桑黄在古代中医典籍中的应用记载及其现代药用研究进展

桑黄是一种具有药用价值的真菌。古代医家总结桑黄具有活血止痛化瘀、补虚、收涩止痛、清热解毒等功效。近代国内外研究发现桑黄多糖具有抗肿瘤、提高免疫、抗炎、降血糖等药理作用;黄酮类及三萜类成分具有抗肿瘤、抗氧化活性。综述桑黄在古代中医典籍中的应用记载,并对近代国内外的研究及开发应用进行分析归纳。

正交设计法优选参附汤提取工艺

目的:优化参附汤的提取工艺。方法:采用正交实验设计,考察水的用量、提取时间、提取次数3个因素,以人参总皂苷含量、附子总生物碱含量和浸膏得率为评定指标,用综合评分法进行数据处理,对参附汤的提取工艺进行优化。结果:所考察的因素中,对提取工艺影响程度依次为:提取次数>水的用量>提取时间。参附汤最佳提取工艺为加10倍量的水,提取3次,每次提取0.5h。结论:该提取工艺合理,有效成分提取效率较高。

海马神经元细胞模型及其应用的研究进展

总结离体海马神经元细胞模型的制备方法及应用研究概况,以便合理利用该细胞模型开展相关研究。查阅近5年国内外有关离体海马神经元细胞模型的研究文献,发现该细胞模型在阿尔兹海默病、难治性癫痫、缺血性脑血管病等神经性疾病的病理机制研究及中药筛选中应用广泛,是目前神经生物学及神经药理学研究的重要内容。

HPLC法测定水溶性红曲中Monacolin K的含量

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定水溶性红曲中MonacolinK的含量。方法：采用Inertsil—ODSSP（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇：0．2‰的磷酸水溶液-75：25，流速1．0mL／min，检测波长238nm。结果：MonacolinK在0．04～0．64μg范围内线性关系良好：Y=3．469×10^6-38203，R^2=0．9998，平均回收率为98．07％，RSD为1．25％。结论：本方法操作简单、重复性好，可用于水溶性红曲中MonacolinK含量的测定。

大孔吸附树脂法同时纯化银杏叶中黄酮苷和萜类内酯

目的探讨大孔吸附树脂同时纯化银杏叶黄酮苷和萜类内酯的工艺条件。方法对D101、X-5、S-8、D4020、HP-20、AB-8 6种大孔吸附树脂进行筛选,然后对最佳上样量、除杂洗脱条件、洗脱剂乙醇体积分数及洗脱剂用量等因素进行了优化。结果 D101型大孔树脂分离纯化效果最佳。优化工艺条件为:上样液生药质量与树脂质量比为1∶1,20%(体积分数)乙醇作为除杂溶剂,洗脱体积为5 BV,60%(体积分数)乙醇作为洗脱液,洗脱体积为4 BV。纯化物中黄酮苷和萜类内酯平均质量分数分别为24.93%和7.36%。结论 D101大孔吸附树脂对银杏叶黄酮苷和萜类内酯的综合吸附性能较好,适用于银杏叶提取物的分离纯化。

颈总动脉结扎联合半乳糖注射制备老年期痴呆大鼠模型及行为学评价研究

目的探讨不同制备方法对痴呆大鼠模型学习记忆能力的影响,为药效评价提供老年期痴呆大鼠模型。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为5组:分期双侧颈总动脉永久结扎后D-半乳糖注射组(A组);D-半乳糖注射后分期双侧颈总动脉永久结扎组(B组);单次双侧颈总动脉永久结扎组(C组);D-半乳糖注射组(D组),正常对照组(E组),每组8只。除E组外,A组左侧颈总动脉结扎,间隔1周后行右侧颈总动脉结扎术;并于结扎术1周后行D-半乳糖腹腔注射(60 mg/kg体重,每天1次),共连续注射42 d;B组腹腔连续注射D-半乳糖(60 mg/kg体重)42 d后,再行双侧颈总动脉永久结扎术;C组仅行双侧颈总动脉永久结扎术42 d,腹腔不注射半乳糖;D组:仅连续腹腔注射D-半乳糖(60 mg/kg体重)42 d,不接扎其双侧颈总动脉。最后采用Morris水迷宫行为学测试法进行定位航行及空间探索实验;取各组大鼠海马CA1区进行电镜观察。结果与C、E组相比,A、B及D组游泳时间与距离均明显缩短,差异有统计学意义(P<0.01);而A组与B、D组之间差异无统计学意义(P>0.05);比较正常组各模型组海马CA1区锥体细胞有不同程度的丢失,且脑组织病理学改变明显。结论采用双侧颈总动脉永久结扎联合半乳糖腹腔注射方法,制备的老年期痴呆大鼠模型,记忆力明显减退,且脑组织病理学显著改变,能有效重现老年期痴呆患者的发病特点。

