艾纳香配方颗粒定性定量方法及指纹图谱研究

目的建立艾纳香配方颗粒的定性定量方法及指纹图谱。方法分别采用TLC和HPLC对艾纳香配方颗粒中的原儿茶酸进行定性定量分析,用15批该颗粒建立指纹图谱。结果在与对照品、对照药材相应位置上,3批供试品显相同颜色清晰斑点,Rf值适中,阴性对照无干扰。原儿茶酸进样量在0.2748~10.9920 mg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.4%(RSD=1.2%,n=6)。15批颗粒的指纹图谱共标定12个共有峰,其相似度在0.935~0.997,并指认出5个色谱峰,分别为原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸、芦丁。结论所建立的定性定量方法简便可行,精密度及重复性良好,HPLC指纹图谱特征性强,可用于艾纳香配方颗粒的质量控制。

壳聚糖氧化石墨烯负载冬凌草甲素对A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究壳聚糖氧化石墨烯载体(CS-GO)负载冬凌草甲素(CS-GO-oridonin)对人肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响。方法:以A549细胞为对象,采用CCK-8法检测经不同质量浓度的CS-GO(3、6、12、24、48μg/mL)和负载了等质量冬凌草甲素的CS-GO-oridonin(3、6、12、24、48μg/mL,以冬凌草甲素质量计,下同)作用后的细胞存活率,并计算CS-GO-oridonin的半数抑制浓度(IC_(50));采用显微镜观察CS-GO和CS-GO-oridonin(均为32μg/mL)作用2、4、10、24 h后的细胞形态,并采用荧光标记法观察细胞对CS-GO、冬凌草甲素、CS-GO-oridonin(均为32μg/mL)的摄取情况;采用流式细胞术观察不同质量浓度CS-GO(16、32、64μg/mL)和CS-GO-oridonin(16、32、64μg/mL)作用后细胞的凋亡情况及细胞中活性氧(ROS)的含量,采用Westernblot法检测细胞中抗凋亡相关蛋白[髓样细胞白血病1(Mcl-1)、Bax、Bak]蛋白的表达情况。结果:经不同质量浓度CS-GO作用后,细胞的存活率仍不低于90%;经不同质量浓度CS-GO-oridonin作用后,细胞存活率呈下降趋势,且显著低于相同质量浓度的CS-GO组(P<0.01);CS-GO-oridonin的IC_(50)为32.61μg/mL。经CS-GO作用后,细胞形态未见明显改变;经CS-GO-oridonin作用后,细胞出现皱缩、成团脱落、悬浮物增多等现象;当细胞摄取冬凌草甲素和CS-GO-oridonin后,其荧光均较摄取CS-GO的细胞有所增强。与空白组比较,CS-GO 16、32、64μg/mL组细胞的凋亡率和细胞中ROS含量、凋亡相关蛋白的表达水平均无显著变化(P>0.05);而CS-GO-oridonin 16、32、64μg/mL组细胞的凋亡率、细胞中ROS含量和Bax、Bak蛋白的表达水平均显著升高,Mcl-1蛋白的表达水平均显著降低,且上述指标水平均显著高于或低于同质量浓度CS-GO组(P<0.05)。结论:CS-GO不会影响A549细胞的增殖及凋亡;CS-GOoridonin对细胞有明显的抑制和促凋亡作用,这种作用可能与增加细胞中ROS的产生、调控凋亡相关蛋白的表达有关。

白头翁皂苷组合物对帕金森病和阿尔茨海默病模型小鼠的改善作用

目的探讨白头翁皂苷B4和常春藤皂苷C(HSC,又名白头翁皂苷B5)质量比为4∶1的组合物对帕金森病和阿尔茨海默病模型小鼠的保护作用及机制。方法取60只健康雄性C57BL/6小鼠,随机抽取10只作为对照组,剩余50只小鼠ip1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病(PD)模型,模型构建成功后随机分为模型组、左旋多巴胺片(阳性对照,30 mg·kg^(-1))组和白头翁皂苷B4+HSC高、中、低剂量(20、10、5 mg·kg^(-1))组,每组10只,ig给药14 d,每天1次,对照、模型组小鼠ig等量0.9%的氯化钠溶液。每2天观察动物震颤行为出现与消失的时间,于给药第7、14天展开行为学实验并记录评分;HE染色法观察脑组织黑质病理学变化;免疫组化检测脑组织α-突触核蛋白表达;实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测小鼠脑组织多巴胺转运体(DAT)、酪氨酸羟化酶(TH)mRNA表达。将50只APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐(阳性药,1.5 mg·kg^(-1))组和白头翁皂苷B4+HSC高、中、低剂量(20、10、5 mg·kg^(-1))组,取10只同背景APP/PS1转基因阴性小鼠作为对照组,每天1次,连续ig给药28 d,模型组和对照组ig等量0.9%的氯化钠溶液。给药结束后进行行为学实验并记录评分;ELISA法检测小鼠血清中炎症因子白细胞介素(IL-6、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、环氧化酶2(COX-2)和氧化应激因子活性氧(ROS),试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果在PD模型小鼠中,与模型组比较,白头翁皂苷B4+HSC显著降低震颤麻痹评分(P<0.01、0.001),显著降低旷场实验评分(P<0.01、0.001),显著降低爬杆实验评分(P<0.01、0.001),显著降低悬挂实验评分(P<0.01、0.001),显著降低游泳实验评分(P<0.01、0.001),显著降低行为学实验综合评分(P<0.001),明显改善黑质体结构损伤,明显降低α-突触核蛋白表达,显著升高小鼠脑组织DAT和TH mRNA水平(P<0.05、0.01、0.001)。在AD模型小鼠中,与模型组比较,白头翁皂苷B4+HSC显著缩短水迷宫定位航行实验逃避潜伏期(P<0.001),明显延长在目标象限的累计停留时间(P<0.05、0.01、0.001),显著增加准确穿越平台所在位置的次数(P<0.05、0.01),显著降低血清炎症因子水平(P<0.05、0.01、0.001),显著降低ROS水平、升高SOD和GSH-Px的水平(P<0.05、0.01、0.001)。结论白头翁皂苷+HSC对PD和AD小鼠具有保护作用,可能通过发挥抗炎、抗氧化,改善脑组织和神经元损伤等来实现。