ标记法及ＨＵ增殖细胞删除法研究了ＢＸＳＢ小鼠脾脏Ｂ细胞的增殖动力学。结果表明，与正常对照相比，ＢＸＳＢ小鼠脾脏Ｂ细胞更新速率明显增高。提示Ｂ细胞更新加速可能是ＢＸＳＢ小鼠外周Ｂ细胞异常增生的原因。

矽肺等肺部疾患病人的两项细胞免疫检测

取矽肺(5例)、结节病(5例)及肺肿瘤(13例)病人的枝气管肺泡灌洗液中的巨噬细胞,在24孔培养板中培养24小时,测定培养上清液中细胞自发释放的或经LPS 刺激后释放的IL-1含量,同时也对这些病人外周血中的T 细胞及其亚类作了计数检查。结果表明,矽肺病人肺泡巨噬细胞自发的或经LPS 刺激后产生IL-1的量均高于非矽肺的两种疾病组病人的相应值,可能具有一定的鉴别诊断意义。这三组病人血中的T 细胞总数及T_4细胞数较正常减少,反映他们的T 细胞免疫功能受到一定程度的继发损害。