苦参配伍甘草的水煎液对小鼠急性毒性的影响研究

目的:研究苦参与甘草配伍后指标成分含量的变化及对小鼠急性毒性的影响。方法:采用口服灌胃给药,观察小鼠活动状态,记录1周死亡率,全自动生化分析仪测定小鼠血清生化指标,光镜下观察小鼠主要脏器的病理组织学变化;高效液相色谱法测定提取液中4种指标成分的含量。结果:苦参与甘草配伍后水煎液中4种指标成分的含量有变化;苦参配伍甘草小鼠死亡率降低,对小鼠部分生化指标有显著影响,对脑组织与肝脏组织病理学改变有影响。结论:苦参经甘草配伍后对小鼠的急性毒性降低,可能与水煎液中化学成分的含量变化有关。

艾叶挥发油对耳肿胀急性炎症模型小鼠的抗炎作用研究

目的:探讨艾叶油对小鼠耳肿胀急性炎症模型的抗炎作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀急性炎症模型,比较致炎剂保留时间与耳壳肿胀程度的关系,观察二甲苯滴耳致炎后不同时间小鼠耳壳肿胀度的变化,并观察艾叶挥发油在二甲苯致炎最佳时间的抗炎作用研究。结果:在二甲苯作用15min^180min范围时,小鼠耳壳肿胀程度与正常对照组比较有显著差异(P<0.05),二甲苯作用时间40min肿胀度达到最大值(P<0.01);艾叶挥发油低剂量、高剂量组对二甲苯致炎的小鼠耳肿胀均有显著的抑制作用(P<0.01),低剂量与阳性对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:采用二甲苯致炎模型进行实验研究时,二甲苯的最佳作用时间为40min左右;艾叶挥发油低剂量组对二甲苯致炎的小鼠耳肿胀的抑制作用更为明显。

补肾健骨类中药活性成分对高糖诱导成骨细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨柚皮苷、补骨脂二氢黄酮、淫羊藿苷等3种补肾健骨类中药活性成分对高糖诱导成骨细胞的保护作用和机制。方法:建立高糖诱导成骨细胞模型;实验设正常对照组、模型组(30mmol/L葡萄糖)和给药组。给药组为分别在模型细胞中加入补骨脂二氢黄酮组、柚皮苷组和淫羊藿苷。作用48h后,观察细胞形态,MTT法检测成骨细胞活性,RT-PCR检测成骨细胞中胰岛素受体底物(IRS1)、AKT、Runx2的mRNA表达,Western Blot法检测各组细胞IRS1、AKT、Runx2蛋白的表达。结果:高糖(5.4mg/ml)诱导的成骨细胞,48h后细胞存活率较正常组显著下降(P<0.05)。与模型组相比,淫羊藿苷组给药后48h,细胞存活率显著上升(P<0.05)。柚皮苷、补骨脂二氢黄酮、淫羊藿苷给药后,AKT、IRS1、Runx2的mRNA表达上升(P<0.05),AKT、IRS1、Runx2蛋白表达上升(P<0.05)。结论:柚皮苷、补骨脂二氢黄酮和淫羊藿苷对高糖诱导的成骨细胞具有保护作用,促进其增殖,作用机制可能与调控成骨细胞ISR1/AKT/Runx2信号通路有关。

超声辅助离子色谱法分析5种中药饮片中有机酸含量

随着天然产物化学和药理学研究的不断发展,越来越多的国内外学者开始重视中药中的有机酸类成分。建立快速、高效的有机酸检测方法,有利于阐明中药的药效机理,也有助于中药资源的深入开发。离子色谱法检测有机酸含量具有快速、有效、简单和自动化等优点。超声提取因其耗时少、消耗溶剂少、提取效率高、操作简便等特点,已成功应用于药品分析研究。

