苹果蠹蛾性信息素结合蛋白Ⅱ(CpomPBP2)基因的克隆及原核表达

【目的】获得苹果蠹蛾性信息素结合蛋白Ⅱ(CpomPBP2)基因的全长序列,并在大肠杆菌BL21(DE3)中融合表达,为探明苹果蠹蛾雌雄间的信息素交流机制奠定基础。【方法】提取苹果蠹蛾触角总RNA,利用RT-PCR、3′-RACE和5′TAIL-PCR扩增技术获得CpomPBP2基因的全长序列;通过构建原核表达载体pET28aCpomPBP2对CpomPBP2进行重组表达与检测;并对融合蛋白pET28a-CpomPBP2进行Western blot鉴定及可溶性鉴定。【结果】以苹果蠹蛾触角总RNA为模板合成cDNA第一链,以cDNA为模板经RT-PCR、3′-RACE和5′TAILPCR扩增,得到CpomPBP2基因约3 000bp的全长序列;测序结果表明,CpomPBP2基因开放阅读框长约510bp,编码169个氨基酸,预测的成熟蛋白分子质量为16.45ku,等电点(pI)为5.09。经SDS-PAGE电泳分析表明,融合蛋白CpomPBP2以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为20ku。Western blot鉴定结果显示,获得了目标蛋白CpomPBP2。用终浓度1.0mmol/L IPTG诱导8h后,可获得大量融合蛋白。【结论】获得CpomPBP2的全长序列,成功构建了CpomPBP2的原核表达载体,经Western blot鉴定,CpomPBP2表达正确。

与时代同发展 与改革共前进 上海市普陀区领导与民营企业家举行纪念改革开放三十周年集体学习活动

三十春秋挥手间，芳菲四季绿堪染。在建党八十七周年前夕，上海宏泉丽笙酒店会议中心举行了由中共上海市普陀区委、普陀区人民政府主办的“我们与改革开放同行”——普陀区领导与民营企业家纪念改革开放三十周年集体学习活动。与会民营企业家畅谈了改革开放30年来所取得的伟大成果和非公有制经济的发展历程及自身的成长过程。同时也表达了企业要在今后的发展过程中，进一步牢固树立科学发展观。坚定不移地走科学发展的道路，承担起更多的社会责任的信念。并就如何进一步改善普陀投资环境、促进民营经济发展提出了建议和意见。