两步亲和层析纯化限制性核酸内切酶Bsp 63Ⅰ

以Bacillussphaericus63为材料 ,采用DNA Sepharose4B和CibacronBlueF3GA Sepharose4B两步亲和层析 ,分离纯化得到电泳均一纯限制性核酸内切酶Bsp 63Ⅰ .酶的得率约为 1 3 0单位 /g湿菌 ,比活力高达 61 4 0 0单位 /mg蛋白 .还报道了DNA -Speharose 4B两种亲和吸附剂制作方法的改进 .

限制性核酸内切酶Bsp78I的纯化

以Bacillus Sphaericus 78为材料,经亲和层析——高效液相色潜,分离纯化制得电泳纯的限制性核酸内切酶Bsp78I,得率为2020units/g湿菌。所纯化的酶经SDS—PAGE分析为一条带,并测得酶亚基分子量为72 000;经Sephadex G—200凝胶层析测得酶分子量为141 250,说明该酶由两个相同的亚基组成。用Edman降解法和HPLC ULTRASPHERE—PTH柱层析测得Bsp78I酶N—末端氨基酸残基是色氨酸。

限制性内切酶Bsp78I的化学修饰与动力学研究

从Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ７８菌中将Ｂｓｐ７８Ｉ纯化到均一程度．测得该酶对ｐＢＲ３２２ＤＮＡ的Ｋｍ值为２．６７×１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１．用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３一丁二酮修饰该酶巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明这些基团均与该酶活性有关．

嗜麦芽假单胞菌碱性蛋白酶的纯化及性质研究

嗜麦芽假单胞菌(Pseudomonas maltophilia)27分泌的胞外碱性蛋白酶(经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-200和 Sephadex G-75柱层析、聚丙烯酰胺凝胶制备电泳分离得到纯酶。此酶分子量为76000,由两个不同亚基构成(亚基分子量分别为31000和44000)。两条肽链 N 末端氨基酸是 Gly 和 Thr.酶作用最适 pH9.5,最适温度50℃,在40℃以内稳定。以酪蛋白为底物测得其 K_m 值为2.86 mg·ml^(-1)。此酶被 Hg^(2+)抑制,但在 Ca^(2+)、Mg^(2+)、Co^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)、Zn^(2+)中有相近活力,4mmol·L^(-1)的 EDTA 可抑制约36%的酶活。用 DFP 和 NBS 修饰对酶有强烈抑制作用,而 PMSF、pCMB、溴乙酸、丁二酮则对酶没有影响。