苦参碱对新生大鼠海马神经细胞的影响

苦参碱（Matrine）是豆科槐属植物苦参、苦豆子、广豆根等中草药的活性成分,具有广泛的生理活性[1]。本文在前期研究工作的基础上,进行苦参碱对原代大鼠海马神经细胞形态观察,用MTT比色法比较不同浓度苦参碱对神经细胞生存率的影响,

淫羊藿总黄酮调控miR-34a-5p保护成骨细胞脂多糖诱导性损伤的作用机制

目的探讨淫羊藿总黄酮(total flavones of epimedium,TFE)调控miR-34a-5p保护脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的成骨细胞损伤的作用机制。方法建立LPS诱导的大鼠成骨细胞模型,给予TFE含药血清,MTT法检测成骨细胞活性。构建荧光素酶报告基因,检测荧光活性,脂质体瞬时转染miR-34a-5p模拟物和抑制剂。RT-PCR分析转染前后miR-34a-5p、SMAD2、ALP、RUNX2mRNA的表达,Western blot检测SMAD2、RUNX2、ALP蛋白表达。结果TFE能提高LPS诱导的成骨细胞活性,促进RUNX2、ALP蛋白表达(P<0.01)。TFE在LPS诱导的成骨细胞中可促进miR-34a-5p的表达,抑制SMAD2的mRNA及蛋白表达水平。miR-34a-5p转染细胞后,显著降低荧光素酶报告基因的活性,促进成骨细胞RUNX2、ALP的蛋白表达。抑制miR-34a-5p可促进成骨细胞SMAD2mRNA及蛋白表达,并抑制成骨因子的表达(P<0.05),逆转了TFE对LPS诱导的成骨细胞损伤的保护作用。结论TFE通过调控miR-34a-5p与SMAD2相互作用,减轻LPS诱导的成骨细胞损伤。

血竭醇提物对大鼠穿支皮瓣模型存活及PI3K/Akt/eNOS通路的影响

目的:研究血竭醇提物对大鼠穿支皮瓣模型存活及PI3K/Akt/eNOS通路的影响。方法:采用只保留穿支血管切断其他血管的方法复制大鼠穿支皮瓣模型,造模成功后,将大鼠分为模型组(外敷,生理盐水)和血竭醇提取物(EESD,血竭素含量为75.08mg/g)组(外敷,0.21 g/cm^2),每组10只,连续敷药7 d,每天1次。敷药7 d后测定各组大鼠穿支皮瓣存活率、皮瓣微血管密度。将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧缺糖16 h后复氧复糖复制HUVEC缺氧缺糖/复氧复糖细胞模型,造模成功后,将细胞分为正常组、模型组和血竭素高、中、低浓度组(2.5、1.0、0.5μg/m L),于复氧复糖培养24 h后,采用显微镜观察各组细胞的形态,采用MTT法和比色法分别测定各组细胞的活性和细胞中一氧化氮(NO)的含量,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法检测丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达水平,PI3K蛋白的表达以及Akt、eNOS蛋白的磷酸化程度。结果:在大鼠实验中,与模型组比较,EESD组大鼠穿支皮瓣存活率、微血管密度均显著增加(P<0.01)。在细胞试验中,与正常组比较,模型组HUVEC细胞存活率、NO含量,PI3K、Akt、eNOS mRNA的表达水平,PI3K蛋白的表达以及Akt、eNOS蛋白的磷酸化程度均显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,血竭素高、中、低浓度组HUVEC细胞的存活率、NO含量,PI3K、Akt、eNOS m RNA的表达水平,PI3K蛋白的表达以及Akt、eNOS蛋白的磷酸化程度均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:EESD可提高大鼠穿支皮瓣模型的存活率,其机制可能与激活PI3K/Akt/eNOS通路保护内皮细胞有关。

