重组腺相关病毒装载目的核酸完整性分析

目的探讨重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)装载目的核酸完整性检测方法,并初步建立分析算法。方法消化rAAV外游离DNA片段,提取病毒基因组,设计5对搭接引物,采用正交排列方式,分别用数字PCR仪进行检测,常规条件采用EveGreen和模板4μL的20μL反应体系,数字PCR条件:95℃5 min;95℃15 s,55℃30 s,72℃90 s,45个循环。超长核酸片段增强条件采用Mix B-2000 bp和模板2μL的25μL反应体系,采用仪器附带软件定量。最小二乘法拟合分析共有的全长片段数量,进而解读目的核酸完整性分布情况。结果引物间距离不大于1200 nt的片段可得到有效扩增,经系统分析得到一系列片段长约1000 nt的有效片段拷贝数,最小二乘法拟合分析共有片段拷贝数量,估计样本中全长片段不多于1234 copies/μL,该值与测得的最大值(1443 copies/μL)之间差异有统计学意义(P<0.05),差异占比约16.9%。结论初步建立了rAAV装载目的核酸完整性的检测方法,并分析出供试品中存在一定数量的不完整目的核酸,为后续深入研究奠定了基础。

M64×6超厚轧制滚丝轮的研制

我单位生产的B＆W、SUIZER船用低速柴油机中的贯穿螺栓、弹性螺栓均属高强度螺栓。对高强度螺栓螺纹的加工需在轧丝机上滚轧成形,因而螺纹的尺寸及 几何精度均靠滚丝轮的精度保证。我厂使用的滚丝轮一直是从国内几大工具厂定购，但采购价格偏高，工期也不能很好地跟上我们的生产节奏。此外，目前国内生产的滚丝轮厚度都〈200mm，且滚丝轮齿形采取磨制加工成形，磨制滚丝轮与轧制滚丝轮相比较存在许多不足，下面详细说明。