HPLC法测定生白口服液灌胃后小鼠血浆中淫羊藿苷的含量

目的：建立小鼠口服生白口服液后血浆中淫羊藿苷浓度的RP-HPLC定量分析方法。方法：色谱柱-Agilent C18柱（4.6mm×250mm,5μm）,以乙腈（A）-3%醋酸（B）（25∶75）为流动相,流速为1mL/min,检测波长为270nm,血浆经蛋白沉淀后进样分析,以苯甲酸为内标物质,采用外标法定量。结果：淫羊藿苷与血浆中其他成分能很好分离,淫羊藿苷在0.66~33.0μg/mL之间线性关系良好（r=0.9996）,最低检测限为0.132μg/mL,平均回收率为97.92%,RSD为2.24%。结论：改方法准确、灵敏,可为淫羊藿苷的体内血浆药物浓度分析提供方法学参考。

去壁灵芝孢子粉改善乳腺癌患者辅助化疗期间癌因性疲乏研究

目的观察去壁灵芝孢子粉对乳腺癌术后辅助化疗患者癌因性疲乏的防治效果,为使用现代工艺加工的传统中药有效改善肿瘤患者生活质量提供依据。方法采用随机数字表法将浙江省肿瘤医院2021年11月—2023年3月收治的74例接受乳腺癌术后辅助化疗的女性患者分为治疗组(37例)和对照组(37例)。2组均给予4周期表柔比星(或多柔比星脂质体)联合环磷酰胺辅助化疗及相应的对症治疗;治疗组化疗同时口服去壁灵芝孢子粉2 g·d^(-1)治疗,对照组口服安慰剂对照。对比分析2组治疗前后癌因性疲乏发生率及疲乏严重程度、T淋巴细胞亚群、血清炎症因子、肠道菌群变化,以及药物对血常规、肝肾功能的影响。结果治疗组化疗后癌因性疲乏发生率及Piper疲乏修正量表评分显著低于对照组(P<0.05);CD3^(+)、CD4^(+)、CD3-CD56^(+)比例较对照组显著升高(P<0.05),而CD8^(+)比值较对照组显著降低(P<0.05);IL-2、IL-10计数高于对照组(P<0.05),而IL-6、IL-8、C反应蛋白计数低于对照组(P<0.05);白细胞、中性粒细胞及血小板计数显著高于对照组(P<0.05);肠道菌群在属水平普拉梭菌丰度高于对照组;2组肝肾功能指标无明显差异。结论去壁灵芝孢子粉能显著降低乳腺癌患者辅助化疗期间癌因性疲乏的发生率及疲乏程度,抑制炎症因子,调节肠道菌群及机体免疫。

淫羊藿苷对脂多糖诱导成骨细胞骨架F-actin损伤的保护作用

目的考察淫羊藿苷对成骨细胞骨架F-actin损伤的保护作用及其对相关信号通路的调控。方法采用脂多糖诱导大鼠成骨细胞损伤模型。实验分为空白对照组、模型组和0.1,1,10μg·mL^-1淫羊藿苷组,MTT法观察淫羊藿苷对成骨细胞活性的影响,TRITC-Phalloidin荧光染色观察淫羊藿苷对细胞骨架的影响,ELISA法测定各组成骨细胞中F-actin的含量,RT-PCR法测定细胞骨架RhoA和Cofilin的mRNA表达量。结果与空白对照组比较,100μg·mL^-1脂多糖能显著降低成骨细胞存活率(P<0.01);与模型组比较,1~10μg·mL^-1淫羊藿苷预处理后能显著提高细胞存活率(P<0.05或P<0.01);而0.1μg·mL^-1淫羊藿苷则无显著影响。与模型组比较,1~10μg·mL^-1淫羊藿苷能显著抑制成骨细胞F-actin解聚(P<0.05),抑制RhoA的mRNA表达(P<0.05或P<0.01),0.1~10μg·mL^-1淫羊藿苷能抑制Cofilin的mRNA表达(P<0.01)。结论淫羊藿苷对脂多糖诱导的细胞骨架F-actin损伤具有保护作用,其机制与抑制细胞骨架相关因子RhoA和Cofilin的mRNA表达有关。

不同淫羊藿中4种黄酮苷的含量及体外促成骨细胞增殖作用比较研究

目的:研究不同品种的淫羊藿中4种单体成分的含量差异,及体外促大鼠颅骨成骨细胞增殖的作用。方法:采用HPLC法,测定淫羊藿样品中淫羊藿苷和朝藿定A、B、C的含量;以SD乳鼠颅骨二次酶消化法培养成骨细胞,采用MTT法,测定4种单体,模拟不同淫羊藿含量配比的单体组合物对成骨细胞的增殖作用。结果:8个药材中湖北朝鲜淫羊藿含淫羊藿苷和朝藿定A最高;在1.0-100.0μg/m L浓度范围内,淫羊藿苷显著促进成骨细胞的增殖,作用呈浓度依赖性,朝藿定A显著促进成骨细胞的增殖,作用与浓度负相关,朝藿定B能促进成骨细胞增殖,朝藿定C对成骨细胞的增殖影响不大;各药材模拟组在0.1-10.0mg/m L生药浓度范围内,淫羊藿苷低浓度时能显著促进成骨细胞增殖,高浓度时增殖作用有所抑制,朝藿定B对成骨细胞增殖作用随浓度增大而增强,朝藿定C无明显增殖活性。结论:淫羊藿苷和朝藿定A、B单体均具有促进成骨细胞增殖活性;淫羊藿促成骨细胞增殖作用与4种成分的含量以及配比密切相关。

4种淫羊藿黄酮苷在成骨细胞中的吸收利用度比较

目的建立用于测定成骨细胞内外淫羊藿苷和朝藿定A、B、C含量的方法,并比较成骨细胞对这4种成分的吸收利用差异。方法采用UPLC法测定含量。色谱条件:Capcell C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-3%醋酸(24∶76)为流动相,流速为1 mL·min^(-1),检测波长为270 nm。采用外标法定量。结果 4种淫羊藿黄酮苷与培养基及细胞中的其他成分能很好分离。朝藿定A、B、C和淫羊藿苷分别在0.912~18.24 mg·L^(-1)、1.032~20.64 mg·L^(-1)、1.320~26.40 mg·L^(-1)和1.024~20.48 mg·L^(-1)内线性关系良好,平均回收率分别为97.92%、98.87%、96.36%和96.54%。给药培养24 h的成骨细胞对朝藿定A、B、C和淫羊藿苷的平均吸收率为11.94%、17.58%、37.69%和32.30%,平均转化利用率为80.49%、92.21%、87.50%和95.23%。结论建立的方法准确、灵敏,可为淫羊藿在成骨细胞内的药动学研究提供检测方法;4种黄酮苷中,成骨细胞对淫羊藿苷的吸收和利用最好。

附骨疽动物模型的制备及验证

目的:改进附骨疽动物模型的制备方法并完善模型验证指标。方法:将新西兰兔随机分为空白对照组、附骨疽模型组与细菌感染模型组,附骨疽模型组动物以冰敷(10min/d)15d,采用金黄色葡萄球菌局部感染方法造模,细菌感染模型组以金黄色葡萄球菌局部感染方法造模。以血液流变学指标、血液炎性反应指标、病理组织学指标验证模型。结果:附骨疽模型组与空白对照组比较,血液黏度增高(P<0.01),附骨疽模型组与细菌感染模型组比较,白细胞计数、超敏C反应蛋白显著升高(P<0.01);组织病理学检查显示:附骨疽模型组坏死组织范围较大,肉芽组织显著增多。结论:局部冰敷结合细菌感染的方法可用于附骨疽模型的制备,为附骨疽病因探究及中药疗效评价提供方法与依据。

南方红豆杉不同部位多糖含量提取分析研究

目的:探究南方红豆杉枝、叶中红豆杉多糖提取最佳工艺条件,分析比较其枝、叶中红豆杉多糖含量。方法:选取新鲜南方红豆杉枝、叶,利用响应面法(RSM)对其枝、叶中红豆杉多糖提取工艺进行优化。在单因素实验基础上选取实验因素与水平,根据中心组合实验设计原理采用3因素3水平的响应面分析法,依据回归分析确定各工艺条件的影响因子,以红豆杉多糖提取率为响应面值作响应面和等高线。结果:在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出南方红豆杉枝中红豆杉多糖超声最佳提取工艺条件为:水料比24∶1,超声提取功率90W,超声提取时间25min;南方红豆杉叶中红豆杉多糖超声最佳提取工艺条件为:水料比35∶1,超声提取功率70W,超声提取时间30min。南方红豆杉枝中红豆杉多糖一次提取率可达11.6405mg/g,叶中红豆杉多糖一次提取率可达45.8344mg/g。结论:南方红豆杉叶中红豆杉多糖含量比枝中高。